基于“白芍不同炮制方法的對(duì)比研究”探討《中藥炮制學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革

杜洪志，柴慧芳，李 瑋，陳志琳，迮薇薇，王建科

(貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550025)

中藥炮制學(xué)是中醫(yī)藥高等院校中藥學(xué)、中藥制藥、中醫(yī)學(xué)等相關(guān)專(zhuān)業(yè)的必修課，該課程以研究中藥炮制原理及理論、改進(jìn)炮制工藝、制定飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等為主要任務(wù)，是保證臨床用藥的安全有效、穩(wěn)定可控的重要學(xué)科。炮制技術(shù)是我國(guó)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)、保證飲片質(zhì)量的關(guān)鍵技術(shù)，該技術(shù)的傳承與創(chuàng)新，除了要有扎實(shí)的理論作指導(dǎo)，更要有熟練的實(shí)踐操作技能和準(zhǔn)確的判斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。

中藥材經(jīng)炮制后得到中藥飲片，其質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到臨床療效，飲片質(zhì)量又包括內(nèi)在質(zhì)量和外在質(zhì)量[2]，外在質(zhì)量主要通過(guò)成品性狀來(lái)評(píng)價(jià)，內(nèi)在質(zhì)量主要以有效成分或組分含量的高低進(jìn)行質(zhì)量控制。然而，中藥炮制中影響成品質(zhì)量的因素較多(如火力、火候、操作、輔料等)。因此，對(duì)于初學(xué)者來(lái)說(shuō)，不同炮制方法，如何有效、直觀(guān)地判斷飲片質(zhì)量，其內(nèi)在質(zhì)量和外在質(zhì)量有著怎樣的聯(lián)系，是本門(mén)課程實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革中存在的問(wèn)題和研究方向。

基于此，本文以中藥炮制學(xué)中設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)——白芍不同炮制方法的對(duì)比研究為例，通過(guò)教學(xué)設(shè)計(jì)、文獻(xiàn)檢索、課程安排、結(jié)果分析、討論交流、教學(xué)反饋等實(shí)驗(yàn)教學(xué)思路，逐步建立學(xué)生對(duì)中藥炮制中質(zhì)量變化的感官判斷標(biāo)準(zhǔn)，提高對(duì)該門(mén)課程的學(xué)習(xí)興趣，進(jìn)一步培養(yǎng)學(xué)生的綜合實(shí)踐能力和自主創(chuàng)新精神[3]。本研究結(jié)果為探討中藥炮制學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革與學(xué)生科研能力培養(yǎng)提供依據(jù)和參考。

1 課程教學(xué)背景

中藥炮制學(xué)是遵循中醫(yī)藥理論體系，在繼承中藥傳統(tǒng)炮制技術(shù)和理論的基礎(chǔ)上，研究中藥炮制的理論、工藝、規(guī)格、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、歷史沿革及其發(fā)展方向的學(xué)科，具有實(shí)踐性強(qiáng)、知識(shí)面廣的特點(diǎn)。中藥炮制學(xué)的學(xué)習(xí)與研究既要繼承傳統(tǒng)中藥炮制技術(shù)與經(jīng)驗(yàn)，領(lǐng)會(huì)炮制精神，又要秉持創(chuàng)新發(fā)展理念，結(jié)合現(xiàn)代研究方法，改進(jìn)炮制工藝，汲取精華，創(chuàng)新炮制技術(shù)，進(jìn)一步提高中藥飲片質(zhì)量。

2 研究?jī)?nèi)容

2.1 教學(xué)內(nèi)容

以白芍為研究對(duì)象，采用HPLC法，探討白芍不同炮制方法對(duì)芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的影響，通過(guò)學(xué)生設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究。

2.2 實(shí)施方案

2.2.1 實(shí)驗(yàn)安排與設(shè)計(jì) 選擇30人進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。自由組合成4組，每組約7～8人，指定組長(zhǎng)，統(tǒng)一負(fù)責(zé)安排小組具體實(shí)驗(yàn)任務(wù)。通過(guò)查閱文獻(xiàn)資料，撰寫(xiě)相關(guān)文獻(xiàn)綜述，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和研究思路，設(shè)計(jì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)方案，再由指導(dǎo)老師審核其方案的可行性，審核通過(guò)后，開(kāi)始實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中為學(xué)生提供相關(guān)的研究平臺(tái)和條件，并對(duì)學(xué)生進(jìn)行實(shí)時(shí)指導(dǎo)和分析。

2.2.2 儀器與試藥 LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津：二元泵、SPD-20A檢測(cè)器)；Agilent HC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；千分之一電子天平(型號(hào)JT-5003，余姚市金諾天平儀器有限公司)；真空干燥箱(型號(hào)DZ-2BC，天津市泰斯特儀器有限公司)；超聲波清洗儀(型號(hào)HS10260D，天津恒奧科技公司)。

