馮海青 鄒君 杜艷 劉明軍 謝軍濤
摘 要:目的:建立糖漿劑、合劑中苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯的限量檢查方法。方法:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(5μm 4.6×250mm);以甲醇為流動(dòng)相A,0.02mol/L醋酸銨(加入0.2%甲酸)-甲醇(85:15)為流動(dòng)相B梯度洗脫,流速1.0ml·min-1,柱溫40℃,二極管陣列檢測器,檢測波長228nm、256nm。結(jié)果:方法專屬性好;10小時(shí)內(nèi)各成分有較好的穩(wěn)定性。結(jié)論:建立的檢測方法簡單、準(zhǔn)確,能滿足糖漿劑、合劑中常用防腐劑限量檢查的要求。
關(guān)鍵詞:HPLC;糖漿劑;合劑;苯甲酸;山梨酸;羥苯甲酯;羥苯乙酯;羥苯丙酯;羥苯丁酯
糖漿劑和合劑是藥物以一定形式分散于液體介質(zhì)中所制成的供口服的液體分散體系。具有分散度大,吸收快;易于分劑量,服用方便;減少某些藥物的刺激性等優(yōu)點(diǎn)。是應(yīng)用廣泛的制劑類型。糖漿劑和合劑可能由于制劑和使用過程引入污染源,加入防腐劑是最為方便有效的措施。然而超量使用防腐劑存在中毒、致癌等健康風(fēng)險(xiǎn),中國藥典2015版四部制劑通則中糖漿劑和合劑明確規(guī)定了苯甲酸和山梨酸用量不得過0.3%,羥苯酯類用量不得過0.05%[1]。本方法旨在采用高效液相色譜法限量檢測糖漿劑和合劑中的苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯。
1 儀器與試劑
高效液相色譜儀:Thermo Ultimate3000;對照品苯甲酸(北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司,批號(hào)A1707298)、山梨酸(中國食品藥品檢定研究院,批號(hào)190126-201501)、羥苯甲酯(中國食品藥品檢定研究院,批號(hào)100278-201404)、羥苯乙酯(中國食品藥品檢定研究院,批號(hào)100847-201203)羥苯丙酯(中國食品藥品檢定研究院,批號(hào)100444-201403)、羥苯丁酯(中國食品藥品檢定研究院,批號(hào)110792-200503);甲醇為色譜純,水為重蒸水,其余試劑為分析純;陰性樣品由實(shí)驗(yàn)室自制;樣品來源于本所日常檢驗(yàn)之樣品。
2 方法與結(jié)果
2.1 混合對照品溶液的制備
精密稱取苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯對照品,加流動(dòng)相B制成每1ml分別含苯甲酸60μg、山梨酸60μg、羥苯甲酯10μg、羥苯乙酯10μg、羥苯丙酯10μg、羥苯丁酯10μg的混合對照品溶液。
2.2 供試品的制備
精密量取樣品1ml,加濃鹽酸200μl振搖后用乙醇定容至50ml,振搖后靜置,取上清液過0.45μm濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。
2.3 色譜條件
色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(5μm 4.6×250mm);流動(dòng)相:以甲醇為流動(dòng)相A,0.02mol/L醋酸銨(含0.2%甲酸)-甲醇(85∶15)為流動(dòng)相B;按表1梯度洗脫;流速:1.0ml·min-1;柱溫:40℃;檢測器:二極管陣列檢測器;檢測波長:228nm、256nm;進(jìn)樣量20μl。
2.4 專屬性考察
取樣品和陰性樣品,按2.2項(xiàng)下方法處理。分別取混合對照品溶液、樣品溶液和陰性對照樣品20μl注入高效液相色譜儀,照2.3項(xiàng)下色譜條件檢測。從色譜圖可見該方法的專屬性較好,色譜圖見圖1、2。
2.5 檢測限考察
以對照品溶液進(jìn)樣,信噪比為3∶1時(shí)的確定進(jìn)樣量4ng為檢測限。
2.6 穩(wěn)定性考察
取對照品溶液,分別在0、2、4、6、8、10小時(shí)時(shí)測定其峰面積,結(jié)果表明在10小時(shí)內(nèi)各成分有較好的穩(wěn)定性,結(jié)果見表2。
2.7 樣品限量檢查
取本所日常檢驗(yàn)之19批次樣品按2.2項(xiàng)下處理,按2.3項(xiàng)下方法檢測限量,檢測結(jié)果根據(jù)中國藥典2015版四部制劑通則中糖漿劑和合劑限量規(guī)定判定,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。
3 討論
3.1 色譜條件的選擇
檢測波長:考慮苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯最大吸收波長差別較大且山梨酸、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯和羥苯丁酯最大吸收波長時(shí)苯甲酸響應(yīng)值較小不適宜計(jì)算,綜合考慮選擇雙波長(228nm、256nm)一次檢測。流動(dòng)相:經(jīng)預(yù)試驗(yàn),在流動(dòng)相加入醋酸有助于改善苯甲酸、山梨酸、羥苯甲酯的峰形和分離度。將0.02mol/L醋酸銨(含0.2%甲酸)與甲醇(85∶15)預(yù)先混合的目的是為了避免醋酸銨在梯度洗脫中因?yàn)橛袡C(jī)相變化比例太大對儀器和色譜柱造成影響。流動(dòng)相的梯度比例和時(shí)間是經(jīng)過大量的預(yù)試驗(yàn)最終確定的,主要是考慮大部分樣品在前20分鐘有大量的雜峰出現(xiàn)以及讓山梨酸和羥苯甲酯達(dá)到最佳分離度,而本研究過程中的難點(diǎn)也是山梨酸和羥苯甲酯的分離度。
3.2 小結(jié)
采用本方法檢測本單位日常抽檢之樣品,19批次中竟有15批次防腐劑用量超出限量,而中國藥典2015年版只對糖漿劑和合劑中防腐劑使用種類和用量做出了限制性規(guī)定,卻沒有提供法定的檢測方法,給目前的檢測工作帶來極大困擾。本方法在參考其他現(xiàn)行行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[2,3]的基礎(chǔ)上采用HPLC梯度洗脫的方法將糖漿劑和合劑中的限定使用的6種防腐劑成功分離,經(jīng)驗(yàn)證專屬性、耐用性好,檢出限滿足限量要求,適用于日常檢驗(yàn)工作,為糖漿劑、合劑及其他液體制劑生產(chǎn)過程中質(zhì)量控制和產(chǎn)品檢測提供了方法。
參考文獻(xiàn)
[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2015年版四部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015.
[2] 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn).GB 5009.28-2016,食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定[S].
[3] 中華人民共和國出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn).SN/T 1121-2002,中藥制劑中苯甲酸、山梨酸和對羥基苯甲酸酯類防腐劑的檢驗(yàn)方法[S].