整合素α5與上皮性卵巢癌的相關(guān)性研究

穆翔 杜維民 史可心 張?jiān)Ｃ? 張萍

[摘要] 目的 研究整合素α5（integrin α5）蛋白在上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)情況，并分析其與上皮性卵巢癌的臨床病理關(guān)系。 方法 選擇2015年1月～2017年12月山東省青島市市立醫(yī)院婦科中心80例住院患者的卵巢腫瘤組織（上皮性卵巢癌40例，交界性上皮性腫瘤20例，良性上皮性腫瘤20例），采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)integrin α5蛋白在卵巢腫瘤組織中的表達(dá)情況。 結(jié)果 上皮性卵巢癌組織中integrin α5陽(yáng)性率為80.00%（32/40），顯著高于交界性上皮性腫瘤組織[40.00%（8/20）]和良性上皮性腫瘤組織[20.00%（4/20）]（P < 0.01）。上皮性卵巢癌組織中integrin α5蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在不同年齡、病理類(lèi)型間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;而在不同病理分化程度、病理分期間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）;在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示上皮性卵巢癌組織中integrinα5的表達(dá)與卵巢癌的手術(shù)病理分期、病理分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)（r = 0.854、0.765、0.895，P < 0.05）。 結(jié)論 integrin α5在上皮性卵巢癌組織中過(guò)量表達(dá)，與病理分化程度、病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，通過(guò)監(jiān)測(cè)integrin α5的表達(dá)，可能幫助判斷卵巢癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后以及指導(dǎo)臨床治療。

[關(guān)鍵詞] 整合素α5;卵巢腫瘤;上皮性卵巢癌;免疫組織化學(xué)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737.21? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2020）05（b）-0114-04

Correlation between integrin α5 and epithelial ovarian cancer

MU Xiang1? ?DU Weimin1? ?SHI Kexin2? ?ZHANG Yumin3? ?ZHANG Ping1

1.Department of Gynaecology， Qingdao Municipal Hospital Affiliated to Qingdao University， Shandong Province， Qingdao? ?266000， China; 2.Medical College of Qingdao University， Shandong Province， Qingdao? ?266071， China; 3.Food Inspection and Testing Institute of Heze City， Shandong Province， Heze? ?274000， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of integrin α5 in epithelial ovarian tumors and to analyze its clinicopathological relationship with epithelial ovarian cancer. Methods From January 2015 to December 2017， Ovarian tumor tissue were collected from 80 hospitalized patients under the care of the Gynecology Center of the Qingdao Municipal Hospital （40 epithelial ovarian cancer samples， 20 borderline epithelial tumor samples and 20 benign epithelial tumor samples）. Immunohistochemistry was used to detect the expression of integrin α5 protein in ovarian tumor tissues. Results The positivity of integrin α5 in epithelial ovarian cancer samples was 80.00% （32/40）， which was significantly higher than that in borderline epithelial tumor samples （40.00% [8/20]） and benign epithelial tumor samples （20.00% [4/20]）（P < 0.01）. There was no statistically significant difference in the positive expression rate of integrin α5 protein in epithelial ovarian cancer among different ages and pathological types （P > 0.05）. There was a significant difference among different degree of pathological differentiation and different stages of operation and pathology （P < 0.05）; the difference was highly statistically significant between the presence and absence of lymph node metastasis （P < 0.01）. Spearman rank correlation analysis showed that the expression of integrin α5 in epithelial ovarian cancer tissues was significantly positively correlated with the surgical pathological stage， pathological differentiation degree and presence or absence of lymph node metastasis of ovarian cancer （r = 0.854， 0.765， 0.895， P < 0.05）. Conclusion The overexpression of integrin α5 in epithelial ovarian cancer tissues is closely related to the degree of pathological differentiation， surgical pathological stage and lymph node metastasis. Monitoring the expression of integrin α5 may help to determine the long-term prognosis of ovarian cancer patients and guide clinical treatment.

