自擬婦血安湯治療功能失調(diào)性子宮出血的實驗研究

李宗國，任春艷，蘇希東，李愛平，時召平

(河北省承德市中醫(yī)院藥學(xué)部，河北 承德 067000)

功能失調(diào)性子宮出血(簡稱功血)是發(fā)生于女性各年齡階段的常見病、多發(fā)病、疑難病，是由多種原因引起的下丘腦-垂體-卵巢軸功能失調(diào)而導(dǎo)致子宮內(nèi)膜增生過長，從而造成子宮異常出血[1]。功血可引起失血性貧血、繼發(fā)感染、不孕等，給患者帶來極大的痛苦。目前西醫(yī)對該病的藥物治療主要有雌激素和促排卵藥物，副作用大且療效不佳，病情反復(fù)。研究表明[2,3]長期應(yīng)用雌激素或促排卵藥物會增加患子宮內(nèi)膜癌或卵巢癌的風(fēng)險。功血屬祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)“崩漏”的范疇，中醫(yī)藥治療功血具有獨特的法則和療效[4]。中醫(yī)對崩漏(功血)的辨證施治一慣沿用“塞流，澄源，復(fù)舊”的法則。出血期以活血化瘀法為主塞流，同時根據(jù)不同致瘀原因隨證治之；血止之后注重澄源求因，復(fù)舊善后，再結(jié)合女性月經(jīng)周期不同階段的生理特點，在經(jīng)前期理氣活血，以使氣血通調(diào)，在經(jīng)后期滋腎養(yǎng)血，以使血海充盈，從而使患者恢復(fù)正常的月經(jīng)周期，在臨床上取得良好的療效。自擬婦血安湯是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下以艾葉、當(dāng)歸為君藥，配伍益母草、延胡索、炙甘草、川芎、白芍，具有活血止血，行氣止痛功效。臨床研究表明自擬婦血安湯能促進子宮收縮，改善血液流變學(xué)，對治療產(chǎn)后血瘀型惡露不止具有顯著療效。本研究觀察了自擬婦血安湯對功能失調(diào)性子宮出血大鼠模型的作用，及對大鼠凝血功能的影響，為臨床應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。

1 動物與試劑

1.1實驗動物:雌性Wistar大鼠，SPF級，體重220～250g。雄性Wistar大鼠，SPF級，體重250～300g。購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK(京)2012-0001。

1.2實驗藥物:米索前列醇片(批號:c024180802)和米非司酮片(批號:c019150302)均購自北京紫竹藥業(yè)有限公司。宮血寧膠囊(批號：1806233)購于云南白藥集團股份有限公司。自擬婦血安湯：艾葉20g、當(dāng)歸20g、醋延胡索15g、益母草30g、川芎12g、炙甘草6g、白芍20g，飲片由承德市中醫(yī)院提供，自煎。

1.3試劑:雌二醇放射免疫試劑盒、孕酮放射免疫試劑盒、黃體生成素放射免疫試劑盒和卵泡刺激激素放射免疫試劑盒均購自北方生物技術(shù)研究所。

1.4儀器:北京醫(yī)用LG15-W 高速微量離心機；美國Bio-Rad500酶標(biāo)儀；日本日立全自動生化分析儀7600；AMAX-200全自動血凝分析儀。

2 方 法

2.1制作功能失調(diào)性子宮出血大鼠模型與分組:參考文獻[5]，將大鼠按母(不少于50只)∶公為2∶1～3∶1的比例合籠，次日進行陰道涂片檢查，若發(fā)現(xiàn)精子或陰栓表示受孕成功，作為妊娠第1天；若未受孕，待下次繼續(xù)合籠受孕。取受孕成功的母鼠50只，采用隨機數(shù)字表法分為5組，每組10只，分別為空白組、模型組、陽性對照(宮血寧膠囊)組和自擬婦血安湯低、高劑量組。除空白組外，其余各組大鼠分別于妊娠第7天ig米非司酮溶液(上午8：00，8.5mg/kg)和米索前列醇溶液(下午18：00，0.1mg/kg)，造成早孕大鼠不完全流產(chǎn)的功能失調(diào)性子宮出血模型；同時于母鼠陰道內(nèi)置入消毒棉球，吸收子宮出血物，次日分別于早、晚將棉球取出，放入封口袋中，于4℃冰箱冷藏保存，每天更換2次新棉球，直至妊娠第14天。

2.2給藥:從妊娠第8天開始，宮血寧膠囊組大鼠ig宮血寧膠囊0.07g/kg(蒸餾水溶解，按臨床的等效劑量換算而得)；自擬婦血安湯低、高劑量組大鼠分別ig自擬婦血安湯15g/kg、30g/kg(分別按臨床劑量的2倍、4倍換算而得)；空白組和模型組大鼠ig等體積(5mL)的蒸餾水，每天早、晚各給藥1次，連續(xù)7d。

2.3觀察指標(biāo)

