南寧市無償獻(xiàn)血人群HTLV檢測結(jié)果分析*

羅必泰，顏秀娟，姜 瑩，邱昌文，周月蘭

廣西壯族自治區(qū)南寧中心血站，廣西南寧 530007

人類嗜T細(xì)胞病毒(HTLV)分為Ⅰ型和Ⅱ型，能引起惡性淋巴瘤、成人型T細(xì)胞性白血病(ATL)等，其感染分布廣泛，并呈高度的地方性流行。HTLV-Ⅰ感染主要流行于日本南部、加勒比海地區(qū)的某些國家、非洲中部和西部、美洲中部和南部、巴布亞新幾內(nèi)亞和澳大利亞，我國HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體陽性率較低，HTLV感染高發(fā)區(qū)主要集中在福建、廣東沿海一帶[1]。為避免經(jīng)輸血傳播HTLV，部分國家在獻(xiàn)血者篩查項(xiàng)目中已強(qiáng)制規(guī)定了對HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體進(jìn)行的檢測，我國尚未明確將HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體的篩查列為獻(xiàn)血者常規(guī)檢測項(xiàng)目。為進(jìn)一步提高我國血液安全水平，2015年12月開始，國家衛(wèi)生健康委員會辦公廳在部分地區(qū)的血站開展HTLV監(jiān)測工作，以期掌握我國獻(xiàn)血人群中HTLV流行情況，為制訂血液管理相關(guān)政策提供依據(jù)。南寧中心血站作為監(jiān)測點(diǎn)之一，承擔(dān)了6萬余份標(biāo)本的檢測任務(wù)。本實(shí)驗(yàn)室采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)雙抗原夾心法對南寧市無償獻(xiàn)血者進(jìn)行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測，并將初篩陽性標(biāo)本送檢確證，以評估南寧市輸血傳播HTLV的危險(xiǎn)性，并為全國HTLV感染狀況的評估提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2016年5月4日至2018年2月4日本血站61 804份無償獻(xiàn)血者標(biāo)本，年齡18～55歲。獻(xiàn)血者按照《獻(xiàn)血者健康檢查要求》進(jìn)行健康咨詢、體檢，并對獻(xiàn)血者乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)進(jìn)行快速檢測。

1.2試劑和儀器 HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體ELISA試劑盒(北京萬泰生產(chǎn)，批號為T20160101、T20160502、T20160503、T20160804、T20171105)；瑞士Hamilton公司的全自動(dòng)加樣儀(STAR)和全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀(FAME)。

1.3方法

1.3.1HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測 采用ELISA試劑進(jìn)行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測，檢測操作和結(jié)果判斷嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。試驗(yàn)結(jié)果呈反應(yīng)性(S/CO值≥1.0)的標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)檢，復(fù)檢結(jié)果任意1個(gè)孔呈反應(yīng)性則判斷為初篩陽性。

1.3.2初篩陽性血液及標(biāo)本處理 將HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體初篩陽性的血液標(biāo)本離心(3 000 r/min，10 min)，其血漿及白膜層轉(zhuǎn)移至螺口凍存管中，放入-20 ℃以下冰箱保存。將凍存管和對應(yīng)的血袋血漿寄送至國家衛(wèi)生健康委員會臨床檢驗(yàn)中心進(jìn)行免疫印跡試驗(yàn)和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)確證試驗(yàn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Microsoft Excel2010對數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析。

2 結(jié) 果

2.1HTLV檢測結(jié)果 61 804份無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本經(jīng)雙孔復(fù)檢后HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體陽性24份，初篩陽性率為3.88；24份初篩陽性標(biāo)本經(jīng)免疫印跡試驗(yàn)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR確證，4份為HTLV-Ⅰ陽性，3份為不確定，HTLV陽性率為0.65，見表1、2。

表1 4份HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體確證陽性和3份不確定標(biāo)本檢測結(jié)果

2.2其他指標(biāo)檢測情況 24份HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體初篩陽性無償獻(xiàn)血者標(biāo)本采用ELISA檢測HBsAg、丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)、人類免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV)、梅毒特異性抗體，同時(shí)采用速率法檢測ALT，實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測 HBV、HCV、HIV病毒核酸，結(jié)果均合格。

表2 4份HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體確證陽性和3份不確定標(biāo)本其獻(xiàn)血者基本情況