芍藥內(nèi)酯苷(批號(hào)：GZDD-0690，≥99%，貴州迪大科技有限責(zé)任公司)；芍藥苷(批號(hào)：GZDD-0045，≥99%，貴州迪大科技有限責(zé)任公司)；乙醇、磷酸為分析純；乙腈、甲醇為色譜純；水為娃哈哈純凈水。

白芍藥材購(gòu)自四川省，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物與栽培教研室魏升華教授鑒定為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根。

2.2.3 方法與結(jié)果 炮制方法：①生品：取白芍片，大小分檔，除去雜質(zhì)，即可。②炒黃：取凈白芍片，置預(yù)熱鍋中，用文火炒至表面微黃色至黃色，取出，攤開(kāi)放涼。③炒焦：取凈白芍片，置預(yù)熱鍋中，用中火炒至表面棕黃色至焦黃色，取出，攤開(kāi)放涼。④土炒：取灶心土(或黃土)細(xì)粉置鍋中，用中火加熱至靈活狀態(tài)，加入凈白芍片，拌炒至白芍表面均勻掛土粉時(shí)，微顯焦黃色，取出，篩去土粉，攤開(kāi)放涼。每100 kg白芍片，灶心土(或黃土)30 kg。⑤麩炒：取凈白芍片備用，先將鍋燒熱，快速均勻撒入麥麩，用中火加熱，待麩下濃煙起時(shí)立即投入白芍片，不斷翻動(dòng)，炒至顏色為亮黃色時(shí)，取出，篩去麥麩，攤開(kāi)放涼。每100 kg白芍片，麥麩10 kg。⑥酒炙：取凈白芍片，加黃酒拌勻，悶潤(rùn)至透，待酒被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至近干，取出晾涼。每100 kg白芍片，黃酒10 kg。⑦酒潤(rùn)麩炒：取凈白芍片，加黃酒拌勻，悶潤(rùn)至透，待酒被吸盡后，晾涼備用，每100 kg白芍片，黃酒10 kg；取晾干后的酒潤(rùn)白芍片，先將鍋燒熱，快速均勻撒入麥麩，用中火加熱，待麩下濃煙起時(shí)立即倒入白芍片，不斷翻動(dòng)，炒至顏色變亮黃色時(shí)，取出，篩去麥麩，放涼。每100 kg酒潤(rùn)白芍片，麥麩10 kg。⑧醋炙：取凈白芍片，加米醋拌勻，悶潤(rùn)至透，待醋被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒干，取出晾涼。每100 kg白芍片，米醋15 kg。⑨醋潤(rùn)麩炒：取凈白芍片，加米醋拌勻，悶潤(rùn)至透，待醋被吸盡后，晾涼備用。每100 kg白芍片，米醋15 kg；取晾干后的醋潤(rùn)白芍片，先將鍋燒熱，快速均勻撒入麥麩，用中火加熱，待麩下濃煙起時(shí)立即投入白芍片，不斷翻動(dòng)，炒至顏色變亮黃色至深黃色時(shí)，取出，篩去麥麩，放涼。每100 kg醋潤(rùn)白芍片，麥麩10 kg。不同炮制方法樣品見(jiàn)圖1。

注：A.生品；B.炒黃；C.炒焦；D.土炒；E.麩炒；F.酒炙；G.酒潤(rùn)麩炒；H.醋炙；I.醋潤(rùn)麩炒。

芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量測(cè)定：①對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱(chēng)取干燥至恒重質(zhì)量的芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成含芍藥內(nèi)酯苷0.038 mg/mL、芍藥苷0.062 mg/mL的混合對(duì)照品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

②供試品溶液的制備：取白芍粉末約0.1 g，精密稱(chēng)定，置100 mL具塞錐形瓶中，加入70%乙醇45 mL，稱(chēng)定重量，超聲提取(功率300 W，50 kHz)30 min，取出放冷，稱(chēng)重，加70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

③色譜條件：Agilent HC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈-0.1%磷酸(16∶84)為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm；柱溫30 ℃；流速為1 mL/min；進(jìn)樣體積為10 μL。理論塔板數(shù)不低于2 000。對(duì)照品及樣品色譜見(jiàn)圖2。

注：A.芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品；B.芍藥苷對(duì)照品；C.白芍樣品。

④方法學(xué)考察：精密吸取混合對(duì)照品溶液2 μL、6 μL、10 μL、14 μL、18 μL注入高效液相色譜儀中，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣體積為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得芍藥內(nèi)酯苷回歸方程為：Y=1×106X-6128，R2=1；芍藥苷回歸方程為：Y=1×106X-31340，R2=0.999 9；結(jié)果表明芍藥內(nèi)酯苷在0.076～0.684 μg，芍藥苷在0.124～1.116 μg范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

