• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    荔枝泛素結(jié)合酶基因(LcUBC12)的生物信息學及表達特性分析

    2020-07-07 11:47:14董晨魏永贊王弋鄭雪文李偉才石勝友
    南方農(nóng)業(yè)學報 2020年5期
    關(guān)鍵詞:烯效唑妃子笑花穗

    董晨 魏永贊 王弋 鄭雪文 李偉才 石勝友

    摘要:【目的】分析荔枝泛素結(jié)合酶(E2)基因(LcUBC12)的生物學信息,并檢測其組織表達特異性及烯效唑處理下花穗不同發(fā)育階段中的表達情況,為研究E2響應烯效唑的作用機制及泛素化修飾在調(diào)控荔枝花穗發(fā)育中的功能提供理論依據(jù)?!痉椒ā恳詮腻有笾ㄋ朕D(zhuǎn)錄組(RNA-seq)數(shù)據(jù)中篩選出的LcUBC12基因為參考序列,利用本地BLAST從荔枝基因組中查找出該基因cDNA全長(Litchi_GLEAN_10004716),并利用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測LcUBC12基因在妃子笑荔枝不同組織及烯效唑處理下花穗不同發(fā)育階段的表達情況?!窘Y(jié)果】LcUBC12基因cDNA全長519 bp,編碼172個氨基酸,其編碼的蛋白分子量19.68 kD,等電點6.52,不穩(wěn)定指數(shù)35.70,親水性的平均值? -0.734,為親水穩(wěn)定蛋白,定位于細胞核,不存在信號肽和跨膜結(jié)構(gòu),包含典型的UBC12保守結(jié)構(gòu)域,屬于Class I家族E2蛋白,二級結(jié)構(gòu)以無規(guī)則卷曲為主。LcUBC12蛋白與向日葵(XP_022009656.1)、柑橘(XP_006466720.1)、草莓(XP_004300599.1)和蘿卜(XP_018466680.1)等UBC12蛋白的氨基酸序列同源性較高,分別為70.11%、68.16%、67.76%和67.03%。LcUBC12蛋白與蕓香科的柑橘UBC12親緣關(guān)系最近,其次是與同屬菊科的向日葵和萵苣UBC12蛋白親緣關(guān)系較近。LcUBC12基因在不同組織中表達量排序為雌花>雄花>種子>果皮>葉>莖>根>果肉。烯效唑處理0~21 d LcUBC12基因在花穗中的表達量與對照無明顯差異,烯效唑處理28 d其表達量明顯低于對照,但烯效唑處理35 d其表達量上調(diào),且較對照高。【結(jié)論】LcUBC12基因具有組織表達特異性,在妃子笑荔枝雌花、雄花和種子中高效表達,推測其主要在花穗發(fā)育和生殖生長過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用,但烯效唑處理后LcUBC12基因?qū)ㄋ氚l(fā)育發(fā)揮負調(diào)控作用。

    關(guān)鍵詞: 荔枝;妃子笑;泛素結(jié)合酶;基因;實時熒光定量PCR;生物信息學;花穗發(fā)育;組織表達

    中圖分類號: S667.103.6? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼: A 文章編號:2095-1191(2020)05-1091-07

    Abstract:【Objective】Biological information of ubiquitin-conjugating enzyme(E2) gene(LcUBC12) in litchi was ana-lyzed, and the expression pattern specificity and the expression of LcUBC12 were studied in different stages of litchi inflorescences under uniconazole treatment. The results could provided a theoretical basis for studying the mechanism of E2 response to uniconazole and the function of ubiquitination modification in regulating the development of Feizixiao litchi inflorescences. 【Method】With LcUBC12 gene screened from the transcriptome data of the Feizixiao litchi inflorescences(RNA-seq) as reference sequence, the full-length cDNA of LcUBC12 was obtained by local BLAST to find the litchi genome(Litchi_GLEAN_10004716). Real-time fluorescence quantitative PCR(qRT-PCR) was used to analyze the expression of Feizixiao litchi LcUBC12 in different tissues and at different developmental stages of inflorescence which were treated by uniconazole. 【Result】The cDNA of LcUBC12 gene was 519 bp in length,encoding 172 amino acids with a molecular weight of 19.68 kD and an isoelectric point of 6.52, and the instability index was 35.70, the average hydrophilic value was -0.734, which was a hydrophilic stable protein. The predicted subcellular localization was in the nucleus. There was no signal peptide and transmembrane. The structure contained a typical conserved UBC domain. It belonged to Class? I family E2 protein, the secondary structure of the protein was mainly random coiling. NCBI blast analysis indicated the homology of UBC12 protein amino acid sequence of LcUBC12 amino acid sequence with sunflower(XP_022009656.1),citrus(XP_006466720.1), strawberry(XP_004300599.1) and radish(XP_018466680.1) were high, which were 70.11%,68.16%,67.76% and 67.03%,respectively.? Phylogenetic analysis indicated that LcUBC12 protein was the closest to citrus UBC12 of Rutaceae and also had close relationship with sunflowers and lettuce of the Compositae. qRT-PCR analysis indicated the expression of LcUBC12 gene in different tissues was female flower>male flower>seed>peel>leaf>stem>root>pulp. The expression treated by uniconazole at 28 d was lower than that in control, however the expression at 35 d up-regu-lated in treatment and was higher than that in control. 【Conclusion】The LcUBC12 gene has tissue expression specificity and is abundantly expressed in Feizixiao litchi female flowers, male flowers and seeds. It is speculated that it mainly plays an important role in the inflorescences development and reproductive growth of litchi, but LcUBC12 gene plays a negative regulatory role in inflorescences development after uniconazole treatment.

