雞沙門氏菌病病原菌的分離鑒定

張麗嬌

山東省蓬萊市小門家畜牧獸醫(yī)站，山東蓬萊265600

沙門氏菌是一類腸道桿菌，其中一部分可以導(dǎo)致人和動(dòng)物感染，統(tǒng)稱為沙門氏菌病。據(jù)最近研究，沙門氏菌有2 個(gè)種，分為42 個(gè)群，血清型有2 500多種，我國(guó)已經(jīng)報(bào)道的血清型有240 種以上[1]。它是寄生于人和動(dòng)物腸道內(nèi)的無(wú)芽孢桿菌，是一大屬血清學(xué)相關(guān)的革蘭氏陰性菌[2]。沙門氏菌病的發(fā)病率高，死亡率高，臨床上最常見的是雞白痢和雞副傷寒。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）材料。煙臺(tái)市某肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)病死雞的肝臟和腎臟。

2）試驗(yàn)藥劑。SS 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，HE 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，伊紅美藍(lán)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，麥康凱培養(yǎng)基，三糖鐵瓊脂，TSB 營(yíng)養(yǎng)液，葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖等生化發(fā)酵管；壯觀霉素，甲砜霉素，頭孢噻呋，卡那霉素，慶大霉素，新霉素，恩諾沙星，環(huán)丙沙星，氟哌酸，鏈霉素和阿米卡星藥敏試紙。

3）試驗(yàn)動(dòng)物。來(lái)自煙臺(tái)市某肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)的雛雞。

1.2 方 法

1）臨床檢查。首先要了解本次流行的情況，包括最初發(fā)病的時(shí)間、地點(diǎn)、隨后蔓延的情況；再觀察整個(gè)雞群的狀況，包括精神狀態(tài)、飲食、飲水、糞便以及發(fā)病前有無(wú)飼養(yǎng)管理、飼料用藥、氣候等變化或其他應(yīng)激因素存在。

2）病理剖檢。先觀察尸體的外觀變化，包括被毛及皮膚變化、表面有無(wú)尸僵出現(xiàn)；天然孔有無(wú)分泌物、排泄物和出血及其性質(zhì)；體表有無(wú)腫脹或異常；再者檢查內(nèi)臟，主要包括心臟、肝臟、腎臟、肺臟、脾臟等，看其表面有無(wú)炎癥、水腫、出血、變性、壞死、萎縮等異常病變。

3）病料采集。采自該養(yǎng)殖場(chǎng)7日齡的病死雞，經(jīng)過(guò)解剖所得到的充血腫大的肝臟和腎臟。

4）細(xì)菌的分離與培養(yǎng)。取病死雞的腎臟或肝臟，在無(wú)菌操作下分別將病料接種于麥康凱營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、SS 營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、伊紅美藍(lán)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h。然后找灰白色疑似沙門氏菌的菌落進(jìn)行單菌落抹片，再染色進(jìn)行鏡檢。

5）染色與形態(tài)觀察。用接種環(huán)蘸取生理鹽水與玻璃片上的病料相混合，并均勻涂片，自然干燥后用火焰固定；在片上滴加草氨酸結(jié)晶紫染色液，作用1～3 min，水洗；加染液進(jìn)行媒染，作用1 min，水洗；加95%的酒精15～30 s 進(jìn)行脫色，水洗；加復(fù)宏復(fù)染液染1 min 水洗，自然干燥后鏡檢，觀察細(xì)菌形態(tài)與顏色。

6）生化試驗(yàn)。用接種針挑起純培養(yǎng)物，接種于各種生化發(fā)酵管中，37 ℃培養(yǎng)24 h。

7）藥敏試驗(yàn)。選取SS 營(yíng)養(yǎng)瓊脂上的菌落做藥敏試驗(yàn)，用無(wú)菌小鑷子夾取各種藥敏片平貼于瓊脂表面，每一直徑90 mm 的平板可貼7 片紙片，每張紙片的間距≥25 mm，每張紙片距離平板的邊緣≥15 mm。然后把整個(gè)平板反過(guò)來(lái)于37 ℃培養(yǎng)18 h。時(shí)間到后取出平板，仔細(xì)觀察在藥敏片周圍有無(wú)抑菌圈形成，然后用游標(biāo)卡尺度量其直徑的大小，按抑菌圈直徑的大小作為供試菌株敏感度指標(biāo)報(bào)告敏感、中度敏感、高度敏感和耐藥的結(jié)果。

8）致病性試驗(yàn)。在雞群中隨機(jī)抽取30 只健康雛雞，設(shè)6 個(gè)小組，每組5 只，包括5 個(gè)菌株試驗(yàn)小組和1 個(gè)對(duì)照小組，將純培養(yǎng)的5 個(gè)菌株接種于TSB 溶液中進(jìn)行增值培養(yǎng)，24 h 后取出菌液分別腹腔注射5 個(gè)小組的雛雞，每只0.4 mL，設(shè)第6 小組注射營(yíng)養(yǎng)肉湯做對(duì)照，隨時(shí)觀察其發(fā)病及死亡情況。對(duì)發(fā)病致死的雛雞進(jìn)行解剖，觀察其病理學(xué)變化，并取內(nèi)容物接種于SS 營(yíng)養(yǎng)瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基，觀察其菌落的形態(tài)和顏色。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床檢查

