奧美拉唑腸溶膠囊HPLC含量測(cè)定方法建立研究

袁鷹，張悅，朱夢(mèng)凡，陳雨嫣，徐薇

（泰州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇泰州225300）

奧美拉唑，別名洛賽克，是由一個(gè)吡啶環(huán)通過亞礬基與苯并咪唑相連而構(gòu)成的苯并咪類化合物，是一種新型、高效、低毒的抗消化道潰瘍藥，易于在酸性環(huán)境中積聚，其能選擇性地抑制胃壁細(xì)胞的H+-K+-ATP酶,從而有效地抑制胃酸的分泌。奧美拉唑的含量測(cè)定有多種方法，紫外分光光度法操作簡(jiǎn)單，但易受輔料干擾；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用多用于多種成分同時(shí)定量；高效液相色譜法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性好，靈敏度高，應(yīng)用最為廣泛。因此，筆者建立適合奧美拉唑的高效液相色譜法（HPLC）含量測(cè)定方法。

1 儀器和材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀，LC-20A，日本島津制作所；紫外-可見分光光度計(jì)，日本島津公司；臺(tái)式pH計(jì)，上海梅特勒-托利多儀器有限公司；電子天平，Mettler AE240。

1.2 試劑與試藥

奧美拉唑?qū)φ掌?，中?guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100367-201706，含量100%；奧美拉唑腸溶膠囊，阿斯利康制藥有限公司，批號(hào)J20130093，規(guī)格20 mg；乙腈、磷酸氫二鈉、磷酸，色譜純；其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 供試品溶液的配制

取奧美拉唑腸溶膠囊，以氯化鈉的鹽酸溶液（取氯化鈉1 g，加鹽酸3.5 mL，加水至500 mL）500 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 rpm，依法操作，經(jīng)120 min時(shí)，在操作容器中加入預(yù)熱至37℃的0.235 mol/L磷酸氫二鈉溶液400 mL，轉(zhuǎn)速不變，繼續(xù)依法操作，定時(shí)吸取溶出液20 mL，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL，精密加入0.25 mol/L氫氧化鈉溶液1 mL，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液的配制

精密稱取奧美拉唑?qū)φ掌芳s20 mg，置于100 mL量瓶中，加入乙醇10 mL溶解后，用混合溶出介質(zhì)[氯化鈉的鹽酸溶液-溶出介質(zhì)（5：4)]稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置于50 mL量瓶中，用混合溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 mL，精密加入0.25 mol/L氫氧化鈉溶液1 mL，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.1.3 空白樣品溶液

按處方比例制備不含奧美拉唑的空白對(duì)照樣品，按2.1.2項(xiàng)下樣品溶液的制備方法制成空白樣品溶液。

2.2 色譜條件

精密量取奧美拉唑?qū)φ掌啡芤汉涂瞻讟悠啡芤哼m量，在190～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光吸收?qǐng)D譜掃描。根據(jù)掃描結(jié)果，奧美拉唑?qū)φ掌吩?02 nm、275 nm處有最大吸收，在253 nm、281 nm處有最小吸收，輔料不干擾測(cè)定，參考2015版《中國(guó)藥典（二部）》奧美拉唑腸溶膠囊含量測(cè)定項(xiàng)下的檢測(cè)波長(zhǎng)，選擇302 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

高效液相色譜分析采用島津LC-20A高效液相色譜系統(tǒng)，色譜柱采用Syncronis-C18反相色譜柱（150×4.6 nm，5 μm），流動(dòng)相為0.01 mol/mL磷酸氫二鈉(磷酸調(diào)節(jié) pH 至 7.6)-乙腈(70∶30)，流速 1.0 mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量20 μL，理論塔板數(shù)按奧美拉唑峰面積計(jì)算,不得低于2 000。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 專屬性實(shí)驗(yàn)

精密量取供試品、對(duì)照品以及空白樣品溶液各20 μL注入色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果顯示：供試品與對(duì)照品溶液的保留時(shí)間一致，空白樣品溶液對(duì)奧美拉唑的測(cè)定無干擾，如圖1、圖2和圖3所示。

2.3.2 線性關(guān)系考查

精密量取對(duì)照品溶液5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL、30 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以奧美拉唑質(zhì)量為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明：奧美拉唑?qū)φ掌吩谝欢ǚ秶鷥?nèi)峰面積與質(zhì)量之間線性關(guān)系良好（Y=41 262X-2 632.1，r2=1.000 0），見表1、圖4。

圖1 空白樣品溶液的HPLC色譜圖

圖2 供試品溶液的HPLC色譜圖

圖3 對(duì)照品溶液的HPLC色譜圖

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍考查實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖4 奧美拉唑腸溶膠囊含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取20 μL對(duì)照品溶液6個(gè)樣品，記錄色譜圖，結(jié)果顯示：6份對(duì)照品測(cè)定精密度良好，RSD為0.17%，如表2所示。

2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密量取20 μL對(duì)照品溶液注入高效液相色譜儀，測(cè)定6個(gè)樣品，記錄色譜圖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，此方法重復(fù)性良好，如表3所示。

2.3.5 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取奧美拉唑20 mg置于100 mL容量瓶中，加入乙醇20 mL、磷酸鹽緩沖液（pH=11.0）約60 mL，超聲處理使奧美拉唑溶解，用pH=11.0的磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，過濾。精密量取續(xù)濾液1 mL，置于10 mL量瓶中，用pH=11.0的磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為100%比例的供試品溶液。同法，分別稱取奧美拉唑16.00 mg、24.00 mg，配制成80%、120%2個(gè)濃度的溶液，每個(gè)濃度各3份樣，另精密稱取奧美拉唑?qū)φ掌?0 mg，同法配制對(duì)照品溶液。量取20 μL配制好的樣品注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，將實(shí)測(cè)值和理論值比較，計(jì)算回收率分別為99.7%、99.5%和99.6%，RSD分別為0.9、0.6和0.8，表明該測(cè)定方法的準(zhǔn)確度良好，能夠準(zhǔn)確反映制劑中奧美拉唑的真實(shí)含量，如表4所示。

表2 精密度測(cè)定結(jié)果（n=6）

表3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表4 回收率實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果（n=3）

表5 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.3.6 耐用性實(shí)驗(yàn)

將對(duì)照品溶液放置于室溫環(huán)境中，分別在放置0 h、2 h、4 h、6 h、8 h時(shí)取樣20 μ L注入色譜儀中，結(jié)果表明，奧美拉唑溶液在8 h內(nèi)測(cè)定色譜峰面積無明顯變化，待測(cè)組分化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，如表5所示。

2.4 樣品的測(cè)定

取奧美拉唑腸溶膠囊樣品，按2.1項(xiàng)下樣品溶液及對(duì)照品溶液的制備方法操作，精密量取樣品溶液和對(duì)照品溶液各20 μL，按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，結(jié)果顯示，樣品的含量為99.88%，RSD(n=6)為0.20%。

3 結(jié)論

奧美拉唑原輔料相容性研究、含藥丸芯上藥率、腸溶微丸的含量測(cè)定等研究?jī)?nèi)容均需對(duì)主成分奧美拉唑進(jìn)行定量分析，高效液相色譜法由于操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性好，靈敏度高，應(yīng)用最為廣泛。筆者通過本文建立的高效液相色譜法，經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，所建立的含量測(cè)定方法靈敏度高，專屬性好，準(zhǔn)確度和精密度均符合要求，可以用于奧美拉唑的含量測(cè)定。