頸項透明層增厚胎兒的遺傳學(xué)檢測結(jié)果分析

王德剛 董興盛 滿婷婷 江 陵 陸林苑 熊 怡 歐德明 唐海深 李海軍

（中山市博愛醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心，廣東中山528403）

NT值是指在孕11～13+6周胎兒頸后皮下組織內(nèi)積液的厚度，胎兒NT值已經(jīng)成為妊娠早期篩查的常用指標(biāo)，且在孕早期篩查胎兒染色體非整倍體的價值已經(jīng)得到廣泛認可[1]。研究顯示NT增厚胎兒除了染色體非整倍體風(fēng)險增高，還有可能出現(xiàn)全基因組拷貝數(shù)變異（Copy number variantsc，CNVs）、單基因遺傳病、結(jié)構(gòu)異常（主要為心臟畸形）以及流產(chǎn)和胎死宮內(nèi)等。CMA技術(shù)是一種用于全基因組拷貝數(shù)變異的檢測方法，對于染色體的微缺失、微重復(fù)及不平衡的重排具有突出優(yōu)勢[2]。因此，本文對核型正常的NT值增厚胎兒的CMA結(jié)果進行分析和總結(jié)，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集 2017年2月至2018年12月在本院產(chǎn)前診中心就診的218名孕婦的臨床資料，納入標(biāo)準(zhǔn)為孕11～13+6周胎兒NT值≥3.0mm的孕婦，經(jīng)遺傳咨詢并簽署知情同意書后接受絨毛活檢術(shù)、羊膜腔穿刺術(shù)或臍靜脈穿刺術(shù)等介入性產(chǎn)前診斷手術(shù)獲取胎兒樣本。對染色體核型分析未見異常的170例胎兒樣本，采用CMA檢測胎兒CNVs。

1.2 方法

1.2.1 胎兒頸項透明層厚度測量：采用GE Vouson E8彩色多普勒超聲診斷儀，由經(jīng)驗豐富的醫(yī)生對孕11～13+6周的孕婦進行胎兒NT測量，嚴格按照英國胎兒醫(yī)學(xué)基金會的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)進行操作。NT測量平面為胎兒正中矢狀面，胎兒自然屈曲，并盡可能將測量圖像放大，使圖像只顯示胎兒頭部及上胸，測量光標(biāo)的輕微移動只會改變測量結(jié)果0.1mm。NT測量時應(yīng)在無回聲區(qū)域最寬處測量并垂直于皮膚光帶，測量游標(biāo)的內(nèi)緣應(yīng)置于無回聲區(qū)域內(nèi)緣。至少測量3次以上，并記錄所得的最大數(shù)值。當(dāng)NT值≥3.0mm診斷為胎兒NT增厚。

1.2.2 染色體微陣列分析：胎兒樣本采用QIAamp DNA Mini Kit試劑盒按照試劑盒的說明書提取胎兒基因組DNA。采用Affymetrix CytoScan 750K平臺對胎兒基因組DNA進行全基因組拷貝數(shù)變異分析，實驗室操作嚴格按照Affymetrix公司提供的操作流程。使用Affymetrix 7G掃描儀掃描芯片，信號圖經(jīng)過Chas軟件分析和計算。結(jié)合實驗室本地數(shù)據(jù)庫，參照 DGV、Clinvar、ClinGen、Decipher等公共數(shù)據(jù)庫進行數(shù)據(jù)分析，將CNVs分為致病性、疑似致病性、臨床意義不明確（Variants of unknown significance，VOUS）、可能良性及良性5種類型，其中可能良性和良性的CNVs在CMA檢測報告中不提示。

1.3 妊娠結(jié)局隨訪：電話隨訪所有研究對象的妊娠結(jié)局及胎兒出生后3個月的健康情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法：運用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究對象：218例胎兒NT增厚，有雙胎之一NT增厚10例，其余均為單胎；NT值3.0～3.5mm組共119例，NT值≥3.5mm組共99例。初產(chǎn)婦81名，經(jīng)產(chǎn)婦137名。所有孕婦均進行介入性產(chǎn)前診斷穿刺，其中絨毛活檢術(shù)14例，羊膜腔穿刺術(shù)199例，臍靜脈穿刺術(shù)5例，穿刺孕周為12+4周至30+6周，平均穿刺孕周為（18.31±0.14）周；孕婦年齡為20～44 歲，平均年齡（31.34±0.35）歲。