    Key words: litchi; Feizixiao; ubiquitin-conjugating enzyme; gene; real-time fluorescence quantitative PCR; bioinformatics; inflorescences development; tissue expression

    Foundation item: Basic Scientific Research Project of Central Public Welfare Research Institutes(1630062016006);National Litchi and Longan Industrial Technology System Project(CARS-33-21)

    0 引言

    【研究意義】泛素化蛋白酶體途徑是一種真核生物蛋白質(zhì)翻譯后的修飾途徑。在該途徑中,泛素主要通過泛素蛋白酶與靶蛋白結(jié)合形成一條多泛素鏈,將底物蛋白泛素化,使靶蛋白被26S蛋白酶所識別并降解(Ciechanover et al.,2000;Pickart,2001)。在泛素化過程中,泛素與靶蛋白的結(jié)合需要3種酶參與,分別為泛素激活酶(Ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素結(jié)合酶(Ubiquitin-conjugating enzyme,E2)和泛素蛋白連接酶(Ubiquitin ligase,E3)。泛素化過程涉及三步酶促級聯(lián)反應:首先E1激活泛素分子,然后被激活的泛素分子連接到E2上,E3結(jié)合目標蛋白并促進E2將激活的泛素分子轉(zhuǎn)移到目標蛋白上,最終實現(xiàn)目標蛋白的泛素化(Kerscher et al.,2006)??梢姡珽2作為植物蛋白泛素化降解途徑中的關(guān)鍵酶,包含典型的UBC保守結(jié)構(gòu)域,長約140~200個氨基酸,在植物生長發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用(Cui et al.,2012)。因此,本研究通過克隆荔枝發(fā)育花和果實中的E2基因,研究其編碼蛋白生物學信息及表達特性,對其在荔枝坐果中的生物學功能研究具有重要意義?!厩叭搜芯窟M展】目前,E2基因的研究主要集中在對DNA的修復進程和抗逆響應(王金利等,2010),在調(diào)控花和果實發(fā)育方面研究較少(Wang et al.,2014)。Picton等(1993)首次從番茄中克隆到E2基因,研究發(fā)現(xiàn)其在番茄葉片衰老和果實成熟過程中表達。王園等(2010)從香蕉采后早期抑制差減文庫中篩選得到E2基因(MaUCE1),研究發(fā)現(xiàn)MaUCE1基因可調(diào)控香蕉果實成熟過程中淀粉酶活性或含量,在香蕉果實成熟的分解代謝中發(fā)揮作用。Li等(2013)通過研究荔枝早期果實發(fā)育遮陰處理差異基因表達發(fā)現(xiàn),遮蔭處理下UBCE2基因表達量上調(diào),高于對照的表達量,推測遮陰處理對UBCE2基因表達發(fā)揮正向誘導作用。Wang等(2014)研究發(fā)現(xiàn),番茄中2個E2基因(SlUBC32和SlUBC41)參與調(diào)控番茄果實成熟,但具體分子調(diào)控機制尚不清楚。Dong等(2016)通過研究香蕉花后果實不同發(fā)育階段E2基因家族的表達情況發(fā)現(xiàn),E2基因家族不同成員在果實發(fā)育不同階段行使功能,推測這些基因在果實發(fā)育過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。陳曙等(2018)通過研究低磷處理下玉米幼苗不同組織中E2基因的表達情況發(fā)現(xiàn),ZmUBC17基因具有組織表達特異性,在葉片中大量表達,推測ZmUBC17基因是通過調(diào)控玉米對磷元素吸收和轉(zhuǎn)運間接影響光合作用效率。Nurdiani等(2018)研究發(fā)現(xiàn),水稻OsSCE1基因(LOC_ Os10g39120)在日本晴中過表達從而降低了植株對干旱脅迫的耐受性,而敲除OsSCE1基因后其耐旱性略升高,表明該基因可能在水稻干旱脅迫中起到負調(diào)節(jié)作用?!颈狙芯壳腥朦c】目前鮮見有關(guān)妃子笑荔枝花穗發(fā)育過程中E2基因(LcUBC12)表達的相關(guān)研究報道?!緮M解決的關(guān)鍵問題】基于本課題組前期烯效唑處理的荔枝花穗發(fā)育轉(zhuǎn)錄組(RNA-seq)數(shù)據(jù),從中篩選出LcUBC12基因,利用本地BLAST從荔枝基因組中查找出該基因cDNA全長,并利用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測LcUBC12在妃子笑荔枝不同組織及烯效唑處理下花穗不同發(fā)育階段的表達情況,分析該基因在調(diào)控妃子笑荔枝花穗發(fā)育中的作用,為研究E2響應烯效唑的作用機制及泛素化修飾在調(diào)控妃子笑荔枝花穗發(fā)育中的功能提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1. 1 試驗材料

    試驗材料為妃子笑荔枝,種植于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院南亞熱帶作物研究所荔枝栽培示范園。主要試劑:植物總RNA提取試劑盒(北京華越洋生物科技有限公司)、cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Thermal Fisher Scientific公司)和SYBR Premix Ex TaqTM熒光定量PCR試劑盒[寶生物工程(大連)有限公司]。主要儀器設(shè)備:實時熒光定量PCR儀(羅氏LightCycler,北京龍躍生物科技發(fā)展有限公司)。

