綠葉蔬菜上9種農(nóng)藥的檢測(cè)及殘留去除方法

盛佳聯(lián)，石巧巧，陳俐，楊曉云，徐漢虹

華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院（廣州 510642）

隨著人們飲食觀念的提升，蔬菜在人們餐桌上占據(jù)的地位越來(lái)越重要。綠葉蔬菜莖葉鮮嫩，富含多種維生素，更是深受人們的喜愛。但是，綠葉蔬菜生長(zhǎng)周期短，農(nóng)藥使用量大，加上部分菜農(nóng)未按規(guī)定的安全間隔期采收，導(dǎo)致綠葉蔬菜農(nóng)藥殘留問(wèn)題屢見不鮮[1-4]。有機(jī)磷農(nóng)藥是指含磷元素的有機(jī)化合物農(nóng)藥。有機(jī)磷農(nóng)藥種類繁多，大部分對(duì)人畜高毒或中等毒性。有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法[6-8]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9-10]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[11]、酶聯(lián)免疫檢測(cè)法等[12]。

綠葉蔬菜含水量較高，不耐儲(chǔ)存，農(nóng)藥殘留無(wú)法通過(guò)長(zhǎng)期存儲(chǔ)進(jìn)行降解。消費(fèi)者購(gòu)買后短期內(nèi)就會(huì)食用，家庭清洗是保障消費(fèi)者農(nóng)產(chǎn)品食用安全的最后一道防線。

試驗(yàn)采用氣相色譜法，建立同時(shí)測(cè)定綠葉蔬菜中9種有機(jī)磷農(nóng)藥的方法，為綠葉蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的分析檢測(cè)提供了可靠、有效的分析手段。同時(shí)探究了不同家庭處理方式對(duì)綠葉蔬菜上有機(jī)磷農(nóng)藥的去除效果，為家庭安全食用綠葉蔬菜提供參考意見。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

毒死蜱（100 μg/mL）、甲基毒死蜱（100 μg/mL）、敵敵畏（100 μg/mL）、樂(lè)果（100 μg/mL）、氧樂(lè)果（100 μg/mL）、馬拉硫磷（100 μg/mL）、甲拌磷（100 μg/mL）、殺螟硫磷（100 μg/mL）、滅線磷（100 μg/mL）等標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；生菜、菠菜、上海青、菜心，市售；丙酮，色譜純，迪馬公司；乙腈、丙酮、乙酸乙酯、氯化鈉、無(wú)水硫酸鎂，分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠；N-丙基乙二胺（PSA）、石墨化炭黑（GCB）、C18凈化劑，美國(guó)Welch公司。

1.2 儀器與設(shè)備

安捷倫7890B氣相色譜儀，配有火焰光度檢測(cè)器（GC-FPD），美國(guó)Agilent公司；Midea MJ-25BM02C組織搗碎機(jī)，上海啟前電子科技有限公司；Anke TDL-4離心機(jī)，上海安享科學(xué)儀器廠；SK 2200 HP超聲波清洗機(jī)，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；BS124S電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器，上海亞榮生化儀器廠；R201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海一科儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

用移液管各吸取1 mL毒死蜱、甲基毒死蜱、敵敵畏、樂(lè)果、氧樂(lè)果、馬拉硫磷、甲拌磷、殺螟硫磷、滅線磷標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，用色譜丙酮定容至10 mL，得到混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液。該溶液置于-18 ℃保存。用移液管量取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用色譜丙酮稀釋，配制成質(zhì)量濃度為5.0，1.0，0.5，0.1，0.05和0.01 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，于4 ℃冷藏備用。

1.3.2 載藥樣品的制備

分別將9種有機(jī)磷農(nóng)藥制劑（40%毒死蜱乳油、40%甲基毒死蜱乳油、80%敵敵畏乳油、40%樂(lè)果乳油、40%氧化樂(lè)果乳油、45%馬拉硫磷乳油、55%甲拌磷乳油、50%殺螟硫磷乳油、40%滅線磷乳油）按照蔬菜上推薦最高劑量稀釋，各取200 mL混勻。將混勻后的藥液均勻噴施于綠葉蔬菜（廣東菜心）表面，等待2 h自然晾干，即為載藥樣品。

