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    新型抗菌性Hawley保持器的機(jī)械強(qiáng)度及抑制菌斑生物膜活性的作用

    2020-07-17 08:09:10曹麗張寧白玉興
    口腔疾病防治 2020年8期
    關(guān)鍵詞:基托菌斑唾液

    曹麗, 張寧, 白玉興

    首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京口腔醫(yī)院口腔正畸科,北京(100050)

    聚甲基丙烯酸甲酯(polymethyl methacrylate,PMMA)具有強(qiáng)度較高、與口腔環(huán)境生物相容性佳、容易制作成型等優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于制作正畸保持器[1]。然而口腔內(nèi)有多種微生物,其中大多數(shù)被認(rèn)為是條件致病菌[2],這些細(xì)菌常附著于保持器表面或周圍,積聚形成牙菌斑生物膜,不僅會(huì)引起齲齒、牙周病、產(chǎn)生口腔異味[3]而且會(huì)降低保持器的使用壽命[4]。在口腔環(huán)境中,唾液蛋白吸附于材料表面,形成一層均勻無(wú)細(xì)胞的薄膜,即獲得性膜,獲得性膜形成后細(xì)菌就會(huì)積聚、繁殖進(jìn)而形成牙菌斑。如果將具有抑制蛋白黏附的物質(zhì)添加到材料中,就可以從源頭抑制菌斑的形成。甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿(2?methacryloyloxyethyl phos?phorylcholine,MPC)能有效抑制蛋白質(zhì)的黏附,目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床[5]。已有學(xué)者將MPC 添加到牙科樹(shù)脂、正畸粘接劑等口腔材料中,在一定程度上減少了蛋白質(zhì)的附著,抑制了菌斑的形成[5]。但尚未有研究將MPC 添加到甲基丙烯酸甲酯(methyl methacrylate,MMA)中。本研究擬將MPC添加到MMA 中,并在口外模擬口腔環(huán)境,評(píng)價(jià)改性MMA 材料的長(zhǎng)期力學(xué)性能和抗菌性能,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 主要設(shè)備與材料

    正畸基托聚合物I 型粉、液(日進(jìn),中國(guó));MPC(Sigma?Aldrich,美國(guó));十二烷基硫酸鈉(Sig?ma?Aldrich,美國(guó));PBS(Sigma?Aldrich,美國(guó));牛血清蛋白溶液(Sigma?Aldrich,美國(guó));DMSO(Sigma?Aldrich,美國(guó));大豆血瓊脂培養(yǎng)板(Sigma?Al?drich,美國(guó));輕型唾液鏈球菌瓊脂培養(yǎng)板、桿菌肽(Sigma?Aldrich,美國(guó));原代人牙齦成纖維細(xì)胞(Sciencell 2620,美國(guó));蛋白質(zhì)分析試劑盒(Fisher Scientific,美國(guó));活/死細(xì)菌生存力試劑盒(Molecu?lar Probes,美國(guó));自動(dòng)冷熱浴循環(huán)儀(森日達(dá),中國(guó))、萬(wàn)能材料測(cè)試機(jī)(MTS,美國(guó))、熒光顯微鏡(Nikon,日本)、酶標(biāo)儀(SpectraMax M5,美國(guó))。

    1.2 MPC 改性MMA 試件的制備

    選用正畸基托聚合物I 型粉、液,按照材料說(shuō)明書(shū)推薦的調(diào)和比例粉︰液=1︰0.45 進(jìn)行調(diào)拌。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,將MPC 按照0%、1.5%、2.25%、3%、4.5%和6%的質(zhì)量百分比添加到MMA 中。每組制備10 個(gè)試件,分組如下:MMA + 0% MPC(對(duì)照組);MMA+ 1.5% MPC(1.5% MPC 組);MMA+2.25% MPC(2.25% MPC 組);MMA+ 3% MPC(3%MPC 組);MMA+ 4.5% MPC(4.5% MPC 組);MMA+6%MPC(6%MPC 組)。

    1.3 人工唾液浸泡及冷熱循環(huán)實(shí)驗(yàn)