    1. 2 樣品采集及處理

    采集妃子笑荔枝的根、莖、葉、雌花、雄花、果肉、果皮和種子等組織。此外,隨機選擇樹齡相同、長勢相近的妃子笑果樹6株,當花穗抽生至約18 cm時,對整個樹冠噴施50 mg/L烯效唑(有效成分含量5%),噴至葉面滴水,對照不作任何處理。完全隨機區(qū)組排列,單株小區(qū),3次重復。追蹤花穗和果實發(fā)育動態(tài),分別在0、7、14、28、35和42 d取花穗樣品,用液氮速凍后于-80 ℃保存,用于后續(xù)RNA提取。

    1. 3 生物信息學分析

    基于妃子笑花穗RNA-seq數(shù)據(jù)(GenBank登錄號SRP092890)(Wei et al.,2017),篩選獲取荔枝LcUBC12基因轉(zhuǎn)錄本,利用本地BLAST查找荔枝基因組中該基因的cDNA序列全長,對其編碼蛋白(LcUBC12)進行生物信息學分析:利用ExPASy ProtParam和ProtScale預測其基本理化性質(zhì)、Plant-mPLoc進行亞細胞定位、SMART預測保守結(jié)構(gòu)域、SOPMA預測二級結(jié)構(gòu)、SignalP 4.1 Server預測信號肽、ExPASy TMPred預測跨膜結(jié)構(gòu)及NetPhos分析磷酸化位點。此外,利用NCBI數(shù)據(jù)庫中的BLAST將LcUBC12蛋白氨基酸序列與其他物種的E2蛋白進行同源性比對。利用Clustalx 1.83進行多重序列比對。采用MEGA 6.0的鄰接法(Neighbor-Joining)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進化樹(1000次重復,其他參數(shù)均為默認)。

    1. 4 qRT-PCR檢測

    參照植物總RNA提取試劑盒說明提取樣品的總RNA,用RNase-free DNase消化去除DNA污染,利用核酸蛋白檢測儀檢測RNA質(zhì)量和濃度。利用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈。利用Pri-mer3plus設(shè)計LcUBC12基因的qRT-PCR引物(F:5'-AGCCGGGGAATTACGTCTTA-3';R:5'-ACCGT TGTCTTGCACTTAACC-3')和內(nèi)參基因(GenBank登錄號HQ615689)引物(F:5'-GTGGTTCTACTATG TTCCCTG-3';R:5'-CTCGTCGTACTCATCCTTTG-3'),委托廣州艾基生物技術(shù)有限公司合成。qRT-PCR反應體系20.0 μL:cDNA 1.0 μL(相當于25 ng總RNA),10 μmol/L上、下游引物各2.0 μL,2×SYBR Premix Ex TaqTM 10.0 μL,ddH2O(無RNA酶)補足至20.0 μL。擴增程序:94 ℃預變性2 min;94 ℃ 15 s,58 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,共進行40個循環(huán)。每個樣品設(shè)3次重復。采用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量,以根和處理0 d花穗為對照。

    1. 5 統(tǒng)計分析

    利用Excel 2016進行數(shù)據(jù)處理,SigmaPlot作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2. 1 LcUBC12蛋白基本理化性質(zhì)分析及亞細胞定位結(jié)果

    從烯效唑處理的妃子笑花穗RNA-seq數(shù)據(jù)中篩選獲取荔枝LcUBC12基因轉(zhuǎn)錄本(Unigene 0021028),通過本地BLAST從荔枝基因組中獲得該基因cDNA的核苷酸序列全長,該基因編號為Litchi_GLEAN_10004716,將其命名為LcUBC12。該基因在基因組中編碼區(qū)序列(CDS)全長為519 bp,編碼172個氨基酸,其編碼蛋白的分子量19.68 kD,分子式C879H1363N237O260S8,等電點6.52,不穩(wěn)定指數(shù)35.70,為穩(wěn)定蛋白,脂肪指數(shù)70.23,親水性的平均值為-0.734,存在明顯的疏水區(qū)和親水區(qū),疏水氨基酸的最大值(1.311)小于親水性氨基酸的最大值(-2.944),且親水性氨基酸總數(shù)為127個,比疏水性氨基酸總數(shù)(36個)多,為親水蛋白(圖1)。LcUBC12蛋白亞細胞定位于細胞核。

    2. 2 LcUBC12蛋白跨膜結(jié)構(gòu)及信號肽預測

    利用TMPred對LcUBC12蛋白進行跨膜結(jié)構(gòu)預測分析,結(jié)果(圖2)表明,LcUBC12蛋白不存在跨膜區(qū)。利用SignalP 4.1 Server的euk network算法對LcUBC12蛋白N端30個氨基酸進行信號肽預測,結(jié)果以氨基酸殘基C/S/Y值表示,當C/S/Y平均分值>0.5時被認為存在信號肽,結(jié)果如圖3所示。C/S/Y平均分值<0.5,推測LcUBC12蛋白不含有信號肽,可能在細胞質(zhì)中合成,無蛋白轉(zhuǎn)運功能,為非分泌型蛋白。

    2. 3 LcUBC12蛋白結(jié)構(gòu)域及磷酸化位點分析結(jié)果

    如圖4所示,LcUBC12蛋白包含典型的泛素結(jié)合酶UBC保守結(jié)構(gòu)域(32~158 aa),并含有半胱氨酸活性位點,屬于Class I家族E2蛋白。利用NetPhos 3.1 Server預測分析LcUBC12蛋白的磷酸化位點,結(jié)果(圖5)顯示,該蛋白可能存在的磷酸化位點中有5個絲氨酸(Ser)、4個蘇氨酸(Thr)和3個酪氨酸(Tyr)。