通過(guò)精密度試驗(yàn)，穩(wěn)定性試驗(yàn)，重復(fù)性試驗(yàn)，RSD均小于3%，符合相關(guān)要求，通過(guò)加樣回收率試驗(yàn)，平行制備6份樣品，減半稱(chēng)樣，平均回收率為100.93%，RSD值為2.13%。

樣品含量測(cè)定：按照“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備樣品，精密吸取白芍樣品溶液，按照“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定白芍不同炮制方法樣品中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的含量，采用外標(biāo)工作曲線(xiàn)法進(jìn)行含量計(jì)算。每個(gè)樣品平行3份樣，分別計(jì)算平均百分含量(%)及相關(guān)RSD值。含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 白芍不同炮制方法中芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)

由研究結(jié)果可知，白芍經(jīng)過(guò)炮制后，芍藥苷的含量均有所降低，而不同炮制方法中，以醋炙法含量最高，以炒焦法含量最低，而芍藥內(nèi)酯苷的含量，除醋炙外，均有所下降，但下降的趨勢(shì)不明顯。結(jié)果表明，不同炮制方法對(duì)白芍內(nèi)在成分芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷有一定影響，芍藥苷受炮制方法的影響較大。

2015版《中國(guó)藥典》白芍的炮制方法為酒白芍和炒白芍，根據(jù)研究結(jié)果，酒炙后芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量均有所下降，炒白芍主要以炒黃為主，若溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(如炒焦)，對(duì)內(nèi)在成分芍藥苷的影響較大；而醋炙后，與生品比較，芍藥苷含量下降相對(duì)較少，芍藥內(nèi)酯苷含量甚至有所升高，而醋炙的炮制目的是緩和寒性，增強(qiáng)養(yǎng)血斂血、疏肝解郁之功，表明不同炮制方法與內(nèi)在成分之間有一定的相關(guān)性，然其關(guān)聯(lián)性如何判定，內(nèi)在成分的變化是否與炮制目的、功效的變化相關(guān)，有待進(jìn)一步研究論證。

2.3 實(shí)驗(yàn)總結(jié)和討論

每個(gè)實(shí)驗(yàn)小組根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并結(jié)合相關(guān)炮制方法、炮制目的、關(guān)鍵工藝、影響成品性狀的因素、注意事項(xiàng)等進(jìn)行總結(jié)和討論，并書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。指導(dǎo)老師根據(jù)研究結(jié)果，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行評(píng)價(jià)，再將相關(guān)的注意事項(xiàng)、重點(diǎn)和難點(diǎn)、炮制前后藥性的變化與成分變化的相關(guān)性等進(jìn)行具體分析，使學(xué)生對(duì)中藥炮制的認(rèn)識(shí)更加明確，進(jìn)一步提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，加深對(duì)知識(shí)點(diǎn)的掌握。

3 教學(xué)效果反饋

通過(guò)學(xué)生參與設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案、撰寫(xiě)研究綜述、實(shí)驗(yàn)前期培訓(xùn)、后期數(shù)據(jù)處理分析等過(guò)程，進(jìn)一步提高了學(xué)生創(chuàng)新學(xué)習(xí)和自主學(xué)習(xí)的能力。

(1)經(jīng)過(guò)整個(gè)實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生明白白芍的炮制方法，并掌握不同炮制方法的注意事項(xiàng)。

(2)通過(guò)HPLC色譜分析，使學(xué)生掌握白芍炮制前后芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的變化及HPLC色譜分析操作注意事項(xiàng)。

(3)針對(duì)同一藥材，通過(guò)不同炮制方法的比較，使學(xué)生對(duì)不同炮制工藝的成品性狀有非常直觀(guān)地認(rèn)識(shí)和了解，再結(jié)合內(nèi)在成分的變化，對(duì)相關(guān)影響質(zhì)量的因素更為清晰，掌握重要知識(shí)點(diǎn)更為牢固。

(4)貴州特色炮制方法主要為潤(rùn)藥后麩炒(如酒潤(rùn)麩炒、蜜潤(rùn)麩炒等)，經(jīng)過(guò)開(kāi)展該實(shí)驗(yàn)，為設(shè)計(jì)其他藥材炮制方法奠定了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

4 實(shí)驗(yàn)教學(xué)反思

4.1 存在的問(wèn)題

(1)中藥炮制學(xué)實(shí)驗(yàn)課多采用課前講解、學(xué)生實(shí)驗(yàn)、教師巡回指導(dǎo)的教學(xué)方法。整個(gè)過(guò)程被動(dòng)接受，學(xué)習(xí)興趣不高，沒(méi)有較好發(fā)揮學(xué)生的創(chuàng)造性思維。