    本研究參照文獻(xiàn)及ISO/TS 11405:2003 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行人工唾液浸泡及冷熱循環(huán)。將試件置于37 ℃恒溫水浴箱中,在人工唾液中分別浸泡1、90、180 d,在每一時(shí)間點(diǎn)將試件取出后放入自動(dòng)冷熱浴循環(huán)儀中進(jìn)行5 000 次冷、熱溫差(5 ℃30 s、55 ℃30 s)循環(huán)[6]。

    1.4 三點(diǎn)彎曲檢測(cè)

    將大小為2 mm×2 mm×25 mm 的長(zhǎng)方形試件經(jīng)過(guò)人工唾液浸泡和冷熱循環(huán)實(shí)驗(yàn)后取出,使用萬(wàn)能材料測(cè)試機(jī)進(jìn)行三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)。跨度為10 mm,以1 mm/min 的速度加力直到試件斷裂。彎曲強(qiáng)度按照公式3PmaxL/(2bh2)計(jì)算,其中P 代表斷裂時(shí)的載荷,L 代表跨距,b 代表試件的寬度,h 代表試件的厚度。彈性模量按照公式(P/d)(L3/[4bh3])計(jì)算,其中d 為線性彈性區(qū)域的斜率。

    1.5 抗蛋白附著性能的測(cè)試

    將粉、液調(diào)拌至材料到達(dá)面團(tuán)期時(shí)放入圓形試件模具中,最終制作成直徑8 mm、厚度0.5 mm 的圓形試件。為了去除未固化的單體,檢測(cè)前需將試件在蒸餾水中攪拌1 h,然后干燥并進(jìn)行環(huán)氧乙烷消毒。根據(jù)力學(xué)性能測(cè)試結(jié)果,在不影響MMA力學(xué)性能的前提下,MPC 的最大添加質(zhì)量百分比為3%。因此抗蛋白和抗菌性能的試件共分為兩組:對(duì)照組(0%MPC)和實(shí)驗(yàn)組(3%MPC),每組10個(gè)。

    試件表面蛋白附著量的檢測(cè)使用的是雙辛丁酸法。首先將試件放在PBS 中浸泡2 h 后,將試件取出放入牛血清蛋白溶液(bovine serum albumin,BSA)中,浸泡濃度為4.5 g/L,然后放置于37 ℃恒溫箱中2 h。2 h 后取出試件在PBS 中漂洗5 min,再放入含有1%十二烷基硫酸鈉的PBS 溶液中,超聲振蕩儀震蕩20 min后檢測(cè)PBS溶液中的蛋白質(zhì)濃度。

    1.6 抗菌性能的檢測(cè)

    1.6.1 人唾液的收集及牙菌斑全菌生物膜模型的建立 人唾液捐贈(zèng)者的納入標(biāo)準(zhǔn)是:牙周、牙體健康的成年人;口內(nèi)無(wú)修復(fù)體或活動(dòng)義齒;近3 個(gè)月內(nèi)無(wú)抗生素服用史;捐贈(zèng)前8 h 未刷牙;禁飲食2 h以上。捐贈(zèng)者通過(guò)咀嚼聚酯封口膜刺激分泌唾液,并放入15 mL 離心管中、冷藏。將收集的唾液混合后,使用無(wú)菌甘油進(jìn)行稀釋,混合唾液的最終濃度為70%,儲(chǔ)存在?80 ℃冰箱中[5]。

    人全菌生物膜的接種液是將上述混合唾液與McBain 培養(yǎng)基混合而成,其比例為1∶50。McBain培養(yǎng)基的配制方法如下:將2.5 g 粘蛋白、2.0 g 細(xì)菌蛋白胨、2.0 g 胰蛋白胨、1.0 g 酵母提取物、0.35 g 氯化鈉、0.2 g 氯化鉀、0.2 g 氯化鈣、0.1 g 鹽酸半胱氨酸、0.001 g 血紅素、0.000 2 g 維生素K1 放入1 L 蒸餾水中,調(diào)整pH 值為7 后高溫高壓下制備。將試件放入24 孔板中,加入接種液1.5 mL/孔,于培養(yǎng)箱(37 ℃,5% CO2)中培養(yǎng)48 h,在培養(yǎng)時(shí)間到達(dá)8 h、16 h 時(shí)需進(jìn)行換液[5]。

