高效液相色譜法檢測(cè)20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑

劉 鈺，莊占興，劉 軍，崔蕊蕊，朱芹芹，韓增瑞，韓金濤*

(1.山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院，山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250033;2.濟(jì)南綠霸農(nóng)藥有限公司，山東 濟(jì)南 251600)

噁唑酰草胺(Metamifop，結(jié)構(gòu)見圖1)，化學(xué)名稱：(2R)-2-[4-[(6-氯-2-苯噁唑基)]苯氧基]-N-(2-氟苯)-N-甲基丙酰胺。噁唑酰草胺(metamifop)是一種新的芳氧苯氧丙酸酯類(APP)除草劑。APP從上世紀(jì)70年代開始用于寬葉作物防除窄葉雜草，但噁唑酰草胺是這類除草劑中第一個(gè)在水稻上顯示選擇性的品種。噁唑酰草胺有著廣泛的可混性，并有望用于其它類作物和草坪除草，已在全世界各地進(jìn)行了各種田間試驗(yàn)，是一個(gè)很有發(fā)展前途的除草劑品種[1]。

滅草松(Bentazone，結(jié)構(gòu)見圖1)，化學(xué)名稱：3-異丙基-(1H)-苯并-2,1,3-噻二嗪-4-酮-2,2-二氧化物。滅草松屬雜環(huán)類觸殺型具選擇性的苗后除草劑，用于苗期，莖葉處理。防除冬、春禾谷類作物田中闊葉類雜草。噁唑酰草胺與滅草松兩者進(jìn)行混配，可以有效防除水稻田禾各類雜草[2-3]。

圖1 噁唑酰草胺和滅草松的結(jié)構(gòu)式

目前國(guó)內(nèi)已有噁唑酰草胺的液相色譜和色譜-質(zhì)譜法分析相關(guān)報(bào)道[4-9]，也有對(duì)滅草松的液相色譜和液相色譜-質(zhì)譜法分析報(bào)道[10-13]。但噁唑酰草胺和滅草松混配制劑的色譜分析尚未見報(bào)道。本文建立了一種同時(shí)快速定性定量檢測(cè)20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑的高效液相色譜分析方法，該檢測(cè)方法靈敏度高，準(zhǔn)確可靠，簡(jiǎn)便、快速，有較高的實(shí)際應(yīng)用和參考價(jià)值。

1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.1 儀器和試劑

日立Primaide高效液相色譜儀，具有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；

N2000色譜工作站；

乙腈：LC級(jí)；

水：0.22μm濾膜過(guò)濾的二次水；

噁唑酰草胺標(biāo)準(zhǔn)品(CAS:256412-89-2)：質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.0%；

滅草松標(biāo)準(zhǔn)品(CAS：25057-89-0)：質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.0%；

分析樣品：20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑。

1.2 HPLC儀器條件

色譜柱： BDS HYPERSIL-C18(250mm×4.6mm×5μm)；

檢測(cè)波長(zhǎng)λ：240nm；

流動(dòng)相：V(乙腈)∶V(水)=65∶35；

流量：1.0mL/min；

柱溫：室溫；

進(jìn)樣體積：5μL；

保留時(shí)間：滅草松約2.4min；噁唑酰草胺7.6min。

圖見2、圖3為噁唑酰草胺和滅草松典型LC色譜圖。

圖2 噁唑酰草胺和滅草松標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)LC色譜圖

圖3 20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑LC色譜圖

1.3 分析步驟

1.3.1 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確稱取0.01g噁唑酰草胺標(biāo)樣和0.05 g滅草松標(biāo)樣，置于同一50mL容量瓶中，用乙腈溶解，并用乙腈準(zhǔn)確定容,經(jīng)超聲波振蕩15min待用。

1.3.2 配制試樣溶液

準(zhǔn)確稱取20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑試樣0.3g置于50mL容量瓶中，用乙腈定容備用。

1.3.3 HPLC分析

在上述分析條件下，等儀器狀態(tài)穩(wěn)定基線平穩(wěn)后，注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，等相鄰兩針標(biāo)樣中目標(biāo)物峰面積的相對(duì)變化控制在1.5%以內(nèi)后，按照一針標(biāo)樣、一針試樣、一針試樣、一針標(biāo)樣的順序依次進(jìn)行進(jìn)樣，記錄結(jié)果。