1.3.3 樣品前處理

提?。壕_稱取10 g（精確至0.01 g）勻漿后的蔬菜樣品（生菜、菠菜、上海青、菜心）于50 mL塑料離心管中，加入20 mL乙腈，渦旋1 min，超聲提取30 min，加入3 g氯化鈉，渦旋1 min，以4 000 r/min高速離心5 min，待乙腈與水相分層，移取10 mL上清液至150 mL旋蒸瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上45 ℃旋蒸至干，加1.5 mL色譜丙酮復(fù)溶，待凈化。

凈化：分別稱取100 mg PSA，100 mg C18和20 mg GCB置于10 mL離心管中，將待凈化溶液轉(zhuǎn)移入離心管中，渦旋混勻1 min，過(guò)0.22 μm有機(jī)微孔濾膜，待氣相色譜儀分析。

1.4 色譜條件

色譜柱：HP-5 石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度240 ℃；檢測(cè)器溫度280 ℃；升溫程序：60 ℃保持1 min，以10 ℃/min升至250 ℃，保持3 min，以20 ℃/min升至280 ℃，保持2 min；載氣，高純氮?dú)猓ā?9.999%）；恒流，流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量1 μL；不分流進(jìn)樣；保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

在農(nóng)藥殘留試驗(yàn)中，提取是至關(guān)重要的一環(huán)，合適的提取溶劑可以最大程度地將目標(biāo)物提取出來(lái)，同時(shí)不引入其他雜質(zhì)[13]。分別采用乙腈、丙酮、乙酸乙酯、乙酸乙酯-環(huán)己烷混合液（1∶1，V/V）提取[14-15]，結(jié)果顯示，當(dāng)用乙酸乙酯作提取溶劑時(shí)，回收率在55.3%～81.8%之間；當(dāng)用乙酸乙酯/環(huán)己烷混合液作提取溶劑時(shí)，回收率在71.6%～86.1%之間；當(dāng)用丙酮作提取溶劑時(shí)，回收率在79.5%～97.3%之間，但同時(shí)丙酮也將綠葉蔬菜中的葉綠素等雜質(zhì)提取出來(lái)，提取液顏色加深，為后續(xù)凈化帶來(lái)困難；當(dāng)用乙腈作提取溶劑時(shí)，回收率在83%～111%之間，且提取液較為透明，雜質(zhì)相對(duì)較少，最終決定選用乙腈作為提取溶劑。

2.2 凈化劑的選擇

傳統(tǒng)的凈化方法，如固相萃取小柱法，需要活化小柱和洗脫，步驟繁瑣，操作麻煩，不適合大批量樣品的處理[16-17]。在QuEChERS方法中，常用PSA（N-丙基乙二胺）、C18（十八烷基鍵合硅膠）、GCB（石墨化炭黑）來(lái)凈化樣品，PSA可以去除脂肪酸、糖類、酚類和極性色素[18]。C18對(duì)非極性干擾物質(zhì)如脂類、蠟質(zhì)的去除效果較好。GCB對(duì)平面結(jié)構(gòu)分子具有極強(qiáng)的親和力。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，當(dāng)PSA、C18和GCB三者用量分別為100，100和30 mg時(shí)，樣品提取液基本透明，回收率在82.7%～103.3%之間，可以滿足凈化要求。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將毒死蜱、甲基毒死蜱、敵敵畏、樂(lè)果、氧樂(lè)果、馬拉硫磷、甲拌磷、殺螟硫磷、滅線磷配成質(zhì)量濃度為10 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用色譜丙酮依次稀釋成質(zhì)量濃度為5.0，1.0，0.5，0.1，0.05和0.01 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。以色譜峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到9種農(nóng)藥的線性回歸方程、線性范圍和線性相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表1。

表1 方法的線性范圍、線性方程及相關(guān)系數(shù)