    1.6.2 生物膜活/死細(xì)菌染色 使用活/死細(xì)菌生存力試劑盒進(jìn)行生物膜的染色后,在熒光顯微鏡下觀察染色的生物膜。不同的熒光染色代表不同狀態(tài)的細(xì)菌:綠色熒光代表的是活細(xì)菌、紅色熒光代表死細(xì)菌、橙黃色熒光代表接近或重疊的死/活細(xì)菌[5]。

    1.6.3 細(xì)菌生物膜代謝活性的檢測(cè) MTT 法是檢測(cè)生物膜代謝活性的常用方法,通過(guò)比色分析檢測(cè)黃色化合物四唑MTT 經(jīng)酶催化作用后還原為水不溶的紫色甲臜[5]。將覆蓋有全菌生物膜的試件放入新24 孔板中,加入MTT 染料(1 mL/孔)后于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1 h 后再將試件轉(zhuǎn)至新24 孔板中,加入DMSO,于室溫下避光溫和攪拌20 min。在此過(guò)程中DMSO 可以溶解甲臜晶體。然后每孔吸取200 μL 的DMSO 溶液放入96 孔板中,通過(guò)讀取酶標(biāo)儀在540 nm 處的吸光度值來(lái)判斷生物膜的代謝活性。吸光度越高,則生物膜代謝活性越高。

    1.6.4 菌落形成單位(CFU)計(jì)數(shù) 選取2 mL 的試管,每個(gè)試管中放入一個(gè)覆有生物膜的試件,通過(guò)超聲震動(dòng)儀及渦旋混合震蕩儀將生物膜混勻。分別放入3 種瓊脂平板中培養(yǎng)后測(cè)定CFU:胰蛋白大豆血瓊脂培養(yǎng)板進(jìn)行總微生物的測(cè)定;含有15%蔗糖的輕型唾液鏈球菌瓊脂培養(yǎng)板進(jìn)行總鏈球菌的測(cè)定;加0.2 U/mL 桿菌肽的MSA 瓊脂培養(yǎng)板進(jìn)行變形鏈球菌的測(cè)定[5]。

    1.7 細(xì)胞毒性檢測(cè)

    使用MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性。本實(shí)驗(yàn)的浸提比例為1.13 cm2/mL,將試件放入6 mL DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)基中37 ℃下攪拌24 h 獲得原始浸提液。將原代人牙齦成纖維細(xì)胞用含有10%胎牛血清、100 IU/mL 青-鏈霉素的新鮮DMEM 培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)至第4~8 代。培養(yǎng)成2.5 × 104個(gè)/mL 的細(xì)胞懸液后,以4 000 個(gè)/孔的細(xì)胞濃度接種于96 孔板中,每孔鋪板200 μL,每個(gè)浸提濃度復(fù)孔6 個(gè)。空白對(duì)照組為新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液。分別在處理24、72 h 后用酶標(biāo)儀在490 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值,計(jì)算細(xì)胞相對(duì)增殖率(relative growth rate,RGR)。RGR=實(shí)驗(yàn)組OD490/空白對(duì)照組OD490× 100%,并依據(jù)RGR將材料的毒性反應(yīng)進(jìn)行分級(jí),0 級(jí):RGR ≥100%;1級(jí):75%≤RGR ≤99%;2 級(jí):50%≤RGR ≤74%;3級(jí):25% ≤RGR ≤73%;4 級(jí):1% ≤RGR ≤24%;5級(jí):RGR=0%。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    應(yīng)用SPSS 19 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,不同組別的三點(diǎn)彎曲結(jié)果、抗菌、抗蛋白附著結(jié)果及細(xì)胞相對(duì)增殖率滿足正態(tài)性與方差齊性,數(shù)據(jù)用±s表示,采用單因素方差分析和Tukey′s 檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。對(duì)長(zhǎng)期浸泡后的兩組試件的三點(diǎn)彎曲、抗菌、抗蛋白附著結(jié)果進(jìn)行重復(fù)測(cè)量方差分析。進(jìn)行重復(fù)測(cè)量資料分析時(shí),先進(jìn)行Mauchly 球形檢驗(yàn),若滿足球形檢驗(yàn)則重復(fù)測(cè)量分析的F檢驗(yàn)不需要進(jìn)行自由度校正,若不滿足球形檢驗(yàn),則采用Greenhouse?Geisser 法進(jìn)行自由度校正。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 各組試件不同浸泡時(shí)間下三點(diǎn)彎曲檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    隨著MPC 的增加,改性MMA 試件的力學(xué)性能不斷下降,對(duì)照組和3%MPC 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與對(duì)照組、1.5% MPC、2.25% MPC、3%MPC 相 比,4.5%MPC 和6%MPC 組 的 力 學(xué) 性 能 下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

