IL-10和IL-17在ITP臨床治療中的研究

朱東來　王婷　陸靜　邵江波

【摘要】目的：研究白細(xì)胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）和白細(xì)胞介素-17（Interleukin-17，IL-17）在免疫性血小板減少癥（Immune thrombocytopenia，ITP）治療前后的血清表達(dá)水平，為ITP治療提供理論依據(jù)。方法：采取酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)30例原發(fā)性ITP患者治療前后血清IL-10和IL-17表達(dá)水平。進(jìn)一步按照患者體重指數(shù)BMI進(jìn)行分組，分析BMI正常組和超重組IL-10和IL-17表達(dá)水平的差異。結(jié)果 BMI正常組和超重組IL-10和IL-17表達(dá)水平均無明顯差異。ITP患者有效治療后的血清IL-17的表達(dá)水平較未治療時(shí)顯著降低（P<0.05），IL-10無明顯差異。結(jié)論：IL-17表達(dá)水平的增高可能參與了ITP的發(fā)病， IL-17水平對(duì)ITP患者臨床治療有一定指導(dǎo)意義。

關(guān)鍵詞：白細(xì)胞介素-10;白細(xì)胞介素-17;免疫性血小板減少癥

Abstract： Objective To investigate the expression of interleukin-10 （IL-10） and interleukin-17 （IL-17） before and after the treatment of immune thrombocytopenia （ITP）， which would provide a theoretical basis for the treatment of ITP. Methods The expressions of IL-10 and IL-17 of 30 ITP patients before and after treatment were detected by ELISA. Then they were divided into two groups according to BMI. One group is normal BMI and another is overweight BMI. The relationship between BMI and the expression of IL-10 and IL-17 were analyzed. Results There were both no statistically significant differences of the expression of IL-10 and IL-17 in normal BMI group and overweight BMI group （P>0.05）.The average expression level of serum IL-17 in effective treated ITP patients was significantly lower than that in the untreated group （P<0.05）， but there was no significant difference in IL-10 （P>0.05）. Conclusion Abnormal expression of serum IL-17 is involved in the pathogenesis of ITP， and IL-17 levels are significantly decreased after treatment is effective. Therefore， IL-17 has certain guiding significance in the treatment of ITP patients.

Key words：Interleukin-10; Interleukin-17; Immune thrombocytopenia

免疫性血小板減少癥（Immune thrombocytopenia，ITP）為免疫介導(dǎo)的臨床出血性疾病，以骨髓中巨核細(xì)胞發(fā)育障礙、血小板數(shù)量減少、廣泛的皮膚黏膜及內(nèi)臟出血、出血時(shí)間延長(zhǎng)和血塊收縮不良為主要特征。ITP是一種復(fù)雜的自身免疫性疾病，外周血血小板計(jì)數(shù)通常小于100×109/L。自身抗體致敏的血小板被單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬破壞是ITP發(fā)病的主要機(jī)制。Cines等人發(fā)現(xiàn)ITP的免疫耐受缺陷主要分為三類，包括：（1）在免疫刺激時(shí)產(chǎn)生的外周免疫耐受缺陷;（2）B細(xì)胞的分化缺陷;（3）中樞耐受缺陷。外周免疫耐受性喪失而引起的ITP更易于治療，并且在治療后復(fù)發(fā)的可能性較小，而中樞免疫耐受性的缺陷會(huì)影響多種細(xì)胞類型，且接受治療的患者更容易復(fù)發(fā)。雖然抗血小板糖蛋白抗體（HPA）的存在傳統(tǒng)上被認(rèn)為起著核心作用，近年來細(xì)胞因子紊亂在ITP中的作用逐漸得到了研究者們的關(guān)注。為了揭示相關(guān)炎癥因子在疾病發(fā)生發(fā)展過程中的作用，本研究采用ELISA方法檢測(cè)30例原發(fā)性ITP患者治療前和治療有效后的IL-10和IL-17表達(dá)水平，為ITP治療提供理論依據(jù)。

