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    激光剝蝕原位有機(jī)碳穩(wěn)定同位素分析方法

    2020-07-04 02:10張晗魏來(lái)廖旭王佳妮史秋月張嫻
    分析化學(xué) 2020年6期

    張晗 魏來(lái) 廖旭 王佳妮 史秋月 張嫻

    摘 要 自行研制了激光剝蝕取樣與穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用接口,建立了以激光剝蝕微量取樣的微區(qū)有機(jī)碳同位素分析方法??疾炝瞬都瘯r(shí)間、樣品量和激光能量等對(duì)同位素分餾的影響,采用3種標(biāo)樣驗(yàn)證了分析方法的準(zhǔn)確性。結(jié)果表明,此裝置可對(duì)固體樣品進(jìn)行高靈敏度的連續(xù)在線(xiàn)分析,樣品用量?jī)H10?8 g,比傳統(tǒng)的元素分析同位素質(zhì)譜聯(lián)用方法的樣品用量降低了104倍。本方法有效避免了激光剝蝕在取樣、傳輸和離子化過(guò)程的多種分餾因素,獲得了可重復(fù)的、高精度的測(cè)試結(jié)果。以13C標(biāo)記的水稻為例,在葉尖獲得了橫截面的碳同位素分布差異信息。結(jié)合激光剝蝕技術(shù)原位取樣的優(yōu)勢(shì),此技術(shù)可用于考察固體樣品微區(qū)高分辨的碳同位素分布,在環(huán)境、農(nóng)林學(xué)、生態(tài)學(xué)領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。

    關(guān)鍵詞 激光剝蝕;有機(jī)碳穩(wěn)定同位素;原位碳同位素分析

    1 引 言

    激光剝蝕(Laser ablation)顯微取樣技術(shù)是地球、環(huán)境和考古科學(xué)研究中重要的分析工具[1]。 該技術(shù)樣品用量少,制樣簡(jiǎn)單,可遠(yuǎn)程、實(shí)時(shí)、在線(xiàn),相對(duì)快速地處理、提取樣品,并具備高空間分辨率能力,可將101~102 μm深度的測(cè)量剖面劃分成不同區(qū)域,以描述其生長(zhǎng)帶或擴(kuò)散梯度空間,具有相當(dāng)大的分析靈活性。激光剝蝕用于電感耦合等離子質(zhì)譜(ICP-MS)分析的技術(shù)已經(jīng)很成熟,是高靈敏度、多元素微區(qū)微量原位快速分析技術(shù)。將激光燒蝕顯微取樣方式與氣體同位素質(zhì)譜聯(lián)用(Laser ablation-isotope ratio mass spectrometry,LA-IRMS)一方面可快速地將固體樣品直接引入同位素質(zhì)譜,避免離線(xiàn)制樣的種種困難,減免氣體交換風(fēng)險(xiǎn),提高取樣的準(zhǔn)確度和進(jìn)樣效率;另一方面可充分利用激光燒蝕微區(qū)原位取樣優(yōu)勢(shì),取樣量低,分析時(shí)間短,可獲得包含固體樣品空間信息的二維同位素分布圖像。

    目前已有一些相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,如Moran等[2]采用LSX-500Nd:YAG激光,以266 nm波長(zhǎng)輸出,燒蝕固體樣品表面,設(shè)計(jì)了圓形不銹鋼剝蝕腔體,剝蝕后的樣品通過(guò)催化燃燒后,以六通閥門(mén)導(dǎo)入定量環(huán),引入氣體穩(wěn)定同位素質(zhì)譜。該技術(shù)成功將原來(lái)至少25 μg碳樣品量降低至65 ng,后續(xù)成功應(yīng)用該技術(shù)示蹤了生物墊(Microbial mats)內(nèi)不同類(lèi)型藻類(lèi)微生物群落對(duì)標(biāo)記的碳酸鹽的累積狀況,實(shí)現(xiàn)了50 μm的空間分辨率[3]。2019年,該課題組又利用該技術(shù)研究了根系碳在土壤中的分配[4]。 van Roij等[5]于2017年設(shè)計(jì)的ng級(jí)激光燒蝕系統(tǒng)與同位素質(zhì)譜聯(lián)用,實(shí)現(xiàn)了對(duì)單花粉顆粒的激光取樣同位素檢測(cè)。該設(shè)備采用193 nm DUV(深紫外)ArF激光,設(shè)計(jì)了微量激光燒蝕腔體與氣相色譜聯(lián)用,實(shí)現(xiàn)了連續(xù)流多點(diǎn)位即時(shí)采樣。最近,該研究組采用該技術(shù)對(duì)單個(gè)水蚤進(jìn)行了多次采樣(常規(guī)分析通常需要大于20只水蚤),并獲得了良好的重現(xiàn)性[6]。2019年,Rodionov等[7]采用213 nm激光剝蝕與PreCon聯(lián)用,研究了根系分泌物對(duì)土壤微生物影響,發(fā)現(xiàn)25%~50% 的根系碳在300 μm區(qū)域內(nèi)與土壤/土壤微生物進(jìn)行交換。