    2. 4 LcUBC12的蛋白二級結(jié)構(gòu)預測結(jié)果

    如圖6所示,LcUBC12蛋白的二級結(jié)構(gòu)主要包含α-螺旋(26.74%)、延伸鏈(18.60%)、β-折疊(6.98%)和無規(guī)則卷曲(47.67%)4種形式。其中無規(guī)則卷曲、α-螺旋和延伸鏈貫穿于整個氨基酸鏈,而β-折疊散布于無規(guī)則卷曲和α-螺旋附近。

    2. 5 LcUBC12蛋白同源性比對和進化分析

    將LcUBC12蛋白與其他13個物種UBC12蛋白進行氨基酸序列多重比對,結(jié)果如圖7所示。LcUBC12蛋白與向日葵(Helianthus annuus,XP_022009656.1)、柑橘(Citrus sinensis,XP_006466720.1)、草莓(Fra-garia vesca subsp. vesca,XP_004300599.1)、蘿卜(Raphanus sativus,XP_018466680.1)、甘藍型油菜(Brassica napus,XP_013723962.1)、醉蝶花(Tarenaya hassleriana,XP_010531183.1)、芥菜(Brassica juncea,ACI16426.1)、萵苣(Lactuca sativa,XP_02375 9845.1)、蕪菁(Brassica rapa,XP_009109342.1)、月季(Rosa chinensis,XP_024180934.1)、黃瓜(Cucumis melo,XP_008447054.1)、蓖麻(Ricinus communis,XP_002525098.1)和菠菜(Spinacia oleracea,XP_ 021861377.1)的UBC12蛋白氨基酸序列的同源性分別為70.11%、68.16%、67.76%、67.03%、66.49%、65.59%、66.49%、66.67%、66.95%、66.12%、65.03%、65.57%和65.22%。LcUBC12與其他物種UBC12蛋白有高度保守的UBC結(jié)構(gòu)域和相同的半胱氨酸活性位點。

    荔枝為無患子科植物,但目前無患子科物種的UBC尚未見發(fā)表,因此只能與其他科UBC蛋白相比。利用MEGA 6.0構(gòu)建上述物種UBC12蛋白的系統(tǒng)發(fā)育進化樹,結(jié)果如圖8所示。LcUBC12與蕓香科的柑橘UBC12親緣關(guān)系最近,其次是與菊科的向日葵和萵苣UBC12蛋白親緣關(guān)系較近。同屬于十字花科的蘿卜、蕪菁、甘藍型油菜和芥菜UBC12蛋白也聚在同一分支上,再與隸屬于十字花目的醉蝶花聚在一起,表明其親緣關(guān)系較近;同屬薔薇科的草莓和月季UBC12蛋白也聚在同一分支上??梢?,同科植物的UBC12蛋白親緣關(guān)系較近。

    2. 6 LcUBC12基因表達分析結(jié)果

    qRT-PCR檢測LcUBC12基因在不同組織中的時空表達模式及烯效唑處理下在花穗的表達情況。由圖9可知,LcUBC12基因在不同組織中表達量排序為雌花>雄花>種子>果皮>葉>莖>根>果肉,尤其在雌花、雄花和種子的表達量明顯高于其他組織,推測LcUBC12基因主要在花穗發(fā)育和生殖生長中發(fā)揮重要調(diào)控作用。由圖10可知,烯效唑處理0~21 d LcUBC12基因在花穗中的表達量與對照無明顯差異,烯效唑處理28 d其表達量明顯低于對照,但烯效唑處理35 d其表達量上調(diào),且較對照高,推測LcUBC12分別在對照和烯效唑處理的花穗發(fā)育過程中發(fā)揮不同的調(diào)控功能。

    3 討論

    不同物種中含有不同數(shù)量的E2基因家族成員。目前,已從擬南芥(Kraft et al.,2005)、酵母(Michelle et al.,2009)、番茄(Wang et al.,2014)、玉米(Jue et al.,2015)、水稻(Zhiguo et al.,2015)和香蕉(Dong et al.,2016)中分別鑒定出14、50、39、75、52和72個E2基因家族成員。本研究通過分析荔枝品種妃子笑的花穗RNA-seq數(shù)據(jù),共篩選到33個E2基因,其中LcUBC12基因在轉(zhuǎn)錄組中RPKM(Reads Per Kilobase per Million mapped reads,每百萬reads中來自于某基因每千堿基長度的reads數(shù))值較高,通過LcUBC12基因生物信息學分析發(fā)現(xiàn),LcUBC12蛋白包含典型的泛素結(jié)合酶UBC保守結(jié)構(gòu)域(32~158 aa),并含有半胱氨酸活性位點,屬于Class I家族E2蛋白,亞細胞定位于細胞核。此外,不同物種E2基因序列高度保守,由于無患子科其他物種UBC蛋白尚未見發(fā)表,本研究將LcUBC12蛋白與其他科UBC12蛋白進行進化分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),LcUBC12蛋白與柑橘UBC12蛋白(XP_006466720.1)親緣關(guān)系最近。E2作為植物蛋白泛素化降解途徑中的關(guān)鍵酶在植物生長發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用,通過分析該基因的時空表達模式,有助于了解E2基因在生物體中潛在的功能。前人研究證實,在植物不同組織中E2基因均有表達,但不同組織間的表達量存在差異,例如石斛DoUBC24基因在不同組織中的表達量排序為花>莖>種子>根>葉(安紅強等,2016);巴西橡膠樹中HbUBC5基因在花中的表達量僅次于樹皮(朱家紅等,2014),香蕉中MaUCE1基因在花和果實中的表達量均較高(王園等,2010)。本研究結(jié)果與上述前人研究結(jié)果相似。LcUBC12基因在不同組織中均有表達,但表達量存在差異,具有組織特異性,其中在雌花、雄花、種子等生殖器官中的表達量較高,推測LcUBC12基因在妃子笑荔枝花穗發(fā)育和生殖生長過程中發(fā)揮重要作用,尤其是在花和種子的發(fā)育過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在烯效唑處理花穗0~21 d,LcUBC12基因表達量與對照無明顯差異,在35 d時其表達量達到高峰,而對照在28 d時表達量達到峰值,可見,烯效唑處理LcUBC12基因出現(xiàn)表達峰較對照晚7 d,表明烯效唑作為生長延緩劑,可導致LcUBC12基因表達峰延遲,且烯效唑處理35 d時的表達量遠低于對照28 d的表達量,推測烯效唑處理后LcUBC12基因?qū)ㄋ氚l(fā)育發(fā)揮負調(diào)控作用。當無烯效唑處理(對照)時,LcUBC12基因在花穗發(fā)育28 d時表達量最高,42 d時表達量最低,推測LcUBC12基因在花穗發(fā)育的28 d時高效表達,發(fā)揮正向調(diào)控作用,今后可通過轉(zhuǎn)基因驗證LcUBC12基因在花穗發(fā)育中的功能。