2.2 CMA檢測結(jié)果：170例核型正常的NT值增厚胎兒CMA檢出各類CNVs14例，其中致病性/疑似致病性CNVs5例，發(fā)生率2.94%，臨床意義未明CNVs7例，純合狀態(tài)CNVs2例。NT值3.0～3.5mm胎兒致病性/疑似致病性CNVs發(fā)生率為0，NT值≥3.5mm胎兒致病性/疑似致病性CNVs發(fā)生率為6.85%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。CMA未見異常孕婦不良妊娠結(jié)局發(fā)生率5.13%，其中胎兒心臟異常4例，占50%。NT值3.0～3.5mm且CMA未見異常孕婦，不良妊娠結(jié)局發(fā)生率1.10%；NT值≥3.5mm且CMA未見異常孕婦，不良妊娠結(jié)局發(fā)生率10.77%，兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），詳見表1。

表1 170例NT值增厚胎兒CMA檢測結(jié)果 [n（%）]

2.3 8例NT值增厚且CMA正常胎兒的不良妊娠結(jié)局：8例不良妊娠結(jié)局胎兒NT值為3.3～5.1mm，平均NT值（3.96±0.55）mm。2例發(fā)生自然流產(chǎn)，6例因胎兒異常在25+周至29+周引產(chǎn)，其中4例胎兒心臟異常，占所有NT增厚且CMA正常胎兒的2.56%，詳見表2。

表2 8例NT增厚且CMA正常胎兒不良妊娠結(jié)局

3 討論

胎兒發(fā)育至11～13周，胎兒頸部會出現(xiàn)少量淋巴液積累及暫時性回流障礙的可能，胎兒頸部出現(xiàn)透明帶，若胎兒有其他發(fā)育異常時，回流障礙增加后使胎兒頸部出現(xiàn)明顯淋巴液聚集，出現(xiàn)典型的NT增厚[3]。胎兒NT增厚與核型正常的遺傳綜合征或神經(jīng)發(fā)育遲緩的發(fā)生關(guān)聯(lián)尚未完全確定，據(jù)報道超過50種遺傳病已被描述與NT增厚有關(guān)[4]。本文對我院170例NT增厚胎兒進行CMA檢測，結(jié)果顯示NT值≥3.5mm胎兒致病性/疑似致病性CNVs發(fā)生率高于NT值3.0～3.5mm的胎兒，與徐玲玲[5]的研究結(jié)果相似。2.56%的NT值增厚且CMA正常胎兒發(fā)生心臟異常，包括完全性心內(nèi)膜墊缺損、胎兒三尖瓣閉鎖、右室發(fā)育不良、房室間隔缺損、主動脈瓣關(guān)閉不全、右室雙出口、完全型肺靜脈異位引流及大動脈轉(zhuǎn)位等。孕婦選擇引產(chǎn)，導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，與王敏[6]研究結(jié)果相似。NT增厚與核型正常的胎兒發(fā)生不良妊娠結(jié)局的原因可能為胎兒淋巴管排泄異常、頭部及頸靜脈充血、心臟功能異常、胎兒貧血、水腫、宮內(nèi)感染、某些遺傳綜合征等，有文獻顯示，NT值越高，胎兒致病性染色體的檢出率越高。NT異常升高與染色體異常、心臟畸形等也有相關(guān)性[7]。有研究顯示NT增厚的胎兒，會出現(xiàn)心鈉肽、腦鈉肽及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)ATP酶表達異常，使妊娠末期的胎兒心臟舒張壓力過高，心室灌注不成熟導(dǎo)致NT持續(xù)增厚，導(dǎo)致NT升高胎兒會出現(xiàn)發(fā)育遲緩甚至不良妊娠結(jié)局；先天性心臟病的發(fā)生率隨NT增厚而增加，胎兒心臟異常的發(fā)生率從NT為3.5～4.4mm時的8.7% 增加到NT＞6.5mm時的33.33%[5]。CMA是一種較為先進的檢測技術(shù)，可以快速分析基因組的DNA拷貝數(shù)變異，耗時短、成功率高，可以增加染色體異常的檢出，在產(chǎn)前超聲發(fā)現(xiàn)異常的胎兒中有廣泛的應(yīng)用，有利于出生缺陷防控的建議。

綜上所述，對核型正常的NT增厚胎兒進行CMA檢查，可以阻斷有缺陷的胎兒出生，對核型正常、CMA正常的孕婦應(yīng)密切監(jiān)測胎兒心臟發(fā)育，提高心臟異常胎兒的檢出率，減少嚴重缺陷兒的出生。