1.資料與方法

1.1一般資料

選取我院2019年1月至2019年8月30例原發(fā)性ITP，納入標(biāo)準(zhǔn)：ITP患者符合2013年ITP疾病診治建議：（1）正常血細(xì)胞形態(tài)，血小板計(jì)數(shù)小于100×109/L;（2）全身皮膚有瘀點(diǎn)/瘀斑、出血點(diǎn)或臟器出血和黏膜等情況;（3）一般脾臟無增大;（4）骨髓常規(guī)可見巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)正?；蛟龆?，有成熟障礙， 以顆粒巨核細(xì)胞增生為主;（5）本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者或家屬均自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者;（2）遺傳性血小板減少癥或以血小板計(jì)數(shù)減少為主要表現(xiàn)的再生障礙性貧血患者;（3）低增生性白血病者;（4）其他自身免疫性疾病患者。

1.2 儀器和方法

（1）儀器：全自動(dòng)血液分析儀。（2）試劑：人白介素10試劑盒，人白介素17試劑盒。（3）采集血液樣本：ITP患者剛?cè)朐簳r(shí)空腹抽靜脈血2mL，治療好轉(zhuǎn)后空腹抽靜脈血2mL，肝素抗凝，12000rpm離心2min，分離血清標(biāo)記好后保存于-20℃待檢。（4）收集好標(biāo)本后通過ELISA法檢測(cè)IL-10和IL-17水平。（5）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：正態(tài)分布資料采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，采用配對(duì)T檢驗(yàn)比較治療前后兩組IL-10和IL-17的差異，p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較BMI正常組和超重組IL-10和IL-17表達(dá)差異，以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3觀察指標(biāo)與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)每位研究對(duì)象記錄性別、年齡、BMI、血小板數(shù)量、入院時(shí)IL-10、IL-17的表達(dá)水平，治療有效后血清IL-10和IL-17的表達(dá)水平。按相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，治療有效為無出血，治療后血小板計(jì)數(shù)大于30×109/L，增加兩倍基礎(chǔ)血小板計(jì)數(shù);ITP療效判斷需行2次檢測(cè)，2次間隔7天及以上。

2.結(jié)果

2.1 ITP患者一般情況

30例原發(fā)性ITP并行HPA檢測(cè)的患者中男14例，女16例;年齡6歲-60歲。

2.2 ITP患者不同體重指數(shù)IL-10和IL-17水平比較

根據(jù)體重指數(shù)不同分為BMI正常和超重組，其中BMI正常組13例，超重組17例。采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)對(duì)兩個(gè)體重組的IL-10和IL-17進(jìn)行比較。不同BMI組IL-10和IL-17表達(dá)水平比較，BMI正常組和BMI超重組比較IL-10和IL-17表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表1。

2.3 ITP患者治療前后IL-10和IL-17水平比較

采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行治療前和治療有效后的IL-10和IL-17血清表達(dá)水平的比較，治療有效后IL-10表達(dá)水平與治療前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。治療有效后IL-17表達(dá)水平與治療前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。詳見表2。

2.4 ITP患者治療前血小板數(shù)量與IL-10和IL-17水平相關(guān)性分析

采用SPSS雙變量相關(guān)性分析血小板數(shù)量與IL-10表達(dá)水平的相關(guān)性，兩組相關(guān)系數(shù)為-0.9，P=0.636，認(rèn)為兩組無相關(guān)性;分析血小板數(shù)量與IL-17表達(dá)水平的相關(guān)性，兩組相關(guān)系數(shù)為-1.42，P=0.453，認(rèn)為兩組無相關(guān)性。

3.討論

白細(xì)胞介素、集落刺激因子、干擾素、腫瘤壞死因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-b、生長(zhǎng)因子和趨化因子等都屬于細(xì)胞因子，其中白細(xì)胞介素由淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞或其它非單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生，在細(xì)胞間的相互作用、免疫調(diào)節(jié)、造血以及炎癥過程中起重要調(diào)節(jié)作用。