    比較對(duì)照組和3% MPC 組的力學(xué)性能,兩組不同時(shí)間及兩組間的交互效應(yīng)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明兩組試件隨著干預(yù)時(shí)間增加,機(jī)械強(qiáng)度均有下降趨勢(shì),時(shí)間因素的作用隨分組不同而異。見(jiàn)表2。

    表1 添加MPC 后的MMA 試件彎曲強(qiáng)度和彈性模量比較Table 1 Comparison of the fracture strength and elastic modulus of different MMA specimens incorporating MPC x±s

    表2 添加MPC 后的MMA 試件不同浸泡時(shí)間下彎曲強(qiáng)度和彈性模量的比較Table 2 Comparison of the fracture strength and elastic modulus of different MMA specimens incorporating MPC after different water?aging times±s

    表2 添加MPC 后的MMA 試件不同浸泡時(shí)間下彎曲強(qiáng)度和彈性模量的比較Table 2 Comparison of the fracture strength and elastic modulus of different MMA specimens incorporating MPC after different water?aging times±s

    MPC: 2?methacryloyloxyethyl phosphorylcholine; MMA: methyl methacrylate; * indicates the F or P value of the main effect;Δ indicates the F or P value of the interactive effect

    Groups Flexural strength(MPa)Elastic modulus(GPa)1 d 71.52±3.73 69.59±4.33 70.41±4.03 1.31 0.29 90 d 68.89±3.96 71.66±4.50 70.28±4.23 1.28 0.30 180 d 64.48±1.81 68.97±3.31 66.73±2.56 6.71 0.001 Total 68.30±3.17 70.07±4.05 69.14±3.61 5.16*0.04*F P F P Control group 3%MPCgroup Total t P 11.52 1.19 5.65*3.42Δ 0.01 0.32 0.01*0.04Δ 1 d 2.14±0.23 2.12±0.16 2.13±0.20 1.03 0.39 90 d 2.02±0.42 2.10±0.37 2.06±0.40 0.79 0.51 180 d 1.77±0.31 2.07±0.37 1.92±0.34 3.32*0.03*Total 1.98±0.32 2.10±0.30 2.04±0.31 5.07*0.04*6.19 0.08 4.54*3.00Δ 0.006 0.928 0.02*0.06Δ

    2.2 兩組試件抗蛋白附著、菌斑代謝活性及菌落形成單位比較

    兩組試件的抗蛋白附著、菌斑代謝活性及菌落形成單位差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),3%MPC 組試件表面的蛋白附著量下降約80%、菌斑代謝活性下降約50%、菌落形成單位計(jì)數(shù)下降約70%;不同時(shí)間及兩者間的交互效應(yīng)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3~表6。

    2.3 兩組試件表面細(xì)菌黏附性能的定性比較

    由生物膜死/活細(xì)菌染色結(jié)果可見(jiàn)(圖1):對(duì)照組有大量綠色活菌,3%MPC組水老化1、90、180 d后均可見(jiàn)綠色活菌數(shù)量明顯減少;因此,MPC具有持久穩(wěn)定的抑制蛋白黏附進(jìn)而減少菌斑形成的能力。

