貝萊斯芽孢桿菌NSZ-YBGJ001對(duì)草莓白粉病的防治效果研究

張小利，潘洪吉，陶永梅，謝愛(ài)婷，梁鐵雙，祝 寧，盧志軍*

(1.北京市植物保護(hù)站，北京 100029；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京 100094；3.北京市昌平區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站，北京 102200)

近年來(lái)，設(shè)施草莓栽培面積不斷擴(kuò)大，供果期延長(zhǎng)，產(chǎn)值不斷提升。但是設(shè)施內(nèi)通風(fēng)較差，光照較弱，濕度較大，導(dǎo)致病害發(fā)生較重。其中，白粉病是草莓生產(chǎn)中的常發(fā)病害，在草莓整個(gè)生育期均可發(fā)病。草莓白粉病是由羽衣草單囊殼菌(Sphaerothecaaphanis)引起的氣傳病害，該菌是活體寄生菌，侵染草莓葉片、果實(shí)、花托、匍匐莖等組織，嚴(yán)重影響草莓產(chǎn)量和品質(zhì)[1]。

目前，在草莓生產(chǎn)上主要依靠化學(xué)農(nóng)藥防治白粉病。長(zhǎng)期使用化學(xué)藥劑，易引起農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染及病菌抗藥性等問(wèn)題[2]，不符合綠色農(nóng)業(yè)的要求。而以菌治菌的生物防治無(wú)殘留、環(huán)境友好、防效可持續(xù)，在病害防治中有廣闊的應(yīng)用前景。其中芽孢桿菌因其具有抑菌和促進(jìn)植物生長(zhǎng)等作用，以及生產(chǎn)簡(jiǎn)單、活性高、穩(wěn)定性強(qiáng)、易保存、成本低等特點(diǎn)，很多被開(kāi)發(fā)成生防菌劑。本試驗(yàn)利用貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)NSZ-YBGJ001防治設(shè)施草莓白粉病，評(píng)價(jià)其防效，明確使用方法，為草莓白粉病的田間防治提供一種高效、安全的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 供試菌株，貝萊斯芽孢桿菌NSZ-YBGJ001，保藏于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心(簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC)，菌株編號(hào)為CGMCC No.14384。

1.1.2 培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基(NA)：用于菌株的平板培養(yǎng)及斜面保存；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(NB)：用于制備菌液。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)置 試驗(yàn)在北京昌平興壽鎮(zhèn)溫室草莓棚中進(jìn)行，草莓品種為紅顏。貝萊斯芽孢桿菌原始菌液濃度為1.3×108CFU/mL，原液稀釋100倍作為處理，并設(shè)空白對(duì)照。

草莓葉部白粉病防治試驗(yàn)：處理設(shè)置3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)小區(qū)面積166m2，每小區(qū)種植1 500株草莓。12月13日草莓發(fā)生白粉病開(kāi)始，每隔7d噴霧1次，共施藥3次。按照用液量75kg/667m2，藥械為背負(fù)式電動(dòng)噴霧器(3WBD-20)。

草莓果實(shí)白粉病防治試驗(yàn)： 隨機(jī)選取120顆感染白粉病的病果，蘸取稀釋100倍的貝萊斯芽孢桿菌菌液。

1.2.2 調(diào)查方法 每個(gè)小區(qū)定株30株，調(diào)查整株葉片和果實(shí)的白粉病發(fā)病情況，以及菌液對(duì)草莓的安全性。于施藥前、第1次藥后7d、第2次藥后7d、第3次藥后7d，共調(diào)查4次，記錄發(fā)病等級(jí)。

葉片分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如下：

0級(jí)，無(wú)病斑；

1級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的5%以下；

3級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的6%～15%；

5級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的16%～25%；

7級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的26%～50%；

9級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積的50%以上。

果實(shí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：

0級(jí)，無(wú)病斑；

1級(jí)，病斑面積占果實(shí)面積的15%以下；

2級(jí)，病斑面積占果實(shí)面積的16%～30%；

3級(jí)，病斑面積占果實(shí)面積的31%～50%；

4級(jí)，病斑面積占果實(shí)面積的50%以上。

按照如下公式計(jì)算病情指數(shù)和防治效果：

發(fā)病率=發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100%

病情指數(shù)=∑(各級(jí)病株數(shù)×該病級(jí)值)/(調(diào)查總株數(shù)×最高級(jí)值)×100

式中CK0、CK1分別為對(duì)照區(qū)施藥前和施藥后的病情指數(shù)，Pt0、Pt1分別為處理區(qū)施藥前和施藥后的病情指數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)草莓葉片上白粉病的防治效果 12月13日調(diào)查草莓白粉病，葉片發(fā)病率為5.56%，病情指數(shù)1.11(表1)。第1次施藥后7d，處理和對(duì)照的發(fā)病率和病情指數(shù)都有所上升，說(shuō)明白粉病傳播很快，貝萊斯芽孢桿菌菌液起效慢，但與對(duì)照相比，處理的病情得到有效控制，防效達(dá)91.98%；第2次藥后7d，處理和對(duì)照的發(fā)病程度都有所減輕，發(fā)病率分別下降了72.74%和71.43%，病情指數(shù)分別下降了76.88%4%和86.13%，都維持在輕發(fā)水平，防效為86.64%；第3次藥后7d，發(fā)病情況與第2次藥后7d的一樣。

