王蓀璇,妙苗,王嫦鶴,劉雪峰,鄧穎鵬
作者單位:陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院,陜西 西安710065
氯化鉀緩釋片的主成分為氯化鉀(KCl),屬于電解質(zhì)補(bǔ)充藥,主要用于治療各種原因引起的低鉀血癥,如進(jìn)食不足、嘔吐、嚴(yán)重腹瀉、應(yīng)用排鉀利尿藥、低鉀性家族周期性癱瘓、長(zhǎng)期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素和補(bǔ)充高滲葡萄糖等[1];還用于預(yù)防低鉀血癥,如病人存在失鉀的情況,尤其是如果低鉀血癥對(duì)病人危害較大時(shí)(如洋地黃化的病人),需預(yù)防補(bǔ)充鉀鹽[2]。
溶出度試驗(yàn)在評(píng)價(jià)口服固體制劑內(nèi)在品質(zhì)和仿制藥研發(fā)中越來(lái)越發(fā)揮舉足輕重的作用,在多種溶出介質(zhì)中進(jìn)行藥品溶出曲線的測(cè)定,是評(píng)價(jià)口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要手段。本研究自2018年6—9月選擇4種不同溶出介質(zhì)測(cè)定不同批次樣品的累積溶出量,繪制體外多條溶出曲線,從而模擬藥物的體內(nèi)釋放行為。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的仿制藥參比制劑目錄(第八批)通告中氯化鉀緩釋片參比制劑的規(guī)格分別為600毫克∕片和750毫克∕片,國(guó)內(nèi)仿制藥的規(guī)格為500毫克∕片,因規(guī)格不同,故本研究中未使用參比制劑。
溶出曲線相似性的比較,多采用非模型依賴法中的相似因子(?2)法,計(jì)算?2因子時(shí),采用互相之間作為參比的計(jì)算方法,通過(guò)?2因子計(jì)算結(jié)果可進(jìn)一步分析出三批樣品之間工藝與釋放情況的差異。
1.1儀器SOTAX AT.7X溶出儀;METTLER XPE105電子分析天平;METTLER T5電位滴定儀;METTLER 411-SG電極;Thermo ICE 3500原子吸收分光光度計(jì);天大天發(fā)ZKT-18F真空脫氣儀。
1.2試劑與藥品氯化鉀對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,生產(chǎn)批號(hào)100708-200401);氯化鉀緩釋片(某企業(yè)提供)3批(生產(chǎn)批號(hào):S01、S02、S03);鹽酸(優(yōu)級(jí)純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);硝酸銀滴定液(0.01 mol∕L,F(xiàn)=1.000);鉻酸鉀(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);磷酸(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);氫氧化鉀(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);磷酸二氫鉀(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);氯化鈉(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);水為自制脫氣純化水。
根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》以及日本橙皮書(shū)相關(guān)內(nèi)容,采用《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0931第二法裝置,轉(zhuǎn)速為50r∕min,分別以水、pH 4.5緩沖液、pH 6.8緩沖液和pH 1.2鹽酸溶液為溶出介質(zhì),介質(zhì)體積為900 mL,取樣時(shí)間為1、2、4、6、8、10 h,取樣體積為10 mL并即時(shí)補(bǔ)充相同體積相同溫度的相同溶出介質(zhì)。
3.1電位滴定法[6]
3.1.1 供試品溶液的制備 取3批樣品各12片,分別在3種溶出介質(zhì)(pH 4.5緩沖液、pH 6.8緩沖液和水)中試驗(yàn),按“2”項(xiàng)下的溶出條件取不同時(shí)間點(diǎn)的溶出液,用0.45μm濾膜濾過(guò),分別精密量取續(xù)濾液各5mL,加純化水適量,沒(méi)過(guò)電極,再加入鉻酸鉀指示液4滴。
3.1.2 空白溶液的制備 精密量取溶出介質(zhì)5 mL,按“3.1.1”項(xiàng)下的方法同法制備。
3.1.3 測(cè)定方法 分別取“3.1.1”、“3.1.2”項(xiàng)下供試品溶液、空白溶液,用硝酸銀滴定液(0.01 mol∕L,F(xiàn)=1.000)滴定,使用銀電極滴定至電位突躍點(diǎn),每1 mL硝酸銀滴定液(0.01 mol∕L,F(xiàn)=1.000)相當(dāng)于0.745 5 mg的KCl。同步測(cè)定空白,計(jì)算每杯在不同取樣時(shí)間點(diǎn)的累積溶出量。
3.2火焰原子吸收法
3.2.1 供試品溶液的制備 取三批樣品各12片,分別在溶出介質(zhì)(pH 1.2鹽酸溶液)中試驗(yàn),按“2”項(xiàng)下的溶出條件取不同時(shí)間點(diǎn)的溶出液,用0.45μm濾膜濾過(guò),分別精密量取1 h時(shí)溶出液600μL;2、4 h時(shí)溶出液各350 μL;6、8、10 h時(shí)溶出液各250μL,分別置50 mL量瓶中,精密加入20%氯化鈉溶液1 mL,用鹽酸溶液(2.7→100)稀釋至刻度,搖勻。
3.2.2 系列對(duì)照品溶液的制備 取氯化鉀對(duì)照品約0.1 g,精密稱定,置100 mL量瓶中,加純化水溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取5 mL,置100 mL量瓶中,用鹽酸溶液(2.7→100)稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液2、3、4、5、6 mL,分別置100 mL量瓶中,各精密加入20%氯化鈉溶液2 mL,用鹽酸溶液(2.7→100)稀釋至刻度,搖勻。