1.3.4 計(jì)算方法

本實(shí)驗(yàn)以目標(biāo)物在色譜圖中的保留時(shí)間定性，采用外標(biāo)法依據(jù)峰面積大小來(lái)定量。將測(cè)得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中目標(biāo)物的峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中被測(cè)組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X1(%)，按下述公式計(jì)算：

式中：

A1——標(biāo)樣溶液中，目標(biāo)物峰面積的平均值；

A2——試樣溶液中，目標(biāo)物峰面積的平均值；

M1——目標(biāo)物標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

M2——試樣質(zhì)量，g；

P——標(biāo)樣中目標(biāo)物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 HPLC分析條件的優(yōu)化

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)λ的確定

對(duì)噁唑酰草胺/滅草松標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液進(jìn)行紫外波長(zhǎng)(190～400nm)全掃描，得到波長(zhǎng)λ與響應(yīng)值A(chǔ)的光譜圖。根據(jù)光譜圖可知，噁唑酰草胺/滅草松在λ=240nm時(shí)，有較強(qiáng)吸收峰，且雜質(zhì)和流動(dòng)相干擾小，所以確定該分析方法的檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm。

2.1.2 色譜柱和流動(dòng)相的確定

根據(jù)噁唑酰草胺/滅草松的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，選用Thermo Hypersil ODS C18不銹鋼柱對(duì)試樣進(jìn)行分離檢測(cè)。在上述色譜柱條件下，我們嘗試了常規(guī)流動(dòng)相甲醇、乙腈等按照不同的比例與水進(jìn)行混配作為流動(dòng)相。在保證噁唑酰草胺和滅草松既能夠出峰快又能夠有效分離前提下，為節(jié)約成本，最終確定V(乙腈)∶V(水)=65∶35作為試驗(yàn)條件。

2.2 分析方法線性相關(guān)性研究

配制噁唑酰草胺濃度分別為53,101,191,249,337mg/L的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量溶液，在上述確定好的色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定，將噁唑酰草胺的質(zhì)量濃度為為橫坐標(biāo)，將其峰面積作為縱坐標(biāo)進(jìn)行作圖，可得到線性回歸方程：y = 4804.3x - 3214.4，相關(guān)系數(shù)r=0.9992。結(jié)果可看出，在上述分析條件下，噁唑酰草胺質(zhì)量濃度在53～337mg/mL范圍內(nèi)具有較好的定量線性關(guān)系。

配制滅草松濃度分別為290,540,1013,1364,1724mg/L的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量溶液，同樣在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，將滅草松的質(zhì)量濃度作為橫坐標(biāo)，將其峰面積作為縱坐標(biāo)作圖，得到線性回歸方程：y = 3994.5x + 141678，相關(guān)系數(shù)r=0.9995。結(jié)果可看出，在上述分析條件下，滅草松質(zhì)量濃度在290-1724mg/L范圍內(nèi)具有較好的定量線性關(guān)系。

2.3 分析方法精密度研究

選用上述優(yōu)化的色譜條件，為研究其標(biāo)準(zhǔn)偏差和RSD值，我們對(duì)20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑進(jìn)行了5次平行檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果見表1、表2。

表1 噁唑酰草胺精密度測(cè)量結(jié)果

表2 滅草松精密度測(cè)量結(jié)果

2.4 分析方法回收率研究

在已知組分含量的20%噁唑酰草胺·滅草松微乳劑試樣溶液中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，選用上述優(yōu)化的色譜條件，測(cè)定加標(biāo)試樣中被測(cè)組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，計(jì)算添加回收率(見表3、表4)。由表3可看出，噁唑酰草胺的回收率范圍99.0%～100.2%，對(duì)5次回收率進(jìn)行平均計(jì)算，得出其平均回收率為99.4%。由表4可知，滅草松的回收率范圍99.1%～101.4%，對(duì)5次回收率進(jìn)行平均計(jì)算，得出其平均回收率為99.9%。由此可見，該分析方法同時(shí)測(cè)定噁唑酰草胺/滅草松的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，具有滿意的回收率。

表3 噁唑酰草胺回收率試驗(yàn)結(jié)果

表4 滅草松回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

上述HPLC分析方法能夠同時(shí)快速準(zhǔn)確測(cè)定樣品中噁唑酰草胺和滅草松的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，且具有良好的線性關(guān)系r>0.9992，有令人滿意的精密度和回收率，該分析方法可以對(duì)實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量檢測(cè)提供依據(jù)，有一定參考價(jià)值。