    2.4 各組試件細(xì)胞相對(duì)增殖率的結(jié)果

    處理24 h 后,對(duì)照組及3% MPC 組的細(xì)胞增殖率分別為(93.5±1.3)%、(97.8±0.7)%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);處理72 h組后,對(duì)照組及3%MPC組的增殖率分別為(120.9±1.5)%、(116.4±0.5)%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。處理24 h 后兩組細(xì)胞毒性均為1級(jí),處理72 h后均為0級(jí)。

    表3 添加MPC 后的MMA 試件不同浸泡時(shí)間下抗蛋白附著、生物膜代謝活性的比較Table 3 Comparison of protein adsorption and biofilm metabolic activity of different MMA specimens incorporating MPC after different water?aging times±s

    表3 添加MPC 后的MMA 試件不同浸泡時(shí)間下抗蛋白附著、生物膜代謝活性的比較Table 3 Comparison of protein adsorption and biofilm metabolic activity of different MMA specimens incorporating MPC after different water?aging times±s

    MPC: 2?methacryloyloxyethyl phosphorylcholine; MMA: methyl methacrylate; * indicates the F or P value of the main effect;Δ indicates the F or P value of the interactive effect

    Groups Control group 3%MPC group Total Protein adsorption(μg/cm2)Biofilm metabolic activity(A540/cm2)1 d 6.16±1.41 0.77±0.52 3.47±0.97 43.82<0.001 90 d 6.18±2.70 0.82±0.26 3.50±1.48 22.67<0.001 180 d 6.89±1.21 0.85±0.67 3.87±0.94 73.56<0.001 Total 6.41±1.77 0.81±0.48 3.61±1.13 543.85*<0.001*F P F P t P 0.48 0.08 0.48*0.33Δ 0.62 0.93 0.57*0.66Δ 1 d 0.41±0.05 0.21±0.05 0.31±0.05 52.29<0.001 90 d 0.45±0.08 0.22±0.04 0.67±0.06 34.61<0.001 180 d 0.43±0.07 0.21±0.05 0.32±0.06 42.81<0.001 Total 0.43±0.07 0.21±0.05 0.43±0.06 2 123.02*<0.001*0.94 0.10 0.84*0.35Δ 0.41 0.91 0.44*0.70Δ

    表4 添加MPC 后的MMA 試件不同浸泡時(shí)間下總微生物形成單位計(jì)數(shù)結(jié)果比較Table 4 Total microorganisms CFU counts of different MMA specimens incorporating MPC after different water?aging time ±s

    表4 添加MPC 后的MMA 試件不同浸泡時(shí)間下總微生物形成單位計(jì)數(shù)結(jié)果比較Table 4 Total microorganisms CFU counts of different MMA specimens incorporating MPC after different water?aging time ±s

    MPC: 2?methacryloyloxyethyl phosphorylcholine; MMA: methyl methacrylate; * indicates the F or P value of the main effect, and Δ indicates the F or P value of the interactive effect

    Groups Control group 3%MPC group Total Total microorganisms(CFU)F P tP 1 d(3.0±2.0)×109(7.5±1.5)×108(1.9±1.1)×109 4.08 0.03 90 d(3.7±1.7)×109(4.5±2.9)×108(2.1±1.0)×109 3.92 0.03 180 d(2.5±3.1)×109(2.0±1.4)×108(1.4±1.6)×109 5.84 0.01 Total(3.1±2.2)×109(4.7±1.8)×108(1.8±1.2)×109 51.37*<0.001*0.39 7.16 0.19*2.71Δ 0.72 0.12 0.83*0.11Δ

    表5 添加MPC 后的MMA 試件不同浸泡時(shí)間下總鏈球菌形成單位計(jì)數(shù)結(jié)果比較Table 5 Total Streptococci CFU counts of different MMA specimens incorporating MPC after different water?aging time ±s