    然而,目前相關(guān)研究仍存在因同位素質(zhì)譜載氣流速限制,為了完全吹掃樣品而不得不限制樣品池體積,以致樣品池過(guò)小而應(yīng)用受限的問(wèn)題[5],以及載氣不純或系統(tǒng)連接處微漏等因素累積導(dǎo)致空白背景信號(hào)過(guò)高[7]等缺陷。本研究對(duì)現(xiàn)有聯(lián)用設(shè)備的缺陷進(jìn)行了針對(duì)性改進(jìn),研制了通用性強(qiáng)、低背景的樣品池,優(yōu)化了接口設(shè)計(jì)和測(cè)試條件,實(shí)現(xiàn)了對(duì)固體樣品原位、快速、微量、高精度有機(jī)碳同位素分析。

    2 實(shí)驗(yàn)部分

    2.1 儀器與試劑

    UP-213激光剝蝕系統(tǒng)(New Wave公司);Delta V advantage穩(wěn)定同位素質(zhì)譜儀、PreCon氣體預(yù)濃縮系統(tǒng)(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)。

    自行研制的激光剝蝕與穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用接口包含: (1)復(fù)合吸附凈化裝置 由于激光剝蝕取樣在納克級(jí)別,干凈的背景尤為重要。系統(tǒng)背景主要來(lái)源于兩方面: 系統(tǒng)管路各接頭和樣品池的密閉性導(dǎo)致空氣中CO2和其它含碳雜質(zhì)進(jìn)入;載氣純凈度。由于采用冷阱富集,在富集樣品的同時(shí),載氣中含碳雜質(zhì)亦同時(shí)被累積。本套系統(tǒng)對(duì)載氣采用分級(jí)凈化,針對(duì)烴類(lèi)雜質(zhì),在氦氣管路增加烴類(lèi)捕集阱(In-line gas purifiers,Agilent);針對(duì)CO采用舒茨試劑(I2O5)捕集;針對(duì)CO2采用NaOH捕集,另加裝Mg(ClO4)2除去痕微量剝蝕出的H2O,多重復(fù)合吸附劑共同作用,確保零背景信號(hào)。(2)樣品池和樣品臺(tái) 簡(jiǎn)化樣品池,除頂部石英玻片采用螺絲固定,其余為不銹鋼拋光加工,一體成型,避免漏氣。樣品池直徑30 mm,體積5.65 mL,遠(yuǎn)大于文獻(xiàn)[3]樣品池尺寸,適用范圍更寬。商業(yè)化的激光剝蝕一般用于ICP-MS,流量高達(dá)1 L/min,而同位素質(zhì)譜載氣僅為1~2 mL/min。為了保證完整吹掃,樣品池內(nèi)壁為弧形設(shè)計(jì),載氣流量25 mL/min,在雙冷阱處以六通閥切換至1 mL/min后進(jìn)入質(zhì)譜。(3)高溫反應(yīng)爐 由于剝蝕出的樣品為有機(jī)氣溶膠,需轉(zhuǎn)化為CO2進(jìn)入穩(wěn)定同位素質(zhì)譜。采用熱電公司Precon內(nèi)微量高溫反應(yīng)爐,在1000℃高溫下,將剝蝕出的氣溶膠定量轉(zhuǎn)化為CO2。(4)雙冷阱富集裝置 由于樣品傳輸存在先后,為完整收集剝蝕樣品,對(duì)高溫爐轉(zhuǎn)化后的CO2采用冷阱捕集,并二次聚焦,確保完整反映樣品真實(shí)信息,并減少樣品間干擾。(5)反吹系統(tǒng) 為避免樣品殘存在樣品池或傳輸管路,加裝反吹載氣,在樣品采集后,開(kāi)啟反吹,自高溫爐往回吹掃,經(jīng)過(guò)反應(yīng)池和化學(xué)吸附阱后排空。(6)水阱 在進(jìn)入質(zhì)譜離子源前加裝半透膜水阱,以氦氣吹掃,除去高溫爐生成并從冷阱內(nèi)逸出的少量水分。整套裝置設(shè)計(jì)和實(shí)物如圖1所示。

    標(biāo)準(zhǔn)樣品: IAEA-CH-7(聚乙烯塑料薄膜,國(guó)際原子能機(jī)構(gòu));IAEA 600(粉末狀半胱氨酸,國(guó)際原子能機(jī)構(gòu));Urea(粉末狀尿素,IVA Analysentechnik)。