在該養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)大部分雞群精神沉郁，扎堆不動(dòng)，而且病雞“糊肛”現(xiàn)象比較嚴(yán)重，其中死亡雞已經(jīng)接近40 只，根據(jù)這些臨床癥狀可以初步判斷病死雞感染沙門氏菌病。

2.2 病理解剖

隨機(jī)抽取5 只病死雞進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)肝臟、腎臟腫大都比較嚴(yán)重，肺臟的表面還伴有彌漫性充血和出血，把解剖的結(jié)果與以上所觀察的臨床結(jié)果相結(jié)合可以確診為病死雞感染了沙門氏菌病。為了進(jìn)一步確診，采集其病變的肝臟、腎臟送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)。

2.3 分離培養(yǎng)

將菌株接種于各個(gè)培養(yǎng)基中結(jié)果有很大區(qū)別，有5 株疑似沙門氏菌的菌株。在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上呈表面光滑、圓形、微凸、邊緣整齊、淡藍(lán)色、直徑在1～2 mm 的小菌落；在SS 瓊脂平板上，呈現(xiàn)白色菌落；在麥康凱瓊脂平板上呈現(xiàn)圓形、微凸、邊緣整齊、直徑1～2 mm 的小菌落；在HE 瓊脂平板上呈圓形、微凸、邊緣整齊、灰褐色或灰綠色、直徑1～2 mm的小菌落。

2.4 生化試驗(yàn)

由表1可知：疑似沙門氏菌的5 個(gè)菌株能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖和甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣；對(duì)乳糖和蔗糖不反應(yīng)；尿酸酶試驗(yàn)為陰性；在三糖鐵培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，斜面紅色，底層黃黑色。

2.5 染色及鏡檢

選取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏涂片、染色、鏡檢，發(fā)現(xiàn)沙門氏菌為數(shù)量多、個(gè)頭短小的革蘭氏陰性桿菌，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜，無(wú)運(yùn)動(dòng)能力。

2.6 藥敏試驗(yàn)

由表2可知：沙門氏菌對(duì)不同藥物出現(xiàn)不同的敏感度。抑菌圈直徑在20 mm 以上的為高度敏感，10～20 mm 為中度敏感，10 mm 以下為低敏。5 個(gè)菌株對(duì)頭孢噻呋、甲砜霉素、壯觀霉素高敏；對(duì)卡那霉素、慶大霉素中敏；對(duì)恩諾沙星、環(huán)丙沙星不敏感或低敏。

3 討 論

1）科學(xué)的飼養(yǎng)管理。保證雞群健康成長(zhǎng)的前提是有一個(gè)良好的生存環(huán)境，雞群生長(zhǎng)的環(huán)境對(duì)雞群的健康狀況和生產(chǎn)性能有著重要的影響[3-4]。特別是雛雞的管理飼養(yǎng)，不能過(guò)分擁擠，而且飼料要搭配得當(dāng)，定時(shí)添加微量元素和維生素。如果發(fā)現(xiàn)雞群異常，要立即將病雞隔離，已經(jīng)治愈的雞仔也要持續(xù)隔離一段時(shí)間，以防止病原的繼續(xù)傳播。

表1 生化試驗(yàn)結(jié)果

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 mm

2）嚴(yán)格的消毒工作。健全場(chǎng)內(nèi)的消毒制度，特別是雛雞場(chǎng)、育雛室在進(jìn)雛前必須經(jīng)徹底清掃、刷洗和消毒。設(shè)備、器具上的殘留物清除后再用3%火堿水、0.2%過(guò)氧乙酸或抗菌威等輪換消毒，最后每立方米用28 mL 福爾馬林熏蒸24 h，通風(fēng)排凈氣味后才可進(jìn)雛；10日齡以后的雛雞，每周用0.1%次氯酸鈉或0.1%過(guò)氯乙酸帶雞消毒1 次，育雛室每天清掃1 次，清掃后用0.3%過(guò)氧乙酸消毒；要實(shí)施全進(jìn)全出的飼養(yǎng)制度。

3）合理的免疫程序。制定合理的免疫程序，飼養(yǎng)雞群時(shí)要嚴(yán)格按照免疫程序來(lái)接種，飼養(yǎng)員應(yīng)根據(jù)每一批雞群飼養(yǎng)的結(jié)果及時(shí)做出總結(jié)，以對(duì)現(xiàn)有的程序進(jìn)行適當(dāng)?shù)男薷摹?/p>

4 結(jié) 論

此次在煙臺(tái)市某肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)所發(fā)生的疫病，通過(guò)細(xì)菌的分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)及致病性試驗(yàn)可以基本確定為雞白痢沙門氏菌病。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，雞白痢沙門氏菌對(duì)頭孢噻呋和甲砜霉素高度敏感，所以在藥物治療時(shí)要首選頭孢噻呋和甲砜霉素。

通過(guò)藥敏試驗(yàn)了解了此次沙門氏菌對(duì)恩諾沙星和環(huán)丙沙星保持著一定的耐藥性，耐藥性的產(chǎn)生主要是由于飼料中的抗生素含量過(guò)高和臨床上長(zhǎng)期盲目用藥造成[3]。因此，在雞白痢沙門氏菌的診斷治療中，要把頭孢噻呋和甲砜霉素作為首選藥物。在治療雞細(xì)菌病、腹瀉病的同時(shí)，要輪換用藥，以減少由于耐藥性所產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)損失。