慢性乙肝病毒感染引起的肝硬化患者血清microRNA表達(dá)變化研究△

鄧巧娟 劉 娜 陳 愷

(1.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院感染內(nèi)科 湛江 524001；2.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院老年病科 湛江 524001)

肝硬化是由一系列慢性肝臟疾病引起肝臟損傷并最終發(fā)展形成的。引起肝硬化的原因有很多，其中酗酒、慢性丙肝病毒感染和非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是西方國(guó)家肝硬化發(fā)生的主要原因，而在亞洲地區(qū)，慢性乙肝病毒感染是引起肝硬化的主要原因[1]。在近年的研究中，一些新的標(biāo)記物被發(fā)現(xiàn)并且具有用于肝硬化診斷的前景，其中就包括血清microRNA[2]。但目前關(guān)于microRNA在肝硬化中的變化研究相對(duì)較少，本課題主要擬對(duì)由慢性乙肝病毒感染引起的肝硬化患者進(jìn)行血清microRNA表達(dá)變化檢測(cè)，并對(duì)肝硬化代償期及失代償期病人血清microRNA表達(dá)變化進(jìn)行比較，分析不同microRNA在肝硬化發(fā)生發(fā)展過程中的診斷和預(yù)后價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取我院2017年1月～2018年10月間收治的62例肝硬化合并肺炎患者作為此次研究對(duì)象，其中男49例，女13例；年齡32～75歲，平均(53.51±2.64)歲；按照肝功能 Child-Pugh分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，A級(jí)16例，B級(jí)31例，C級(jí)15例；代償分期：代償期32例，失代償期30例。另選取同期來我院體檢健康者30例設(shè)為對(duì)照組，其中男18例，女12例；年齡25～59歲，平均(42.11±6.82)歲。收集兩組患者的臨床資料，所得數(shù)據(jù)對(duì)比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，存在可比性。

入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)肝硬化患者診斷符合2000年西安全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂標(biāo)準(zhǔn)[3]，均通過B超，實(shí)驗(yàn)室檢查臨床診斷為慢性乙肝病毒引起肝硬化的患者；(2)神志清楚，自愿參與本研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)肝癌，其他病毒性肝炎，遺傳性肝病，血吸蟲肝病等疾?。?2)存在肝硬化之外可能會(huì)對(duì)血清microRNA表達(dá)產(chǎn)生影響的疾??；(3)臨床資料不全。

1.2 方法

(1)樣品采集：在患者進(jìn)行治療前抽取患者靜脈血，離心提取血清，凍-80℃?zhèn)溆?，同時(shí)對(duì)對(duì)照組部分健康人作為對(duì)照。采用TRIzol試劑對(duì)血清總的RNA進(jìn)行提取，并采用Nanodrop 2000測(cè)定RNA濃度和純度，采用瓊脂糖凝膠電泳分析RNA質(zhì)量。

(2)二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)microRNA表達(dá)變化：將Adaptor mix(New England biolabs)與小分子RNA(<50nt)進(jìn)行雜交和連接，然后采用ILLumina HiSeq2000 platform進(jìn)行小分子RNA反轉(zhuǎn)錄以及測(cè)序分析。測(cè)序結(jié)果與參考的microRNA庫Bowtie v0.12.7進(jìn)行比對(duì)，分析不同microRNA表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比兩組血清microRNA表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

肝硬化代償組與失代償組患者microRNA低于對(duì)照組，其中肝硬化代償組低于失代償組，microRNA表達(dá)高于失代償組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 各組病毒載量、甲胎蛋白以及microRNA表達(dá)水平對(duì)比

組別microRNA(ng/L)肝硬化代償期組(n=32)47.31±19.38肝硬化失代償期組(n=30)6.42±1.84對(duì)照組(n=30)77.56±32.36F80.85P<0.05

3 討論

本研究通過調(diào)查慢性乙肝病毒感染引起的肝硬化患者血清microRNA表達(dá)變化及臨床意義發(fā)現(xiàn)：肝硬化代償組與失代償組患者病毒載量、甲胎蛋白以及microRNA均低于對(duì)照組，其中肝硬化代償組病毒載量、甲胎蛋白低于失代償組，microRNA表達(dá)高于失代償組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；肝硬化代償組與失代償組患者microRNA高表達(dá)人數(shù)明顯低于對(duì)照組，但其中肝硬化代償組microRNA高表達(dá)人數(shù)高于失代償組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。考慮當(dāng)在肝硬化發(fā)生發(fā)展的過程中，肝細(xì)胞的壞死或凋亡，炎癥均會(huì)導(dǎo)致microRNA被釋放到血液循環(huán)中，從而導(dǎo)致血清microRNA含量的改變，而失代償期患者的microRNA含量更低，說明其與肝硬化程度以及壞死性炎癥程度成負(fù)相關(guān)[4～5]。

綜上所述，microRNA作為一類新的生物學(xué)指標(biāo)，具有良好的穩(wěn)定性、可重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)，在肝硬化過程中具有重要作用。