IL-10是一種多細(xì)胞源、多功能的細(xì)胞因子，是目前公認(rèn)的炎癥與免疫抑制因子。它與其受體結(jié)合后可以抑制Th1細(xì)胞分泌IL-2、IL-3、干擾素和集落刺激因子，同時(shí)可以抑制自然殺傷細(xì)胞的活性，干擾巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子等。研究發(fā)現(xiàn)IL-10與多種自身免疫病密切相關(guān)，例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡，銀屑病，皮肌炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。研究證明IL-10在系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人血清中明顯升高，且與抗核小體抗體呈正相關(guān)，與疾病活動(dòng)性有關(guān)。因此我們推測(cè)IL-10可能在ITP中也有相似的變化。Talaat RM通過對(duì)35名ITP患者和15名健康志愿者對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，IL-10在ITP患者中水平明顯升高。Tesse R等對(duì)IL-10基因啟動(dòng)子區(qū)三個(gè)位點(diǎn)的基因多態(tài)性（-1082 （A/G），-819 （C/T） 和 -592 （C/A））進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)GCC基因型的ITP患者表達(dá)更高水平的IL-10，且92%的GCC型ITP為急性病程。本研究雖然沒有做疾病組與正常組的對(duì)比研究，而是將ITP患者治療前和治療有效后的IL-10表達(dá)水平做對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)ITP患者治療前后IL-10無明顯變化，這可能與樣本數(shù)較少有關(guān)。

Th17細(xì)胞是CD4+T細(xì)胞的一種亞型，主要分泌IL-17，IL-17 是一種致炎細(xì)胞因子，可以促進(jìn)T 細(xì)胞的激活和刺激上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子如IL-6、IL-8、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞刺激因子（GM-CSF）及細(xì)胞黏附分子1（cellular adhesion molecule 1，CAM-1），從而導(dǎo)致炎癥的產(chǎn)生。大量研究表明，IL-17與實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦炎（EAE）、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）等自身免疫性疾病明顯相關(guān)。因此我們推測(cè)IL-17有可能在ITP的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。有研究對(duì)30例ITP患者進(jìn)行IL-17檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)治療前后IL-17無明顯變化，Zhou ZJ等對(duì)54例ITP患者和40例健康對(duì)照進(jìn)行Th17和IL-17檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)ITP患者Th17和IL-17均明顯升高。Qian C等對(duì)45?ITP患者和30例健康對(duì)照者進(jìn)行IL-17檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)ITP患者IL-17明顯升高，且IL-17水平與血小板數(shù)量負(fù)相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中IL-17在ITP患者治療有效后明顯低于治療前，但是和血小板數(shù)量無相關(guān)性，提示IL-17與ITP發(fā)生密切相關(guān)。各研究之間結(jié)果的矛盾這可能是由于樣本數(shù)量較少，從而影響了結(jié)果的可信度。

4.結(jié)語

綜上所述，免疫激活和耐受平衡的打破在ITP的發(fā)生中扮演著重要的作用，細(xì)胞因子的變化較好的反應(yīng)了機(jī)體免疫功能的變化。本研究中IL-10在ITP治療前后無明顯變化，而IL-17在ITP治療有效后出現(xiàn)了明顯的下降，反映了機(jī)體炎癥得到一定程度的抑制，故對(duì)IL-17的檢測(cè)在反映ITP的治療效果方面具有重要的臨床價(jià)值。

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【作者簡(jiǎn)介】朱東來（1976.05-），男，漢族，江蘇省鎮(zhèn)江市人，本科學(xué)歷，鎮(zhèn)江市第三人民醫(yī)院主管檢驗(yàn)師，主要研究方向：臨床檢驗(yàn)學(xué)。