    4 結(jié)論

    LcUBC12基因具有組織表達特異性,在妃子笑荔枝雌花、雄花和種子中高效表達,推測其主要在花穗發(fā)育和生殖生長過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用,但烯效唑處理后LcUBC12基因?qū)ㄋ氚l(fā)育發(fā)揮負調(diào)控作用。

    參考文獻:

    安紅強,范靜,梁易,裴薇,王萬軍. 2016. 鐵皮石斛泛素結(jié)合酶基因DoUBC24的克隆及表達分析[J]. 生物技術(shù)通訊,27(5):643-648. [An H Q,F(xiàn)an J,Liang Y,Pei W,Wang W J. 2016. Cloning and expression analysis of ubiquitin-conjugating enzyme 24 in Dendrobium officinale Kimu-raet Migo[J]. Letters in Biotechnology,27(5):643-648.]

    陳曙,趙秋芳,陳宏良,賈利強. 2018. 玉米泛素結(jié)合酶基因家族的生物信息學及表達分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學報,49(8):1476-1483. [Chen S,Zhao Q F,Chen H L,Jia L Q. 2018. Bioinformatics and expression analysis of ubiquitin conjugating enzyme gene family in maize[J]. Journal of Southern Agriculture,49(8):1476-1483.]

    王金利,史勝青,賈利強,江澤平. 2010. 植物泛素結(jié)合酶E2功能研究進展[J]. 生物技術(shù)通報,(4):7-10. [Wang J L,Shi S Q,Jia L Q,Jiang Z P. 2010. Progress on functions of ubiquitin-conjugating enzyme(E2) in plants[J]. Biotechnology Bulletin,(4):7-10.]

    王園,王甲水,謝學立,雷曉明,金志強. 2010. 香蕉泛素結(jié)合酶基因與果實成熟關(guān)系的研究[J]. 園藝學報,37(5):705-712. [Wang Y,Wang J S,Xie X L,Lei X M,Jin Z Q. 2010. Studies of the relationship between MaUCE1 and banana fruit ripening[J]. Acta Horticulturae Sinica,37(5):705-712.]

    朱家紅,徐靖,暢文軍,張治禮. 2014. 巴西橡膠樹泛素結(jié)合酶基因HbUBC5的克隆和表達分析[J]. 熱帶作物學報,35(9):1710-1714. [Zhu J H,Xu J,Chang W J,Zhang Z L. 2014. Cloning and expression analysis of ubiquitin conjugating enzyme gene HbUBC5 from Hevea brasiliensis[J]. Chinese Journal of Tropical Crops,35(9):1710-1714.]

    Ciechanover A,Orian A,Schwartz A L. 2000. Ubiquitin-media-ted proteolysis:Biological regulation via destruction[J]. Bioessays,22(5):442-451.

    Cui F,Liu L J,Zhao Q Z,Zhang Z H,Li Q L,Lin B Y,Wu Y R,Tang S Y,Xie Q. 2012. Arabidopsis ubiquitin conjugase UBC32 is an ERAD component that functions in brassinosteroid-mediated salt stress tolerance[J]. The Plant Cell,24(1):233-244.

    Dong C,Hu H G,Jue D W,Zhao Q F,Chen H L,Xie J H,Jia L Q. 2016. The banana E2 gene family:Genomic identification,characterization,expression profiling analysis[J]. Plant Science,245:11-24.

    Jue D W,Sang X L,Lu S Q,Dong C,Zhao Q F,Chen H L,Jia L Q. 2015. Genome-wide identification,phylogenetic and expression analyses of the ubiquitin-conjugating enzy-me gene family in maize[J]. PLoS One,10(11):e0143488.

    Kerscher O,F(xiàn)elberbaum R,Hochstrasser M. 2006. Modification of proteins by ubiquitin and ubiquitin-like proteins[J]. Annual Review of Cell and Developmental Biology,22:159-180.

    Kraft E,Stone S. L,Ma L,Su N,Gao Y,Lau O S,Deng X W,Callis J. 2005. Genome analysis and functional chara-cterization of the E2 and RING-type E3 ligase ubiquitination enzymes of Arabidopsis[J]. Plant Physiology,139(4):1597-1611.

    Li C Q,Wang Y,Huang X M,Li J,Wang H C,Li J G. 2013. De novo assembly and characterization of fruit transcriptome in Litchi chinensis Sonn and analysis of differentially regulated genes in fruit in response to shading[J]. BMC Genomics,14(1):552.