    表5 添加MPC 后的MMA 試件不同浸泡時(shí)間下總鏈球菌形成單位計(jì)數(shù)結(jié)果比較Table 5 Total Streptococci CFU counts of different MMA specimens incorporating MPC after different water?aging time ±s

    MPC: 2?methacryloyloxyethyl phosphorylcholine; MMA: methyl methacrylate; * indicates the F or P value of the main effect, and Δ indicates the F or P value of the interactive effect

    Groups Control group 3%MPC group Total Total Streptococci(CFU)F P tP 1 d(2.8±1.8)×108(6.0±1.0)×107(1.7±1.0)×108 3.56 0.04 90 d(6.5±1.9)×108(3.8±2.0)×107(3.4±1.1)×108 6.90 0.01 180 d(6.5±2.0)×108(5.8±2.0)×107(3.6±1.1)×108 6.72 0.01 Total(5.3±1.9)×108(5.2±1.7)×107(3.6±2.9)×108 495.84*<0.001*12.4 0.99 4.13*4.72Δ 0.08 0.50 0.14*0.13Δ

    表6 添加MPC 后的MMA 試件不同浸泡時(shí)間下變形鏈球菌形成單位計(jì)數(shù)結(jié)果比較Table 6 Mutans Streptococci CFU counts of different MMA specimens incorporating MPC after different water?aging time ±s

    表6 添加MPC 后的MMA 試件不同浸泡時(shí)間下變形鏈球菌形成單位計(jì)數(shù)結(jié)果比較Table 6 Mutans Streptococci CFU counts of different MMA specimens incorporating MPC after different water?aging time ±s

    MPC: 2?methacryloyloxyethyl phosphorylcholine; MMA: methyl methacrylate; * indicates the F or P value of the main effect, and Δ indicates the F or P value of the interactive effect

    Groups Control group 3%MPC group Total Mutans Streptococci(CFU)F P tP 1 d(2.0±1.0)×107(5.5±2.4)×106(1.3±0.6)×107 3.26 0.04 90 d(4.5±2)×107(8.5±1.3)×106(2.7±1.1)×107 3.40 0.04 180 d(7±1.4)×107(2.3±1.2)×107(4.7±1.3)×107 6.08 0.01 Total(4.5±1.5)×107(1.2±5.2)×106(2.9±1.0)×107 67.98*<0.001*9.22 3.91 7.14*9.83Δ 0.10 0.20 0.13*0.23Δ

    Figure 1 Representative live/dead staining photos of biofilms adherent on the MMA specimens incorporating MPC圖1 添加MPC 后的MMA 試件菌斑生物膜死/活細(xì)菌染色

    3 討 論

    正畸保持器主要由MMA 構(gòu)成,MMA 具有較強(qiáng)的吸水性[2],而且保持器形貌復(fù)雜,表面和內(nèi)部的多孔性結(jié)構(gòu)更利于細(xì)菌的積聚和定植。長(zhǎng)期暴露于口腔環(huán)境中,塑料基托表面勢(shì)必會(huì)附著大量的菌斑生物膜,其結(jié)構(gòu)和微生物種類類似于牙菌斑[7],不僅影響口腔健康而且會(huì)降低基托材料的強(qiáng)度,縮短使用周期[5]。

