抗婦炎膠囊中苦參的質(zhì)量控制研究

姜 蓮 王影超 廖 敏 許亞玲

貴州省食品藥品檢驗所，貴州 貴陽 550004

抗婦炎膠囊收載于國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編，中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)部分，由苦參、杠板歸、黃柏、連翹、益母草等8味藥材組成，具有活血化瘀、清熱燥濕之功效。用于濕熱下注型盆腔炎、陰道炎、慢性宮頸炎，癥見赤白帶下、陰癢、出血、痛經(jīng)等癥[1-2]?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅有苦參堿的TLC鑒別及苦參堿的HPLC含量測定，不能全面控制抗婦炎膠囊的質(zhì)量，本實驗增修了苦參、氧化苦參堿的TLC鑒別、氧化苦參堿的HPLC含量測定，以期較全面地對苦參進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津 LC2010 液相色譜儀；KQ-500DB型數(shù)控超聲波提取儀(昆山市超聲儀器有限公司);硅膠G薄層板：青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的硅膠G薄層板(批號：20140408)及自制硅膠G薄層板。

1.2 材料 抗婦炎膠囊由貴州遠(yuǎn)程制藥有限責(zé)任公司提供(生產(chǎn)批號：20171031、20171121、20180251、20180121)；苦參對照藥材(121019-201006)、苦參堿對照品(110821-200711)、氧化苦參堿對照品(110821-200711)均來源于中國藥品生物制品檢定所；乙腈、無水乙醇均為色譜純，甲醇、磷酸、二氯甲烷、三氯甲烷、氨水、乙醇均為分析純，水(UPW-50N型超凈水器制備超純水)。

2 方法與結(jié)果

2.1 苦參TLC鑒別 取本品內(nèi)容物2 g，加濃氨試液0.3 mL，再加二氯甲烷25 mL，加熱回流30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取苦參對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取苦參堿對照品及氧化苦參堿對照品，分別加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按處方比例稱取除苦參外其他藥材適量，制成缺苦參的陰性對照樣品，同法制備缺苦參的陰性對照溶液。照薄層色譜法[3]試驗，吸取上述供試品溶液及對照藥材溶液各2～3 μL、對照品溶液各6 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-濃氨試液(5∶0.6∶0.3)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，預(yù)飽和15 min，展開，取出，晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，且缺苦參的陰性對照無干擾。如圖1所示。

2.2 苦參堿、氧化苦參堿含量測定[4-6]

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Angilent NH2(250 mm×4.6 mm 5μm)；流動相：乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液(82∶9∶9)；檢測波長為220 nm；柱溫30 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL。理論板數(shù)按氧化苦參堿峰計算，應(yīng)不低于2000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取苦參堿對照品、氧化苦參堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL各含70 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1 mL使?jié)駶?，放? min，精密加入三氯甲烷25 mL，稱定重量，密塞，超聲處理(500W 40 KHz)30 min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10 mL，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.4 陰性供試品溶液的制備 取缺苦參陰性樣品，按照2.2.3制備成陰性供試品溶液，即得。

2.2.5 專屬性考察 取苦參堿、氧化苦參堿對照品溶液、抗婦炎膠囊供試品溶液及陰性供試品溶液各10 μL，按照“2.2.1”色譜條件注入液相色譜儀，供試品溶液色譜在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置有相應(yīng)的色譜峰，且陰性無干擾，如圖2所示。

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密取混合對照品(苦參堿70 μg/mL、氧化苦參堿70 μg/mL)1 μL、2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL依次注入液相色譜儀，測定峰面積。以對照品進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸計算，繪制工作曲線(圖1～2)，得出苦參堿線性回歸方程為：Y=508698X+1568.8,r=0.9999；氧化苦參堿線性回歸方程為：Y=508730X+1568.8,r=0.9999?？鄥A在0.07030～1.75750 μg、氧化苦參堿在0.06926～1.73155 μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度試驗 精密量取同一混合對照品10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖峰面積，苦參堿對照品的峰面積RSD為0.2%，氧化苦參堿對照品的峰面積RSD為0.6%，結(jié)果說明儀器精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗 取同一批抗婦炎膠囊，按“2.2.3”供試品溶液制備方法制備6份，按“2.2.1”色譜條件測定苦參堿、氧化苦參堿的含量，結(jié)果測定苦參堿平均含量為3.9464 mg/g,RSD為1.8%；氧化苦參堿平均含量3.6970 mg/g,RSD為2.2%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗 取同一批抗婦炎膠囊，按“2.2.1”色譜條件，于0 h、2 h、8 h、12 h、18 h、24 h，測定苦參堿、氧化苦參堿的峰面積，苦參堿RSD為0.6%、氧化苦參堿RSD為0.5%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.10 回收率試驗 取已測定含量的抗婦炎膠囊(苦參堿平均含量3.8847 mg/g；氧化苦參堿平均含量3.5853 mg/g)0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1 mL使?jié)駶?，放? min，精密加入含苦參堿對照品(0.03897 mg/mL)、氧化苦參堿對照品(0.03599 mg/mL)的三氯甲烷混合溶液25 mL，按“2.2.1”色譜條件測定苦參堿、氧化苦參堿的含量，計算回收率，結(jié)果見表1、表2。

表2 氧化苦參堿回收率試驗數(shù)據(jù) (n=6)

表1 苦參堿回收率試驗數(shù)據(jù) (n=6)

2.2.11 樣品測定 取3批抗婦炎膠囊樣品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”色譜條件測定苦參堿、氧化苦參堿的含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品測定結(jié)果

3 討論

康婦炎膠囊的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中苦參的質(zhì)量控制僅有苦參堿的TLC鑒別及HPLC鑒別，專屬性較差，且薄層鑒別中提取方法及展開系統(tǒng)均含有對人體的毒害作用的三氯甲烷試劑，經(jīng)考察并驗證，本文薄層鑒別采用毒性較小的二氯甲烷替代三氯甲烷進(jìn)行實驗，方法可行；含量測定在考察提取溶劑時，二氯甲烷的提取效率明顯低于三氯甲烷，故暫不考慮替代。故本次研究，薄層方法中增加苦參對照藥材及氧化苦參堿對照品，含量測定方法增加了氧化苦參堿指標(biāo)成分，為進(jìn)一步控制苦參質(zhì)量提出依據(jù)。

現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)苦參含量測定色譜柱以“十八烷基硅烷鍵合硅膠”為填充劑，該方法很難得到較好的峰形，且重現(xiàn)性較差。實驗選用專屬性較強的“氨基硅烷鍵合硅膠”為填充劑的色譜柱進(jìn)行考察，以乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液(82∶9∶9)為流動相，結(jié)果表明采用氨基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱專屬性強、分離效果較好、重現(xiàn)性好。