    Michelle C,Vourch P,Mignon L,Andres C R. 2009. What was the set of ubiquitin and ubiquitin-like conjugating enzymes in the eukaryote common ancestor?[J]. Journal of Molecular Evolution,68(6):616-628.

    Nurdiani D,Widyajayantie D,Nugroho S. 2018. OsSCE1 encoding SUMO E2-conjugating enzyme involves in drought stress response of Oryza sativa[J]. Rice Science,25(2):73-81.

    Pickart C M. 2001. Mechanisms underlying ubiquitination[J]. Annual Review of Biochemistry,70(1):503-533.

    Picton S,Gray J E,Lowe A,Barton S L,Grierson D. 1993. Sequence of a cloned tomato ubiquitin conjugating enzyme[J]. Plant Physiology,103(4):1471.

    Wang Y Y,Wang W H,Cai J H,Zhang Y R,Qin G Z,Tian S P. 2014. Tomato nuclear proteome reveals the involvement of specific E2 ubiquitin-conjugating enzymes in fruit ripening[J]. Genome Biology,15(12):548.

    Wei Y Z,Dong C,Zhang H N,Zheng X W,Shu B,Shi S Y,Li W C. 2017. Transcriptional changes in litchi(Litchi chinensis Sonn.) inflorescences treated with uniconazole[J]. PLoS One,12(4):e176053.

    Zhiguo E,Zhang Y P,Li T T,Wang L,Zhao H M. 2015. Characterization of the ubiquitin-conjugating enzyme gene family in rice and evaluation of expression profiles under abiotic stresses and hormone treatments[J]. PLoS One,10(4):e0122621.

    (責任編輯 陳 燕)