[Key words] Integrin α5; Ovarian tumor; Epithelial ovarian cancer; Immunohistochemistry

卵巢癌是婦科常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，是病死率最高的婦科惡性腫瘤[1-2]。因卵巢位置隱匿，早期缺乏特異性癥狀，70%以上的患者確診時(shí)已屆晚期，直接蔓延、腹腔種植及淋巴轉(zhuǎn)移是其主要的轉(zhuǎn)移途徑[3]。卵巢腫瘤細(xì)胞主要從原發(fā)部位脫落并種植于腹腔，腫瘤細(xì)胞可黏附到器官的間皮層上，這是形成繼發(fā)性病灶和上皮性卵巢癌進(jìn)展的關(guān)鍵步驟[4]。整合素（Integrin）為細(xì)胞黏附分子家族的重要成員之一，主要介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）之間的相互黏附，并介導(dǎo)細(xì)胞與ECM之間的雙向信號(hào)傳導(dǎo)[5]。研究顯示，integrin α5在多種人類(lèi)腫瘤中存在過(guò)度表達(dá)，如食管癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌[6-9]等，但在卵巢癌中的研究相對(duì)較少。因此，本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)integrin α5蛋白在上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)，以期為判斷上皮性卵巢癌的遠(yuǎn)期預(yù)后及為指導(dǎo)臨床治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

選擇2015年1月～2017年12月在山東省青島市市立醫(yī)院婦科中心住院的80例患者的卵巢腫瘤組織（上皮性卵巢癌40例，交界性上皮性腫瘤20例，良性上皮性腫瘤20例），患者術(shù)前均未行放療和化療，未合并其他惡性腫瘤。術(shù)后病理組織經(jīng)2名病理科專(zhuān)家會(huì)診，明確診斷。良性上皮性腫瘤組織20例，年齡21～50歲，平均（38.4±11.3）歲，其中漿液性囊腺瘤10例，黏液性囊腺瘤10例;交界性上皮性腫瘤組織20例，年齡18～56歲，平均（41.7±13.6）歲，其中交界性漿液性腫瘤10例，交界性黏液性腫瘤10例;上皮性卵巢癌組織40例，年齡25～72歲，平均（57.5±14.4）歲，其中≤60歲者25例，>60歲者15例。其病理類(lèi)型：漿液性癌15例，黏液性癌10例，子宮內(nèi)膜樣癌7例，透明細(xì)胞癌8例;病理分化程度：高級(jí)別22例，低級(jí)別18例;國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）標(biāo)準(zhǔn)[10]：Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期21例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例，淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者10例，未檢查20例。卵巢腫瘤病理診斷標(biāo)準(zhǔn)：《腫瘤病理診斷規(guī)范（卵巢癌及交界性上皮性腫瘤）[11]。

1.2 方法與主要試劑

采用SP免疫組化法檢測(cè)卵巢組織中integrin α5的表達(dá)。所用integrin α5兔抗人單克隆抗體（稀釋度1∶100）購(gòu)自英國(guó)abcam公司;SP試劑盒和DAB顯色劑均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。

1.3 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

Integrin α5蛋白陽(yáng)性染色定位于胞膜，DAB染色后出現(xiàn)棕黃色顆粒。免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用雙盲法閱片，每張切片隨機(jī)選擇10個(gè)具有代表意義的高倍視野（200×），每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，根據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞取平均數(shù)作為最終的結(jié)果。以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例分為：<10%記為0分，10%～30%記為1分，>30%～50%記為2分，>50%記為3分;根據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分：不著色記為0分，淺黃色記為1分，棕黃色記為2分，棕褐色記為3分。兩種評(píng)分的乘積為最終陽(yáng)性強(qiáng)度的評(píng)分。最終積分≤3分計(jì)為陰性（-），>3～6分為陽(yáng)性（+），>6分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)或百分率表示integrin α5蛋白在各卵巢組織的表達(dá)陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)。integrin α5蛋白的表達(dá)強(qiáng)度和相對(duì)表達(dá)水平采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn);integrin α5與臨床病理特征間的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 integrin α5蛋白在不同卵巢組織中的表達(dá)情況

integrin α5蛋白在上皮性卵巢癌中表達(dá)陽(yáng)性率為80%（32/40），顯著高于交界性上皮性腫瘤組[40.00%（8/20）]和良性上皮性腫瘤組[20.00%（4/20）]（P < 0.01）。見(jiàn)圖1（封四）、表1。