2.3.1出血時間與凝血功能指標(biāo)的測定[6]:大鼠妊娠第14天，末次給藥后30min，固定大鼠，測定鼠尾長度并標(biāo)記。用剪刀在尾尖3mm處橫斷，血液自行溢出，隔30s用濾紙吸去血滴1次。記錄血液自然停止(濾紙吸時無血)的時間，即為出血時間。大鼠妊娠第14天，末次給藥后1h，1%戊巴比妥鈉麻醉，取腹主動脈血2mL。加入有抗凝劑的試管中，充分搖勻，2000r/min低溫離心15min，分離血清。用全自動血凝分析儀測定凝血酶原時間(PT)，凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原(FIB)的值。

2.3.2血清性激素水平的測定:大鼠妊娠第14天，末次給藥后1h，1%戊巴比妥鈉麻醉，取腹主動脈血。靜止30min后，2000r/min低溫離心15min，分離血清。采用放射免疫分析法測定血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、卵泡刺激激素(FSH)和黃體生成素(LH)水平。

2.3.3子宮和卵巢指數(shù)的測定:大鼠取血后，脫頸椎處死，剖取子宮、卵巢。用濾紙吸干臟器，采用電子天平精密稱重，采用如下公式計算：臟器指數(shù)=臟器重量(mg)/大鼠質(zhì)量(g)。

3 結(jié) 果

3.1自擬婦血安湯對大鼠出血時間與凝血功能指標(biāo)的影響:結(jié)果表明，與空白組相比，模型組大鼠出血時間明顯縮短，凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)有所增長，纖維蛋白原(FIB)明顯降低(P<0.05)。與模型組相比，陽性對照組和自擬婦血安湯低、高劑量組出血時間、PT、TT明顯縮短，F(xiàn)IB明顯增高(P<0.05)。自擬婦血安湯低、高劑量組出血時間、PT、TT短于陽性對照組，F(xiàn)IB明顯高于陽性對照組，具有顯著性意義(P<0.05)。結(jié)果見表1。

表1 自擬婦血安湯對大鼠出血時間及凝血功能指標(biāo)的影響

3.2自擬婦血安湯對大鼠血清性激素水平的影響:結(jié)果表明，與空白組相比，模型組大鼠血清E2、P、FSH水平顯著升高，LH明顯降低(P<0.05)。與模型組相比，陽性對照組和自擬婦血安湯低、高劑量組血清E2、P、FSH水平顯著降低，LH顯著升高(P<0.05)。自擬婦血安湯低劑量組與陽性對照組E2、P、LH水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);自擬婦血安湯高劑量組E2、P、FSH水平明顯低于陽性對照組，LH明顯高于陽性對照組(P<0.05)。結(jié)果見表2。

表2 自擬婦血安湯對大鼠血清激素雌二醇孕酮卵泡刺激激素和黃體生成激素的影響

3.3自擬婦血安湯對大鼠子宮和卵巢指數(shù)的影響:結(jié)果表明，模型組大鼠的子宮系數(shù)明顯低于空白組(P<0.01)；與模型組比較，自擬婦血安湯低、高劑量組和陽性對照組能顯著增加大鼠子宮和卵巢指數(shù)(P<0.01)。結(jié)果見表3。

表3 自擬婦血安湯對大鼠子宮和卵巢指數(shù)的影響

4 討 論

功能失調(diào)性子宮出血是由于下丘腦-垂體-卵巢軸的功能失調(diào)造成的[7]。在下丘腦促性腺激素的作用下，垂體分泌卵泡刺激素和黃體酮刺激素，卵泡刺激素主要促進卵泡的各種細胞的生長發(fā)育，利于生殖細胞的成熟，并刺激卵巢顆粒細胞的增生，促進卵泡激素的分泌；黃體酮刺激素具有促進排卵的作用，在卵巢周期中期的量達到最高，能使卵泡合成變?yōu)辄S體，進而分泌孕酮。雌激素具有促進子宮發(fā)育，引起肌細胞的增生和肥大，使肌層變厚，子宮內(nèi)膜增生，血運增加。而孕酮能促進子宮內(nèi)膜由增生期轉(zhuǎn)化為分泌期，可以拮抗因雌激素分泌過多或持續(xù)時間過長所引起的自發(fā)破潰出血。因此，調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-卵巢軸功能是改善卵巢功能，促進排卵，治療功能失調(diào)性子宮出血的關(guān)鍵[8]。

中醫(yī)認為功能失調(diào)性子宮出血是因為脾虛統(tǒng)攝無力，沖任失固不能攝血所致[9]。自擬婦血安湯具有活血止血，行氣止痛功效，臨床上治療功能失調(diào)性子宮出血有顯著療效。本動物實驗研究結(jié)果表明，自擬婦血安湯能可改善功能失調(diào)性子宮出血大鼠模型的凝血功能，能很好的調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-卵巢軸功能，促進卵泡成熟和排卵，增加大鼠子宮和卵巢指數(shù)。該結(jié)果提示自擬婦血安湯在功血治療方面有一定療效，但其作用機制尚需進一步深入研究。