    猜你喜歡
    烯效唑妃子笑花穗
    烽火臺
    當代作家(2023年12期)2023-03-21 03:58:30
    育苗基質(zhì)添加烯效唑、多效唑?qū)S瓜嫁接苗生長的影響
    陰雨寡照天氣枇杷花穗腐爛病的發(fā)生特點與防治技術(shù)探討
    烯效唑?qū)κ秤孟蛉湛a(chǎn)量和品質(zhì)的調(diào)控效應
    天賜珍果
    ——妃子笑
    寶藏(2021年10期)2021-11-22 06:00:14
    烯效唑?qū)鞝柪障憷嬷θ~生長及果實品質(zhì)的影響
    不同負載量及花穗整形斱式對‘戶太八號’葡萄果實品質(zhì)的影響
    中國果樹(2020年2期)2020-07-25 02:14:28
    疏剪花穗對石硤龍眼開花座果的影響
    編輯部故事之辦公用品
    芒果防治炭疽病正當時
    成人国产一区最新在线观看| 国产精品1区2区在线观看. | 国产成人精品久久二区二区免费| 蜜桃国产av成人99| 国产精品香港三级国产av潘金莲| cao死你这个sao货| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产1区2区3区精品| 亚洲专区国产一区二区| 在线观看一区二区三区激情| 99国产综合亚洲精品| 最近最新免费中文字幕在线| 久久ye,这里只有精品| 岛国在线观看网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 欧美一级毛片孕妇| 亚洲av片天天在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| av欧美777| 极品教师在线免费播放| 极品人妻少妇av视频| 欧美精品av麻豆av| 又紧又爽又黄一区二区| 国产一卡二卡三卡精品| 久久性视频一级片| 免费在线观看日本一区| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 深夜精品福利| 69精品国产乱码久久久| 国产1区2区3区精品| 国产高清视频在线播放一区| 美女高潮到喷水免费观看| 后天国语完整版免费观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成年版毛片免费区| 国产日韩欧美在线精品| 满18在线观看网站| 少妇的丰满在线观看| 99九九在线精品视频| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 99精国产麻豆久久婷婷| 一区在线观看完整版| 久久人妻av系列| 一二三四在线观看免费中文在| 久久狼人影院| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 一级毛片电影观看| 999久久久精品免费观看国产| 欧美激情 高清一区二区三区| 中国美女看黄片| 免费av中文字幕在线| 欧美日韩精品网址| 免费在线观看完整版高清| 欧美日韩成人在线一区二区| 脱女人内裤的视频| videos熟女内射| 天天添夜夜摸| 亚洲国产欧美在线一区| 九色亚洲精品在线播放| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产色视频综合| 久久影院123| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 视频区图区小说| 久久 成人 亚洲| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美激情高清一区二区三区| 2018国产大陆天天弄谢| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久天堂一区二区三区四区| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产成+人综合+亚洲专区| 新久久久久国产一级毛片| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产男女内射视频| 麻豆乱淫一区二区| 大香蕉久久网| 亚洲免费av在线视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 人妻 亚洲 视频| 最新的欧美精品一区二区| 在线播放国产精品三级| 动漫黄色视频在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲中文日韩欧美视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久久久国产精品麻豆| 99久久精品国产亚洲精品| 午夜免费鲁丝| 新久久久久国产一级毛片| 黄频高清免费视频| 一级毛片电影观看| 自线自在国产av| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲国产av新网站| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲美女黄片视频| 精品福利永久在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 韩国精品一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| av天堂久久9| 国产精品免费视频内射| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 一本大道久久a久久精品| 日韩成人在线观看一区二区三区| a级毛片在线看网站| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 大型av网站在线播放| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲精品在线美女| 天天添夜夜摸| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产成人免费无遮挡视频| www.自偷自拍.com| 久久免费观看电影| 怎么达到女性高潮| 老熟女久久久| a级毛片在线看网站| 国产在线精品亚洲第一网站| 色在线成人网| 最新的欧美精品一区二区| av国产精品久久久久影院| 中文字幕制服av| 女人久久www免费人成看片| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲专区字幕在线| 久久久欧美国产精品| 国产精品成人在线| 国产1区2区3区精品| 国产一区有黄有色的免费视频| 夜夜爽天天搞| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 男人舔女人的私密视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲美女黄片视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 一本综合久久免费| h视频一区二区三区| 超色免费av| 国产99久久九九免费精品| 五月天丁香电影| 他把我摸到了高潮在线观看 | 午夜免费成人在线视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲欧美一区二区三区久久| 人妻 亚洲 视频| 69精品国产乱码久久久| av电影中文网址| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产99久久九九免费精品| 新久久久久国产一级毛片| 久久久久久久精品吃奶| 久久国产精品人妻蜜桃| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产黄色免费在线视频| 色综合婷婷激情| 国产淫语在线视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 美女福利国产在线| 精品一品国产午夜福利视频| 国产国语露脸激情在线看| 美国免费a级毛片| 美女午夜性视频免费| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 大片免费播放器 马上看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲精品自拍成人| 午夜91福利影院| 久久久精品免费免费高清| 成年人黄色毛片网站| 亚洲国产欧美网| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美精品一区二区免费开放| 一区二区三区乱码不卡18| 午夜福利乱码中文字幕| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久国产精品影院| 亚洲人成77777在线视频| 欧美成人免费av一区二区三区 | videos熟女内射| 午夜福利在线观看吧| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 久久久久精品国产欧美久久久| 国产一区二区三区视频了| 老司机影院毛片| 国产人伦9x9x在线观看| 男女午夜视频在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 一区二区三区乱码不卡18| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产一区二区三区视频了| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 午夜福利视频在线观看免费| 国产av又大| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 操美女的视频在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 午夜日韩欧美国产| 国产伦理片在线播放av一区| 777米奇影视久久| 不卡一级毛片| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 欧美中文综合在线视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产黄频视频在线观看| 欧美性长视频在线观看| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 高清av免费在线| 免费在线观看影片大全网站| 欧美日韩成人在线一区二区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日韩三级视频一区二区三区| 国产高清videossex| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲av日韩在线播放| 日日爽夜夜爽网站| 欧美午夜高清在线| 人妻久久中文字幕网| 婷婷成人精品国产| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 91九色精品人成在线观看| 1024香蕉在线观看| 精品久久蜜臀av无| 成人av一区二区三区在线看| 男女下面插进去视频免费观看| 久久99热这里只频精品6学生| 国产又爽黄色视频| 99热网站在线观看| 中文字幕制服av| 中国美女看黄片| 久久精品国产综合久久久| 精品乱码久久久久久99久播| 色婷婷av一区二区三区视频| 我要看黄色一级片免费的| 国产成人欧美| 成人精品一区二区免费| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| tube8黄色片| 大陆偷拍与自拍| 日韩有码中文字幕| 精品卡一卡二卡四卡免费| 嫩草影视91久久| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久青草综合色| 老司机靠b影院| 天堂动漫精品| 麻豆国产av国片精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产av精品麻豆| 性少妇av在线| 无限看片的www在线观看| 日本五十路高清| 日韩欧美免费精品| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 成年动漫av网址| 99久久精品国产亚洲精品| 国产成人欧美| 成人手机av| 手机成人av网站| 亚洲熟妇熟女久久| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 午夜福利欧美成人| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 蜜桃国产av成人99| 在线观看免费日韩欧美大片| 精品福利观看| cao死你这个sao货| a级毛片黄视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 一级毛片女人18水好多| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日本wwww免费看| 国产成人欧美| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 