表1 貝萊斯芽孢桿菌對(duì)草莓葉片上白粉病的防治效果

第2次和第3次藥后7d，對(duì)照在沒(méi)用藥的情況下，白粉病發(fā)病減輕，原因是白粉病發(fā)生后，采用了摘除病葉和老葉，加強(qiáng)通風(fēng)，同時(shí)升高棚室溫度等物理措施，大大降低了白粉病菌孢子濃度，改善了草莓生長(zhǎng)環(huán)境，所以病害發(fā)生減輕。

2.2 對(duì)草莓果實(shí)上白粉病的防治效果 草莓果實(shí)白粉病的初始發(fā)病率為16.67%，病情指數(shù)為8.61(表2)。第1次藥后7d，處理和對(duì)照的發(fā)病率和病情指數(shù)都明顯下降，防效為30.44%；第2次藥后7d，處理區(qū)發(fā)病率降低了16.64%，病情指數(shù)降低了49.7%，說(shuō)明病果數(shù)量雖然減少的不多，但是病果上白粉病的發(fā)病程度減輕了近50%，而對(duì)照的病果率和病情指數(shù)分別上升了77.78%和70.55%，防效達(dá)86.32%；第3次藥后7d，防效為71.08%，但對(duì)照區(qū)的果實(shí)發(fā)病程度減輕，發(fā)病率和病情指數(shù)都下降，分析原因可能是同時(shí)期摘除病果、采摘等措施造成的。

表2 貝萊斯芽孢桿菌對(duì)草莓果實(shí)白粉病的防治效果

2.3 對(duì)草莓的安全性 施藥后觀察，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)燒灼斑、發(fā)黃、植株矮化等藥害癥狀，植株生長(zhǎng)正常，因此貝萊斯芽孢桿菌對(duì)草莓安全，同時(shí)也沒(méi)發(fā)現(xiàn)對(duì)蜜蜂有影響，可以用于田間草莓白粉病的防治。但處理小區(qū)和對(duì)照均有少部分果實(shí)畸形，可能是正值草莓花期，噴施藥劑，造成空氣濕度過(guò)大，花藥開(kāi)裂受阻和花粉傳播不良，畸形果增多，因此盡量在花期不施藥，盡早預(yù)防草莓白粉病的發(fā)生。

3 結(jié)論與討論

貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)是芽孢桿菌屬的一個(gè)新種，2005年由Ruiz-García等新命名的[3]。近年來(lái)人們報(bào)道了貝萊斯芽孢桿菌在生物防治和促進(jìn)植物生長(zhǎng)方面的應(yīng)用[4]。研究發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌可以產(chǎn)生具有廣譜抑菌活性的次生代謝產(chǎn)物，對(duì)棉花黃萎病菌(大麗輪枝菌VerticilliumdahliaeKleb)[5]、白菜黑斑病菌(蕓薹鏈格孢菌Alternariabrassicae)[6]、番茄枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、番茄灰霉病灰葡萄孢菌 (BotrytiscinereaPers)[7]、稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)[8]等有拮抗作用。此外，人們研究發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌對(duì)玉米、水稻、有促生作用，進(jìn)一步增強(qiáng)植株的耐病能力。

本試驗(yàn)利用貝萊斯芽孢桿菌NSZ-YBGJ001防治草莓白粉病，每隔7d施藥1次，共施藥3次，總體防效較好，葉部的防效超過(guò)85%，果實(shí)的防效超過(guò)70%。草莓白粉病應(yīng)盡早預(yù)防，建議在草莓定植后一個(gè)月，噴施貝萊斯芽孢桿菌菌液100倍液，連續(xù)噴施3次，每次間隔7d，對(duì)白粉病進(jìn)行預(yù)防。

利用生防菌劑防治草莓白粉病的研究較多?？莶菅挎邨U菌是被用來(lái)防治草莓白粉病的研究最多，防效通常為40%～65%[9]。陳沖等研究表明，蠟狀芽孢桿菌菌液對(duì)草莓白粉病的田間防效可達(dá)50%以上[10]。另外，枯草芽孢桿菌與井岡霉素的復(fù)配劑，對(duì)草莓白粉病的防治效果明顯優(yōu)于單一的生防菌劑型，尤其在速效性和持效性方面[11]。為了更好的利用貝萊斯芽孢桿菌，還需研究其抑菌物質(zhì)，通過(guò)菌株改良提高生防效果，進(jìn)一步優(yōu)化發(fā)酵條件、控制生產(chǎn)成本來(lái)推進(jìn)其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。