(2)具體實(shí)驗(yàn)操作中，只能對(duì)中藥飲片的外觀(guān)性狀有一個(gè)感官認(rèn)識(shí)，不同炮制方法對(duì)其內(nèi)在質(zhì)量的影響不清楚。

(3)由于對(duì)中藥炮制認(rèn)識(shí)不夠，相關(guān)炮制方法關(guān)鍵工藝點(diǎn)不清晰，使得不能較好地傳承與創(chuàng)新“中藥炮制”這一特色技術(shù)。

4.2 解決措施

根據(jù)中藥炮制存在的問(wèn)題，結(jié)合本次設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)“白芍不同炮制方法的對(duì)比研究”，若能在中藥炮制學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，引入科研思維，融入科研實(shí)驗(yàn)，逐漸闡明炮制關(guān)鍵工藝點(diǎn)，將會(huì)有效提升學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，提高創(chuàng)新思維能力。

(1)做好實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，豐富課堂教學(xué)。學(xué)生作為中藥炮制的初學(xué)者，不清楚這門(mén)傳統(tǒng)學(xué)科存在的相關(guān)問(wèn)題，這就需要指導(dǎo)老師做好實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)并進(jìn)行引導(dǎo)，層層深入，結(jié)合不同教學(xué)方法豐富實(shí)驗(yàn)課堂，逐漸激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，開(kāi)拓學(xué)生思維，激發(fā)自主探究的欲望。

(2)積極引導(dǎo)，傳承與創(chuàng)新。提高學(xué)生的學(xué)習(xí)能力，首先要激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的主動(dòng)性、積極性。根據(jù)學(xué)生提出的實(shí)驗(yàn)方案，教師要結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)平臺(tái)對(duì)實(shí)驗(yàn)的可行性進(jìn)行判斷，針對(duì)擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題著重論述，積極引導(dǎo)學(xué)生。經(jīng)過(guò)一到兩次的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，使學(xué)生對(duì)其他同類(lèi)藥材的炮制研究有了實(shí)驗(yàn)思路，為其他藥材的深入研究奠定了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，開(kāi)拓了學(xué)生的創(chuàng)新思維能力[4]。

(3)提供良好平臺(tái)，提高綜合實(shí)踐能力。實(shí)驗(yàn)課堂主要是為了提高學(xué)生的綜合實(shí)踐能力，然而，實(shí)踐能力的提高，與實(shí)驗(yàn)平臺(tái)密切相關(guān)。當(dāng)前，高校學(xué)生實(shí)驗(yàn)課不僅僅是簡(jiǎn)單的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，要培養(yǎng)學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的深刻認(rèn)識(shí)，闡明實(shí)驗(yàn)原理，科學(xué)解釋實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，則需要良好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。特別是中藥炮制這類(lèi)傳統(tǒng)與現(xiàn)代緊密結(jié)合的學(xué)科，很多炮制目的只有理論，沒(méi)有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支撐，此時(shí)，更需要學(xué)生積極探索，整體感知實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，進(jìn)一步培養(yǎng)刻苦鉆研、積極探索的精神[5]。

5 結(jié)語(yǔ)

中藥炮制學(xué)是一門(mén)傳統(tǒng)與現(xiàn)代密切結(jié)合的綜合性專(zhuān)業(yè)技術(shù)學(xué)科，藥材經(jīng)過(guò)炮制成飲片后才能入藥是中醫(yī)藥學(xué)的一大特色，中藥飲片質(zhì)量的好壞直接影響著中醫(yī)臨床療效。因此，秉承中藥炮制“傳承創(chuàng)新”的教學(xué)理念，改進(jìn)教學(xué)方法，提高學(xué)生對(duì)中藥炮制的認(rèn)識(shí)，領(lǐng)會(huì)炮制精神，有效培養(yǎng)相關(guān)的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人才是中藥飲片行業(yè)、中醫(yī)藥行業(yè)的迫切需要。而在具體實(shí)踐教學(xué)中，要加強(qiáng)教學(xué)改革，積極探討，并結(jié)合中藥炮制學(xué)科特色，靈活地將科研和教學(xué)有機(jī)結(jié)合[6]，進(jìn)一步激發(fā)學(xué)生創(chuàng)造性思維，培養(yǎng)學(xué)生積極探索精神，提高學(xué)生自主學(xué)習(xí)能力，讓新時(shí)代中醫(yī)藥專(zhuān)業(yè)的大學(xué)生成為知識(shí)的主動(dòng)獲取者和解決實(shí)際問(wèn)題的設(shè)計(jì)者，為中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展貢獻(xiàn)一份力量。