国产xxxxx性猛交| 99久久国产精品久久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产1区2区3区精品| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 精品久久久久久电影网| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产成人精品久久二区二区91| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲第一青青草原| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲成人免费av在线播放| 日本av免费视频播放| 亚洲色图av天堂| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 成人特级黄色片久久久久久久 | 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品视频人人做人人爽| 国产有黄有色有爽视频| 国产97色在线日韩免费| 正在播放国产对白刺激| 岛国在线观看网站| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久99一区二区三区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美精品亚洲一区二区| 一进一出好大好爽视频| 国产成人影院久久av| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲九九香蕉| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 免费日韩欧美在线观看| 久热这里只有精品99| 男人操女人黄网站| 中文亚洲av片在线观看爽 | 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 午夜激情av网站| 久久精品国产亚洲av高清一级| 丝袜美足系列| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 美女主播在线视频| 动漫黄色视频在线观看| 久久久久国内视频| 欧美午夜高清在线| 国产激情久久老熟女| 国产一区有黄有色的免费视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 成人av一区二区三区在线看| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲三区欧美一区| tocl精华| 日本黄色视频三级网站网址 | 久久热在线av| 精品视频人人做人人爽| www.熟女人妻精品国产| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 老司机福利观看| 少妇精品久久久久久久| 2018国产大陆天天弄谢| 一区二区日韩欧美中文字幕| 一级毛片电影观看| 免费在线观看完整版高清| 黄色丝袜av网址大全| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 国产一卡二卡三卡精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 黄色视频不卡| 啦啦啦在线免费观看视频4| 十八禁网站免费在线| 人人澡人人妻人| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久av网站| 黑人欧美特级aaaaaa片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久青草综合色| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 精品国内亚洲2022精品成人 | 天堂中文最新版在线下载| 中文字幕精品免费在线观看视频| 极品教师在线免费播放| 成人永久免费在线观看视频 | 不卡av一区二区三区| 国产精品av久久久久免费| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 成年版毛片免费区| 大香蕉久久成人网| 悠悠久久av| 99精品久久久久人妻精品| 久久久久久人人人人人| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲美女黄片视频| 人妻久久中文字幕网| 国产高清激情床上av| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产淫语在线视频| svipshipincom国产片| 两个人免费观看高清视频| www.熟女人妻精品国产| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产在线精品亚洲第一网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 大片免费播放器 马上看| 天天添夜夜摸| a级毛片黄视频| 国产精品 国内视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 男女边摸边吃奶| 手机成人av网站| 亚洲av国产av综合av卡| 国产精品久久久久久精品古装| 国产熟女午夜一区二区三区| 91字幕亚洲| 亚洲人成伊人成综合网2020| videos熟女内射| 日韩中文字幕视频在线看片| 热99久久久久精品小说推荐| 淫妇啪啪啪对白视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 一区二区三区国产精品乱码| 大陆偷拍与自拍| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美日韩黄片免| 精品国产乱码久久久久久小说| av天堂在线播放| 亚洲精品乱久久久久久| 久热这里只有精品99| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产精品.久久久| 国产在视频线精品| 母亲3免费完整高清在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 日本av免费视频播放| 中文字幕制服av| 两人在一起打扑克的视频| 天天影视国产精品| 伦理电影免费视频| 成年人免费黄色播放视频| 久久精品国产综合久久久| 18禁美女被吸乳视频| 国产精品国产高清国产av | 我的亚洲天堂| 国产精品一区二区在线观看99| 欧美 亚洲 国产 日韩一| av网站免费在线观看视频| av免费在线观看网站| tocl精华| 精品人妻1区二区| 大码成人一级视频| 国产一卡二卡三卡精品| 精品少妇内射三级| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品国产国语对白av| 国产精品久久久av美女十八| 99热国产这里只有精品6| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久久久久久精品吃奶| 精品久久久精品久久久| 女人久久www免费人成看片| 我的亚洲天堂| 国产精品国产av在线观看| 婷婷丁香在线五月| 男女午夜视频在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 精品久久久久久电影网| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲av日韩在线播放| 国产色视频综合| 精品卡一卡二卡四卡免费| 成人亚洲精品一区在线观看| 日日夜夜操网爽| 在线天堂中文资源库| 一级毛片精品| 国产三级黄色录像| 青青草视频在线视频观看| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲国产av新网站| 婷婷成人精品国产| 91国产中文字幕| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久99一区二区三区| 一本久久精品| 91成年电影在线观看| 久久 成人 亚洲| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美久久黑人一区二区| 热99久久久久精品小说推荐| 国产精品欧美亚洲77777| 日本欧美视频一区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| av线在线观看网站| 欧美日韩福利视频一区二区| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 美女福利国产在线| 精品免费久久久久久久清纯 | 一进一出好大好爽视频| 日日夜夜操网爽| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品99久久99久久久不卡| 一区在线观看完整版| 在线观看人妻少妇| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲av电影在线进入| 五月天丁香电影| 最新的欧美精品一区二区| 久久婷婷成人综合色麻豆| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲国产看品久久| xxxhd国产人妻xxx| 久久久久久久精品吃奶| 飞空精品影院首页| 婷婷丁香在线五月| 黄色视频不卡| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲人成电影免费在线| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 一夜夜www| 成人特级黄色片久久久久久久 | 91字幕亚洲| 亚洲精品国产一区二区精华液| 黄色视频不卡| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产成人系列免费观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产三级黄色录像| 国产老妇伦熟女老妇高清| 成人黄色视频免费在线看| 国产成人系列免费观看| 一级毛片女人18水好多| 满18在线观看网站| 超碰97精品在线观看| 一本色道久久久久久精品综合| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 色播在线永久视频| 亚洲av国产av综合av卡| 精品人妻1区二区| 久久人妻av系列| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲中文字幕日韩| 一本色道久久久久久精品综合| 99re6热这里在线精品视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美乱妇无乱码| 99re在线观看精品视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 99国产精品一区二区蜜桃av | 久久精品人人爽人人爽视色| 水蜜桃什么品种好| 国产麻豆69| 久久中文看片网| av不卡在线播放| 麻豆国产av国片精品| 精品一区二区三卡| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久精品成人免费网站| 波多野结衣av一区二区av| 淫妇啪啪啪对白视频| 男女下面插进去视频免费观看| 国产高清视频在线播放一区| 久久久精品94久久精品| 精品久久久久久久毛片微露脸| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 最新在线观看一区二区三区| 美女午夜性视频免费| svipshipincom国产片| 亚洲成人国产一区在线观看| 脱女人内裤的视频| 极品教师在线免费播放| 动漫黄色视频在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 久久久国产精品麻豆| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 性少妇av在线| 亚洲av美国av| 757午夜福利合集在线观看| 无人区码免费观看不卡 | 亚洲精品av麻豆狂野| av超薄肉色丝袜交足视频| 国产精品影院久久| 色视频在线一区二区三区| 一夜夜www| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 在线观看免费视频网站a站| 精品高清国产在线一区| 99riav亚洲国产免费| 少妇精品久久久久久久| 国产1区2区3区精品| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产精品久久久av美女十八| 啦啦啦在线免费观看视频4| 丝袜人妻中文字幕| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产成人免费无遮挡视频| 国产黄色免费在线视频| 在线观看一区二区三区激情| 国精品久久久久久国模美| 十八禁人妻一区二区| 国产精品久久久av美女十八| 精品少妇内射三级| 久久性视频一级片| 久热这里只有精品99|