    在口腔中,材料暴露于復(fù)雜的環(huán)境,除了內(nèi)源性的蛋白質(zhì)、細(xì)菌等,還有日常飲食攝入的化合物,這些物質(zhì)發(fā)生復(fù)雜的相互作用會(huì)導(dǎo)致材料的物理、化學(xué)和機(jī)械性能發(fā)生變化[8]。水分子是導(dǎo)致基托材料老化的主要因素之一。它可滲透到基托材料中引起聚合鏈斷裂,從而使材料的韌性下降、脆性增加[9]?;胁牧系睦匣粌H與水、溫度、所受載荷等物理化學(xué)因素有關(guān),還與唾液蛋白和細(xì)菌代謝活性等生物因素密切相關(guān)[10]。研究表明,義齒長(zhǎng)期佩戴在口腔中,細(xì)菌可經(jīng)由微孔隙侵入義齒內(nèi)部,通過(guò)酶活性或產(chǎn)生揮發(fā)性代謝產(chǎn)物導(dǎo)致義齒的機(jī)械性能下降[10]。Lohbauer 等[11]發(fā)現(xiàn)20%的義齒基托材料在水老化3 個(gè)月后會(huì)出現(xiàn)彎曲強(qiáng)度及彈性模量的降低。有學(xué)者報(bào)道MPC 可改變基托表面特性,減少水分子的吸附,從而延緩其機(jī)械性能的下降[12]。本研究中,不同時(shí)間以及對(duì)照組與3%MPC 兩組間的交互效應(yīng)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩組試件隨著干預(yù)時(shí)間增加,機(jī)械強(qiáng)度均有下降趨勢(shì)??梢?jiàn)改性材料的強(qiáng)度下降得到了延緩。此外,MPC 的添加不會(huì)影響材料的美觀性能,目前已有學(xué)者將MPC 添加到了牙色樹(shù)脂充填材料和玻璃離子粘接劑中,發(fā)現(xiàn)添加MPC 后樹(shù)脂和粘接劑的美觀性能未受到影響[13]。

    唾液蛋白吸附于牙齒或者基托表面形成的獲得性薄膜為細(xì)菌的黏附聚集以及菌斑的成熟提供了必要條件。如果基托材料自身能夠抑制蛋白質(zhì)的黏附,則材料表面附著的細(xì)菌將大幅度減少,因此可以從源頭抑制菌斑的形成[14]。MPC 是一類常用的抑制蛋白附著的生物復(fù)合體。它同時(shí)帶有正、負(fù)兩種電荷,具有很強(qiáng)的親水性,可與水分子產(chǎn)生堅(jiān)固的水合層,其周緣幾乎無(wú)結(jié)合水[14],不利于蛋白質(zhì)的黏著,因此可抑制細(xì)菌的黏附及菌斑的形成[15]。此外MPC 具有與甲基丙烯酸甲酯聚合的功能性基團(tuán),聚合后可發(fā)揮持久的抑制蛋白黏附的功能并且能一定程度上增強(qiáng)機(jī)械耐受力。通過(guò)MPC 對(duì)丙烯酸義齒基托材料進(jìn)行表面改性,研究其抗蛋白黏附的功能,發(fā)現(xiàn)含有MPC 的義齒基托材料,其表面蛋白附著量下降約70%,而且能發(fā)揮持久的抗蛋白黏附的效能[16]。本研究中,與對(duì)照組相比,添加3% MPC 后的改性MMA 試件表面的蛋白附著量下降約80%、菌斑代謝活性下降約50%、菌落形成單位計(jì)數(shù)下降約70%,不同時(shí)間及兩者間的交互效應(yīng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此可見(jiàn),MPC 可發(fā)揮長(zhǎng)期、穩(wěn)定的抗蛋白黏附及抑制菌斑形成的作用。

    任何一種新型材料在進(jìn)入臨床應(yīng)用之前,必須要進(jìn)行生物相容性的檢測(cè),才能保障臨床應(yīng)用的安全性和可靠性。正畸保持器需要在口內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間佩戴,與患者的牙齦及黏膜等均有密切的接觸,因此對(duì)于改性材料的生物安全性是需要密切關(guān)注的。Tan 等[17]使用MPC 與甲基丙烯酸共聚物對(duì)疏水性丙烯酸人工晶狀體表面進(jìn)行改性的研究中發(fā)現(xiàn),改性材料既不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的細(xì)胞毒性,也不會(huì)導(dǎo)致異常的細(xì)胞增殖。本研究中,處理24、72 h 后對(duì)照組及3%MPC 組的細(xì)胞毒性分級(jí)為1 或0,可見(jiàn)MPC 改性的新型正畸保持器具有良好的細(xì)胞相容性,其應(yīng)用具有可行性。

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