2.4 方法的回收率和精密度

在空白蔬菜樣品中添加不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加水平設(shè)為0.01，0.10和1.00 mg/L 3個(gè)質(zhì)量濃度，每個(gè)質(zhì)量濃度設(shè)6個(gè)平行（n=6），按照1.3.2方法處理，在優(yōu)化條件下測(cè)定。結(jié)果表明該方法的回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差符合農(nóng)藥多殘留分析要求（表2）?？瞻谆|(zhì)圖譜和添加回收?qǐng)D譜見圖1和圖2。

表2 有機(jī)磷農(nóng)藥在蔬菜樣品中的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

圖1 空白綠葉蔬菜樣品色譜圖

圖2 綠葉蔬菜中9種農(nóng)藥添加回收色譜圖（添加水平0.1 mg/L）

2.5 家庭處理方法對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留去除效果

按照常用家庭處理方式對(duì)1.3.2制備的載藥樣品進(jìn)行清洗，考察不同處理方式對(duì)農(nóng)藥殘留的去除效果。處理方法：a）自來(lái)水浸泡后清洗；b）放置12 h的淘米水浸泡后清洗；c）5%食鹽水浸泡后清洗；d）5%小蘇打溶液浸泡后清洗；e）5%食用醋溶液浸泡后清洗；f）不做任何處理，作為對(duì)照，計(jì)算初始農(nóng)藥殘留量。每組3個(gè)重復(fù)，浸泡時(shí)間均為5 min，浸泡后清洗次數(shù)為1次。不同處理下有機(jī)磷農(nóng)藥殘留去除效果如圖3所示。

結(jié)果表明，5種處理方式均可以有效降低廣東菜心中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留。其中，a、c、e 3個(gè)處理對(duì)農(nóng)殘去除效果一般，去除率在18.4%～26.8%之間；b處理農(nóng)殘去除效果較好，去除率在26.5%～34.7%之間；d處理農(nóng)殘去除效果最好，去除率在33.1%～58.3%之間。

圖3 不同家庭處理方式對(duì)廣東菜心中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留去除效果

3 討論與結(jié)論

通過(guò)改進(jìn)的QuEChERS方法和分散固相萃取法，建立了GC-FPD同時(shí)測(cè)定綠葉蔬菜中9種有機(jī)磷農(nóng)藥的方法。農(nóng)藥質(zhì)量濃度在0.01～5.00 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，三個(gè)添加水平（0.01～1.00 mg/kg）下的平均加標(biāo)回收率在79%～106%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.30%～9.60%之間。該方法簡(jiǎn)單、快速、有效，可用于綠葉蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)定。

利用上述建立的方法，探究了不同家庭處理方式對(duì)廣東菜心中9種有機(jī)磷農(nóng)藥的去除效果。結(jié)果表明，自來(lái)水浸泡5 min后清洗，農(nóng)殘去除率為18.4%～26.8%，去除效果一般，可能是大部分農(nóng)藥極性較弱，在水中溶解度較低，自來(lái)水浸泡并不能有效提高農(nóng)殘去除率。家用食鹽對(duì)綠葉蔬菜上農(nóng)殘去除效果作用較小，甚至去除率低于自來(lái)水的去除率，可能是食鹽水破壞蔬菜葉片結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致葉片表面農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移進(jìn)入葉片內(nèi)部。食用醋和自來(lái)水農(nóng)殘去除率相當(dāng)，說(shuō)明酸性環(huán)境對(duì)有機(jī)磷去除效果不明顯。和自來(lái)水相比，淘米水對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的去除效果有明顯提升，可能是淘米水呈弱堿性，可以破壞有機(jī)磷農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)，但淘米水可能自身就帶有農(nóng)藥殘留，清洗蔬菜容易引入新的農(nóng)藥殘留。和淘米水相比，小蘇打溶液因?yàn)閴A性更強(qiáng)，其去除有機(jī)磷農(nóng)藥的效果更好，且不會(huì)引入新的農(nóng)藥殘留，是一種比較有效的手段。