3 討 論

輸血相關(guān)傳染病的預(yù)防和控制已成為全社會關(guān)注的焦點(diǎn)，是輸血安全的研究重點(diǎn)。HTLV可通過血液傳播，是一種反轉(zhuǎn)錄病毒，目前尚未有相關(guān)疫苗及安全有效的治療藥物，行之有效的預(yù)防控制措施是盡早發(fā)現(xiàn)HTLV感染者，并進(jìn)行隔離，阻斷傳播途徑。絕大部分HTLV感染者血清中都含有病毒外膜蛋白gp21、gp46、gp68及核心蛋白p15、p19、p24的抗體，因此，以上感染標(biāo)志物在臨床檢測中具有重要意義[2]。檢測HTLV尚無“金標(biāo)準(zhǔn)”，目前主要有兩種方法，一種是采用ELISA中的雙抗原夾心法或間接法進(jìn)行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體初篩，然后用免疫印跡試驗(yàn)確認(rèn)，此方法操作簡單，適合大規(guī)模的篩查和流行病學(xué)調(diào)查。另一種為實(shí)時(shí)熒光定量PCR，是靈敏度最高的方法，但其操作復(fù)雜，通常作為初篩陽性后的確證。ALLAIN等[3]提出HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測可能比PCR核酸檢測更為有效[3]。

本研究對61 804份無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本進(jìn)行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體篩查，共篩查出24例抗體陽性，初篩陽性率為3.88；其中4例確證陽性，3例結(jié)果不確定，HTLV陽性率為0.65，與國內(nèi)非流行、低流行區(qū)域調(diào)查情況基本一致[1]。除了地域差異外，人群中HTLV陽性率的高低還與篩查方法和確證方法的選擇有關(guān)。以往部分研究由于未對HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體陽性者做免疫印跡試驗(yàn)進(jìn)行確證，因此報(bào)道的陽性率偏高[4]。本研究確證陽性率為16.67%(4/24)，有研究資料顯示，部分國家的確證陽性率僅有2%[5]，漳州報(bào)道的確證陽性率為3.03%[6]，江西為7.5%[7]，遵義為10%[8]，南京為0%[9]，可能由于初篩檢測方法和確證試驗(yàn)不同，確證陽性率差異較大。另外，ELISA試劑中抗原和抗體的純度、待檢因子的靈敏度以及ELISA檢測的操作技術(shù)等都會影響檢測結(jié)果的靈敏度、特異度和重復(fù)性[10]。若研究條件允許，可以用另一廠家試劑對初篩陽性標(biāo)本再次檢測，并對獻(xiàn)血者追蹤調(diào)查，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本研究結(jié)果顯示，免疫印跡試驗(yàn)陽性和陰性結(jié)果與實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果大多一致，但免疫印跡試驗(yàn)不確定的結(jié)果，而實(shí)時(shí)熒光定量PCR顯示結(jié)果為陰性。免疫印跡試驗(yàn)以病毒分解物作為抗原，具有較高的靈敏度，但是也存在著結(jié)果不確定的問題[5]，因此對免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果不確定的標(biāo)本有必要運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行確證[11]。由于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測技術(shù)條件和要求復(fù)雜，目前應(yīng)當(dāng)以免疫印跡試驗(yàn)作為主要確證手段，當(dāng)免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果為不確定時(shí)，再做實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)一步確證。采用免疫印跡試驗(yàn)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行聯(lián)合檢測，HTLV陽性率的調(diào)查結(jié)果相對較為可靠。

本研究結(jié)果顯示，4例HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體確證陽性和3例不確定的獻(xiàn)血者中，有4例為再次獻(xiàn)血者，最多者已進(jìn)行9次無償獻(xiàn)血，HTLV陽性者反復(fù)獻(xiàn)血將會嚴(yán)重影響血液質(zhì)量安全。本研究結(jié)果顯示，南寧市無償獻(xiàn)血者HTLV陽性率為0.65；另有報(bào)道顯示，我國福建寧德地區(qū)HTLV陽性率為0.34%[12]，莆田地區(qū)陽性率為0.101%[13]。相比之下，南寧市無償獻(xiàn)血者HTLV陽性率處于較低水平，但南寧市流動(dòng)人口較多，且隨著各地之間的交流日益頻繁，HTLV感染很可能由高流行區(qū)向低流行區(qū)甚至非流行區(qū)擴(kuò)散[14]，因此，仍需要繼續(xù)監(jiān)測。由于本地區(qū)HTLV陽性率較低，建議采用3種模式對獻(xiàn)血者進(jìn)行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體篩查：第1種為只對未檢測過HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體的獻(xiàn)血者進(jìn)行篩查，抗體篩查陰性的獻(xiàn)血者再次獻(xiàn)血時(shí)不再檢測該項(xiàng)目；第2種為只對高危獻(xiàn)血者進(jìn)行篩查；第3種為采用混合檢測模式[15]。因HTLV只感染淋巴細(xì)胞，在尚未將HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體的篩查列為獻(xiàn)血者常規(guī)檢測項(xiàng)目前，輸注去白細(xì)胞的血液制品或輻照血液制品，可最大限度降低HTLV經(jīng)血傳播風(fēng)險(xiǎn)。