固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定食用植物油中多菌靈殘留

張玉換，胡靜，趙月鈞

(綠城農(nóng)科檢測技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310051)

食用植物油是常見食用烹飪用品，不同的食用植物油營養(yǎng)成分含量存在著一定的差異[1]。隨著人們生活水平的提高，消費者開始越來越重視包括食用植物油在內(nèi)的食品安全質(zhì)量問題。初級農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留一直受到消費者們的廣泛關(guān)注，食用植物油主要來自于油料作物，若油料作物選擇不當或處理不當也會引起食用植物油中含有農(nóng)藥殘留的風(fēng)險。油菜籽、芝麻、花生和大豆是我國主要的油料作物，在種植過程中會遭到多種病蟲危害。在我國，油菜的種植面積占總油料作物的40%，菌核病是油菜種植過程中重要病害之一，該病會導(dǎo)致收獲的油菜籽出油率降低，從而影響植物油產(chǎn)量使之下降，嚴重時可至食用油減產(chǎn)高達70%，油菜菌核病大多發(fā)生在盛花期，防治該病可通過使用多菌靈可濕性粉劑按一定劑量加水噴霧防治[2-3]。其他油料作物如大豆和花生在生長中也易遭受根腐病、莖腐病、立枯病、冠腐病等多種病害的侵襲，種植戶為了提高產(chǎn)量，降低損失率，通常會使用多菌靈來處理種子，達到防治病害的目的[4]。多菌靈化學(xué)名稱N-(2-苯并咪唑基)-氨基甲酸甲酯，在油料作物生長過程中常用于防治各種病蟲害。

目前，我國對于食用植物油中農(nóng)藥殘留限量的指標設(shè)置較少，GB 2763—2019《食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中未規(guī)定食用植物油中多菌靈的殘留限量，但在油料作物油菜籽、花生仁、棉籽上規(guī)定了最大殘留限量值為0.1 mg·kg-1，油料作物大豆為0.2 mg·kg-1。常見的多菌靈殘留檢測方法有高效液相色譜和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測2種，多集中在蔬菜、水果、谷物、茶葉等常見初級農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)中的殘留檢測[5-10]，植物油中多菌靈殘留的檢測報道較少。本研究采用固相氨基萃取柱進行凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測植物油中多菌靈的殘留，方法前處理簡單，靈敏度高，易于操作，整體成本較低。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑和材料

TSQ Quantum配Survey液相操作系統(tǒng)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(美國Thermo Fisher Scientific公司)；Büchi R205型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琪有限公司)；GPC凝膠色譜凈化裝置(德國LCTech公司)；QT-2型旋渦混合器(上海琪特分析儀器有限公司)；KQ-50型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器公司)；色譜純乙腈和色譜純甲醇(德國Merck公司)；Envi-NH2固相萃取柱(美國Supelco公司)；試驗用水為去離子水；0.22 μm有機濾膜；純度為99.0%多菌靈(德國Dr. Ehrenstorfer GmbH公司)；純度為99.0%多菌靈-D3(北京振翔公司)。

用乙腈分別配置100 mg·L-1的多菌靈和多菌靈-D3內(nèi)標標準品儲備液，-18 ℃冰箱保存。

1.2 樣品前處理方法

準確稱取2.00 g植物油樣品，于50 mL試管中，加入8 mL二氯甲烷渦旋3 min，超聲5 min提取，8 000 r·min-1離心3 min，取有機相層待凈化。先用甲醇+二氯甲烷(5+95)5 mL和二氯甲烷5 mL預(yù)淋氨基固相萃取柱，待預(yù)淋液到達柱吸附層表面時，加入提取液，棄去，再加入10 mL二氯甲烷，棄去；用甲醇+二氯甲烷(5+95)10 mL洗脫接收，將接收液用氮氣40 ℃水浴加熱吹干，再加入0.5 mg·L-1多菌靈-D3同位素標準溶液1 mL復(fù)溶后，用甲醇定容至2 mL，超聲溶解，渦旋，過膜，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀待測。

1.3 GPC凈化方法

凈化條件為320 mm×25 mm凝膠色譜柱(B200～400目S-X3凝膠填料40～80 μm)；洗脫溶劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶1，v∶v) 5 mL·min-1。取5 mL多菌靈菜籽油溶液(1 mg·L-1)，收集過GPC后的餾分，共45 min，每分鐘收集1份，收集的洗脫液(轉(zhuǎn)移至平底燒瓶)于40 ℃，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，氮氣吹干，甲醇溶解定容至5 mL，過膜，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，根據(jù)每分鐘收集餾分的回收率來確定最佳餾分收集時間。