2.2 卵巢癌組織中integrin α5蛋白的表達(dá)與不同臨床病理參數(shù)的關(guān)系

上皮性卵巢癌組織中integrin α5蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在不同年齡、病理類(lèi)型間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;而在不同病理分化程度、病理分期間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示上皮性卵巢癌組織中integrin α5的表達(dá)與卵巢癌的手術(shù)病理分期、病理分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)（r = 0.854、0.765、0.895，P < 0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

Integrin是由α亞基和β亞基組成的跨膜異二聚體，是基質(zhì)中纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)n）的一個(gè)重要受體，integrin α5β1只識(shí)別Fn分子中的RGD序列（Arg-Gly-Asp，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）[12]，在與配體結(jié)合后，integrin激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)，如細(xì)胞周期的調(diào)控，細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞骨架的組成，以及新生受體向細(xì)胞膜的運(yùn)動(dòng)[13]。細(xì)胞與ECM之間的黏附是通過(guò)受體來(lái)決定，其中以integrin受體起主要作用，腫瘤細(xì)胞的黏附受體只有與ECM成分黏附，才能實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移[14]。

本研究中，integrin α5蛋白在上述組織中的表達(dá)差異提示integrin α5表達(dá)量的改變，可能與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展相關(guān)，高表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展和惡性程度相關(guān)。根據(jù)研究結(jié)果顯示integrin α5蛋白的表達(dá)與年齡及病理類(lèi)型無(wú)關(guān)，一方面說(shuō)明其表達(dá)可能不受年齡及病理類(lèi)型的影響，另一方面可能受病例數(shù)量、抗體濃度及方法的敏感性影響。在上皮性卵巢癌的病理類(lèi)型中，integrin α5蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率無(wú)差異，本研究結(jié)果顯示透明細(xì)胞癌的integrin α5蛋白的表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性率明顯高于其他病理類(lèi)型，透明細(xì)胞癌中integrin α5蛋白的特異性表達(dá)增高，使其與周?chē)M織具有更強(qiáng)的黏附能力，較其他病理類(lèi)型更早發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后更差，這與Chan等[15]的研究結(jié)果相符合。Spearman等級(jí)相關(guān)分析結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌患者組織中integrin α5的表達(dá)量與卵巢癌的病理分級(jí)、分期及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)，提示integrin α5的表達(dá)增加促進(jìn)惡性腫瘤的進(jìn)展，但是具體機(jī)制需要進(jìn)一步研究。研究顯示晚期卵巢癌組織中integrin α5的陽(yáng)性表達(dá)要高于早期卵巢癌，integrin α5表達(dá)越高的患者，腫瘤細(xì)胞的惡性程度越高，有更早進(jìn)展為卵巢癌的趨勢(shì)。另外，在不同分化程度的上皮性卵巢癌中，高級(jí)別的卵巢癌組織integrin α5蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率要高于低級(jí)別的卵巢癌組織（P < 0.05），這提示腫瘤病理分級(jí)越高，分化程度越低，integrin α5蛋白的表達(dá)越高，腫瘤細(xì)胞的惡性程度就越高，這與Xiao等[16]、Zutter等[17]的研究相一致，由于卵巢癌預(yù)后與組織的分化程度密切相關(guān)，晚期卵巢癌并高級(jí)別分化通常預(yù)示預(yù)后不良，Lu等[18]研究發(fā)現(xiàn)，integrin α5蛋白在結(jié)直腸癌中過(guò)量表達(dá)且為腫瘤惡性進(jìn)展的必要成分，并可作為癌癥預(yù)后的潛在標(biāo)志物，因此推測(cè)可以通過(guò)integrin α5表達(dá)量來(lái)間接判斷卵巢癌的預(yù)后。

腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)黏附才能發(fā)生轉(zhuǎn)移，integrin α5是主要的黏附受體，Integrin α5表達(dá)量增加，增強(qiáng)了卵巢癌細(xì)胞與周?chē)M織的黏附，這可能為卵巢癌侵襲周?chē)M織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移提供了前提條件。因此integrin α5的表達(dá)增加與卵巢癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，這與結(jié)直腸癌中的研究相一致[19-20]。

本研究中，integrin α5表達(dá)陽(yáng)性率與上皮性卵巢癌的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，由此推斷integrin α5的表達(dá)量差異在一定程度上可評(píng)估上皮性卵巢癌預(yù)后，并為卵巢癌的臨床診治提供了一定的實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。

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（收稿日期：2019-11-14? 本文編輯：封? ?華）