3.2.3 空白溶液 精密量取20%氯化鈉溶液2 mL,置100 mL量瓶中,用鹽酸溶液(2.7→100)稀釋至刻度,搖勻。
3.2.4 測(cè)定方法 分別取“3.2.1”、“3.2.2”、“3.2.3”項(xiàng)下供試品溶液、系列對(duì)照品溶液、空白溶液,采用火焰原子吸收法,計(jì)算每片在不同取樣時(shí)間點(diǎn)的累積溶出量。
4.1累積溶出量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別計(jì)算三批樣品在4種溶出介質(zhì)中各取樣時(shí)間點(diǎn)的12片累積溶出量間的RSD,見(jiàn)表1。
表1 三批樣品在4種溶出介質(zhì)中平均累積溶出量結(jié)果
圖1 4種不同介質(zhì)溶出曲線:A為水中平均累積溶出曲線,B為pH 4.5磷酸鹽緩沖液中平均累積溶出曲線,C為pH 6.8磷酸鹽緩沖液中平均累積溶出曲線,D為pH 1.2鹽酸溶液中平均累積溶出曲線
4.2繪制溶出曲線取三批樣品各12片,按“2”項(xiàng)下的溶出條件取不同時(shí)間點(diǎn)的溶出液,以“3.1”、“3.2”項(xiàng)下的方法計(jì)算累積溶出量,分別以4種溶出介質(zhì)中的取樣時(shí)間為橫坐標(biāo)(X),每批12片的平均累積溶出量為縱坐標(biāo)(Y),繪制溶出曲線,見(jiàn)圖1。
4.3 ?2因子的計(jì)算根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》,?2因子計(jì)算公式如下:
式中,n為取樣時(shí)間點(diǎn)個(gè)數(shù),Rt為t時(shí)間參比樣品平均溶出量,Tt為t時(shí)間受試樣品平均溶出量[10]。
4.3.1 相同介質(zhì)不同批次間的?2因子 取三批樣品各12片在同一種溶出介質(zhì)中不同取樣時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出量,計(jì)算互相之間的?2因子,見(jiàn)表2。
表2 相同介質(zhì)不同批次樣品間?2因子計(jì)算結(jié)果
4.3.2 相同批次不同介質(zhì)間的?2因子 取同一批次樣品12片在4種溶出介質(zhì),不同取樣時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出量,計(jì)算互相之間的?2因子,見(jiàn)表3。
表3 同一批次樣品不同介質(zhì)間?2因子計(jì)算結(jié)果
4.4結(jié)論根據(jù)國(guó)家局發(fā)布的《仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)—普通固體口服制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則(草案)》可知,“3.1.3”項(xiàng)下除0時(shí)外,選取的第一個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不得過(guò)20%,自第二個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)至最后一個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不得過(guò)10%。由表1結(jié)果可得,三批樣品第一個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)各12片間的累積溶出量的RSD值最大為7.9%,最小為1.9%,均小于20%;自第二個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)至最后一個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)累積溶出量的RSD值最大為5.0%,最小為1.1%,均小于10%。據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明樣品均勻,工藝比較成熟。
根據(jù)國(guó)家局發(fā)布的《仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)——普通固體口服制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則(草案)》可知,當(dāng)兩條溶出曲線?2因子數(shù)值不小于50時(shí),可認(rèn)為兩條溶出曲線具有相似性。由表2結(jié)果可得,相同介質(zhì)不同批次樣品間的?2因子最大值為97.78,最小值為64.41,均大于50;由表3結(jié)果可得,同一批次樣品不同介質(zhì)間的?2因子最大值為95.40,最小值為64.86,均大于50。實(shí)驗(yàn)結(jié)果所得的12條溶出曲線的?2因子均大于50,可認(rèn)為氯化鉀緩釋片溶出曲線均相似。
在體外溶出實(shí)驗(yàn)中,溶出介質(zhì)中的氣體會(huì)影響藥品的崩解、溶出和擴(kuò)散,因此本研究中采用了脫氣純化水。每次取出溶出液后都及時(shí)補(bǔ)充了相同溫度相同體積的溶出介質(zhì)[3-5]。
采用電位滴定法測(cè)定氯化鉀溶出量時(shí),空白溶液會(huì)消耗一定量的滴定液,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較大,因此在每次測(cè)定樣品溶出量時(shí)同步測(cè)定空白溶液,并扣除空白溶液消耗的滴定液體積。
由表1各批次各時(shí)間點(diǎn)累積溶出量RSD計(jì)算結(jié)果,可以看出每片釋放行為基本一致;由表3?2因子計(jì)算結(jié)果,可看出該企業(yè)氯化鉀緩釋片生產(chǎn)工藝穩(wěn)定,從而進(jìn)一步證明該企業(yè)生產(chǎn)的氯化鉀緩釋片工藝成熟;由表2中?2因子計(jì)算結(jié)果,可看出溶出介質(zhì)對(duì)氯化鉀的溶出影響不大。綜上所述,該企業(yè)生產(chǎn)的氯化鉀緩釋片的體外釋放行為基本不存在問(wèn)題,體內(nèi)生物利用度還有待研究[7-11]。