1.4 色譜質(zhì)譜條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱為Sepax GP-C18(150 mm×2.0 mm，3 μm)；柱溫30 ℃；進樣量5 μL；流動相為含0.1%甲酸甲醇溶液/2 mmol·L-1乙酸銨溶液(90/10，V/V)；流速0.25 mL·min-1。在此條件下多菌靈和多菌靈-D3保留時間分別為1.68和1.67 min。

1.4.2 質(zhì)譜條件

離子源為電噴霧離子源(ESI)；正離子掃描；多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式，噴霧電壓4 000 V；毛細管溫度350 ℃；霧化氣和氣簾氣為氮氣；碰撞氣為0.2 Pa氬氣。多菌靈保留時間1.68 min，定性離子對為192/132，碰撞能量29 eV，定量離子對為192>160，碰撞能量17 eV；內(nèi)標多菌靈-D3保留時間為1.67 min，定量離子對為195>160，碰撞能量16 eV。

2 結(jié)果與討論

2.1 GPC凈化

如圖1所示，多菌靈在25 min后才被淋洗出來，38 min后仍有多菌靈未洗脫，所以食用植物油樣品中的多菌靈不適用于GPC方法來凈化。

圖1 多菌靈每分鐘餾分回收率

2.2 固相萃取柱凈化方法

采用固相萃取柱進行樣品的凈化已得到廣泛應(yīng)用，壽林飛等[11]考察了NH2柱用于凈化食用植物油中阿維菌素及甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(甲維鹽)的淋洗方法，回收率可達到95%以上。

本試驗也考察了不同比例的二氯甲烷和甲醇洗脫效果。圖2表明，比較10 mL二氯甲烷-甲醇不同配比的洗脫液，當體積比在95∶5的條件下菜籽油樣品中多菌靈回收率最高，達到94.6%，可見該條件下可滿足菜籽油中多菌靈回收試驗的要求。若再加大甲醇比例，會增加目標物質(zhì)雜質(zhì)含量，故本試驗選擇二氯甲烷+甲醇(95∶5)為洗脫試劑作為食用植物油樣品中多菌靈檢測的凈化條件。與GPC凈化相比，采用氨基固相萃取柱時，操作簡單，本試驗為植物油中多菌靈等不適宜用GPC凈化的農(nóng)藥殘留分析提供參考。

圖2 不同比例二氯甲烷-甲醇洗脫多菌靈回收率

2.3 線性范圍

本試驗采用內(nèi)標法定量，在所述儀器條件下進行測定，以標樣峰面積與標準溶液中內(nèi)標物峰面積之比為縱坐標，標準品濃度為橫坐標繪制標準曲線。結(jié)果顯示，在1～500 μg·L-1，多菌靈線性關(guān)系良好，線性方程為y=10.470x+0.012 8，相關(guān)系數(shù)1.000?？梢娫摲ǚ€(wěn)定性良好。

2.4 回收率和精密度

在未檢出多菌靈的大豆油、花生油和菜籽油樣品中分別添加不同含量的多菌靈標準溶液，渦旋混合，室溫靜置30 min后，按1.2節(jié)所述步驟對加標的3檔6水平樣品進行前處理過程及上機分析，并計算加標回收率和相對標準偏差。表1結(jié)果表明，回收率范圍為81.8%～93.5%，相對標準偏差范圍為4.6%～8.9%，符合農(nóng)藥殘留分析方法的要求。

表1 方法添加回收率和精密度

2.5 靈敏度

按最低檔加標濃度0.01 mg·kg-1分析其色譜信息，以噪音信號的3倍和10倍計算本方法的檢測限和定量限。最終得到本方法多菌靈的檢出限為0.30 μg·kg-1，定量限為1.00 μg·kg-1。

3 小結(jié)

采用氨基固相萃取柱凈化，建立了快速定量測定植物油中多菌靈殘留分析方法，具有良好的靈敏度、回收率和重復(fù)性。為食用植物油中測定多菌靈檢測方法建立了一定的檢測基礎(chǔ)。