黔產(chǎn)百合多糖含量測定及降血糖活性研究

唐文文 沈易華 王丹丹

(銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 銅仁 554300)

百合是百合科(Liliaceae)百合屬(Lilium)植物的總稱，最早收錄于《神農(nóng)本草經(jīng)》，《中國藥典》(2015年版一部)規(guī)定，百合為百合科植物卷丹、百合或細(xì)葉百合的干燥肉質(zhì)鱗葉。中醫(yī)認(rèn)為百合性微寒平，具有養(yǎng)陰潤肺、清火安神的功效。百合是衛(wèi)生部審批通過的首批藥食兩用品，不僅在臨床上有著廣泛的應(yīng)用，還具有很好的保健作用，是不可多得的集藥用、食用和觀賞于一體的植物，有非常高的經(jīng)濟(jì)價值。

據(jù)貴州省植物志記載，貴州有8個品種，主要品種為野百合，淡黃花百合和龍牙百合。其中貴州務(wù)川縣生產(chǎn)野生百合粉具有幾十年的歷史，野生百合粉系列產(chǎn)品已經(jīng)成為貴州名優(yōu)特產(chǎn)。百合多糖是百合的主要活性成分之一，具有降血糖、提升免疫功能和抗氧化等藥理作用[1-3]。目前，關(guān)于百合的研究多集中在蘭州百合和宜興百合，關(guān)于貴州百合的成分測定和活性評價較少，本文通過對貴州產(chǎn)不同品種百合多糖的含量的測定和降血糖活性的評價，為貴州百合的進(jìn)一步開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實驗所用3種百合樣品均采之于貴州省各地，經(jīng)銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院梁玉勇教授鑒定，樣品來源見表1。

表1 樣品收集信息

無水乙醇、氯仿、正丁醇、苯酚、硫酸、葡萄糖均為分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；四氧嘧啶，源葉生物。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-1801紫外可見分光光度計(北京瑞麗儀器分析有限公司)；CP214電子天平(奧豪斯儀器有限公司)；HH恒溫水浴鍋(江蘇中大儀器科技有限公司)；KL-UP超純水機(jī)(成都超純科技)；SHZ-D循環(huán)水式多用真空泵(鞏義科華儀器設(shè)備有限公司)；可孚血糖測試儀(三諾生物)；可孚逸驪血糖試條(三諾生物)。

1.3 百合多糖的含量測定采用苯酚-硫酸法[4-5]。

1.3.1 對照品溶液的制備：

精密稱取在105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品0.1868g，置于100mL棕色量瓶中，用蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即可以得到葡萄糖對照品溶液。

1.3.2 苯酚溶液的制備：

精密稱取苯酚2.4497g倒入燒杯中，加入一定量的蒸餾水?dāng)嚢枋蛊涑浞秩芙猓_定容至50ml后，倒入棕色瓶中防止見光氧化分解。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

精密量取葡萄糖對照品溶液0、10ul、20ul、30ul、40ul、50ul、60ul加水定容至1ml搖勻，置具塞試管中，加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml，搖勻冷卻，室溫放置40分鐘，以1mL水加入相應(yīng)的試劑同樣操作為空白，在490nm處測吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)、對照品葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y=0.0126X+0.0202，R2=0.9993(n=7)，如圖1所示。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.3.4 供試品溶液的制備：

低溫烘干的百合鱗莖，粉碎，過篩，取百合粉末1g，加入95%乙醇50ml，用超聲儀超聲半小時，熱回流脫脂1.5h，過濾，濾渣加水50mL超聲半小時，再回流2h，趁熱抽濾，濾液全部轉(zhuǎn)移到100mL棕色量瓶中，用水定容至刻度，然后再用水稀釋50倍。

1.3.5 百合多糖的含量測定：

按1.3.3項下測定方法操作，將吸光度值帶入線性方程，結(jié)果見表2。

1.4 百合多糖降血糖活性評價

1.4.1 百合多糖的制備[6]：

新鮮百合→洗凈、晾干水分→70℃水浴提取8h→過濾→4℃醇沉過夜→沉淀復(fù)溶→Sevag法脫蛋白→再次醇沉、過濾→無水乙醇洗滌→低溫烘干得百合多糖→用純凈水制成1g/mL的多糖液，-20℃冰箱中保存。

1.4.2 動物實驗：

雄性Wistar大鼠，SPF級(中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所)。適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后，隨機(jī)取大鼠禁食8h，測定空腹血糖，作為該批次動物基礎(chǔ)血糖值。禁食24h，期間自由飲水，按照150mg/kg腹腔注射四氧嘧啶造模，第一天注射總量的55%，第二天注射總量的45%，完成后恢復(fù)進(jìn)食。造模后正常飼養(yǎng)5d后禁食8h，測血糖，血糖值≥10mmoL/L的為模型成功的動物[7]。

選造模成功的大鼠20只，按照空腹血糖值隨機(jī)分為模型組(DM)、百合多糖組(BH)兩組，每組10只，另取大鼠10只作為正常組(CN)，BH組按每日0.5g/kg百合多糖給藥，DM組及CN組給予同體積純凈水，連續(xù)30d。分別于第0，15d，30d時，禁食8小時，測空腹血糖值，并記錄。

2 結(jié)果

2.1 不同百合樣品多糖含量比較(見表2)

由表2可以看出，淡黃花百合多糖含量較高，為228.4mg/g；其次為銅仁地區(qū)引種的龍牙百合，最低的野百合。

表2 不同樣品多糖含量測定結(jié)果(n=3)

2.2 百合多糖對高血糖大鼠血糖值的影響(見表3)

由表3可見，注射四氧嘧啶后的大鼠血糖水平跟空白組比明顯升高，當(dāng)血糖水平大于10mmol/L時表明糖尿病模型成立，并且高血糖大鼠明顯尿量增多，給藥15d后，百合多糖給藥組血糖明顯下降，與模型組比差異極顯著(P<0.01)，給藥30d后，百合多糖給藥組血糖繼續(xù)下降。

表3 百合多糖高血糖大鼠血糖值的影響(n=10，

表3 百合多糖高血糖大鼠血糖值的影響(n=10，

組別血糖值(mmoL/L)0d15d30CN3.82±0.343.96±0.44??4.02±0.59??DM21.13±2.14a20.59±2.2119.79±3.26BH21.59±1.59a16.59±2.25??10.05±2.55??

注釋：*P<0.05，**P<0.01

3 討論

百合多糖作為百合重要的活性成分之一，《中國藥典》中并未有其多糖含量的測定方法，本實驗探索采用硫酸-苯酚法測定不同百合藥材中多糖的含量，結(jié)果顯示貴州不同產(chǎn)地的百合的多糖含量存在一定差異，其中淡黃花百合多糖含量最高，而野百合多糖含量最低，是否跟野百合的生長環(huán)境和生長年限有關(guān)，需要進(jìn)一步探究，另外引種而來的龍牙百合，多糖含量僅次于淡黃花百合，說明引種后的龍牙百合適宜在貴州生長，以后可加大種植面積。

本試驗對百合多糖的降血糖活性進(jìn)行評價，發(fā)現(xiàn)百合多糖具有較好的降血糖活性，為百合進(jìn)一步開發(fā)具有降糖功效的保健品、功能性食品、藥品打下基礎(chǔ)，百合多糖降血糖的機(jī)制研究，將在下一步實驗中進(jìn)行。