    2.2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.2.1 檢出限和靈敏度計(jì)算方法 在激光剝蝕前加裝三通,其中兩通連接氣路,一通采用橡膠隔墊密封,用于直接注射CO2,以計(jì)算裝置的靈敏度,判斷激光剝蝕的樣品量和無(wú)激光剝蝕時(shí)整個(gè)系統(tǒng)的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。連續(xù)8次注射1 μL CO2標(biāo)準(zhǔn)氣,平均峰面積為83.25 Vs,根據(jù)氣體摩爾體積公式計(jì)算,1 μL CO2氣體中含有535.2 ng碳,即該套系統(tǒng)的靈敏度(碳)為6.4 ng/(V s)。 同時(shí),Delta V advantage同位素質(zhì)譜獲得穩(wěn)定測(cè)試結(jié)果要求信號(hào)在500 mV以上,對(duì)應(yīng)體積約0.7 Vs,由此計(jì)算該套系統(tǒng)測(cè)試檢測(cè)下限為~4.5 ng碳。

    2.2.2 激光剝蝕原位有機(jī)碳同位素分析方法 (1)測(cè)試開(kāi)始,將六通閥切換至Load模式,放下冷阱1至液氮。打開(kāi)激光剝蝕,選好能量、光斑、剝蝕方式等參數(shù),預(yù)熱6 s后,開(kāi)始剝蝕。(2)剝蝕時(shí)間通常延續(xù)5~20 s,富集過(guò)程通常持續(xù)50~100 s,確保剝蝕出的氣溶膠樣品被捕集完全,然后切換六通閥。(3)放下冷阱2,預(yù)冷5 s,同時(shí)打開(kāi)反吹清掃樣品池。(4)提起冷阱1,將富集的樣品轉(zhuǎn)移至冷阱2。(4) 提起冷阱2,將樣品送入質(zhì)譜測(cè)試。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 系統(tǒng)空白

    經(jīng)過(guò)多重凈化材料吸附,背景信號(hào)被有效控制,冷阱富集載氣50 s時(shí),整體背景信號(hào)僅0.015 V s,遠(yuǎn)優(yōu)于文獻(xiàn)[6](50 s富集后,背景近2.0 V s)。富集100 s時(shí),背景也僅0.105 V s,完全滿(mǎn)足測(cè)試需求。

    3.2 剝蝕樣品捕集條件測(cè)試

    LA-ICPMS產(chǎn)生的分餾效應(yīng)發(fā)生在激光與樣品的相互作用過(guò)程、樣品氣溶膠顆粒的傳輸過(guò)程以及樣品氣溶膠在ICP等離子體中的離子化過(guò)程。將激光剝蝕應(yīng)用于同位素測(cè)試時(shí),該問(wèn)題的解決同樣至關(guān)重要。激光剝蝕的氣溶膠顆粒能否代表樣品的原始組成,是否產(chǎn)生質(zhì)量歧視,能否傳輸完全,能否完全轉(zhuǎn)化為CO2并在離子源中定量檢測(cè),是測(cè)試中需要考慮的因素。本研究對(duì)各過(guò)程影響因素進(jìn)行了系統(tǒng)優(yōu)化。

    3.2.1 捕集時(shí)間 受同位素質(zhì)譜靈敏度限制,實(shí)際采樣根據(jù)樣品含碳量確定剝蝕長(zhǎng)度/面積,過(guò)程將持續(xù)數(shù)秒,

    若實(shí)時(shí)采集,樣品峰將嚴(yán)重拖尾。本套聯(lián)用裝置采用雙冷阱富集,能夠?qū)γ看蝿兾g樣品中不同形態(tài)、不同大小和先后傳輸?shù)念w粒進(jìn)行完整收集,有效避免因前述過(guò)程導(dǎo)致的質(zhì)量歧視和同位素分餾,彌補(bǔ)了LA-ICPMS實(shí)時(shí)聯(lián)用過(guò)程中剝蝕氣溶膠和顆粒在傳輸和離子化過(guò)程帶來(lái)的分餾缺陷。

    以國(guó)際原子能機(jī)構(gòu)提供的IAEA-CH-7聚乙烯塑料膜作為參考,確定冷阱捕集。在激光輸出能量60%、激光光斑55 μm、激光線(xiàn)性剝蝕IAEA-CH-7長(zhǎng)度300 μm條件下,(剝蝕出~150 ng碳),考察不同冷阱富集時(shí)間對(duì)可捕集到樣品量的影響。由圖2可見(jiàn),冷阱富集50 s時(shí),樣品捕集基本完成。綜合考慮空白背景影響和分析效率因素,選擇樣品捕集時(shí)間為50 s。

    3.2.2 剝蝕樣品量

    對(duì)IAEA-CH-7聚乙烯塑料膜進(jìn)行不同長(zhǎng)度剝蝕,測(cè)試?yán)溱甯患瘲l件對(duì)樣品量的容納程度,如圖3所示,冷阱捕集50 s條件下,剝蝕線(xiàn)性長(zhǎng)度為50~500 μm(樣品峰面積2.5~10.87 V s),與同位素質(zhì)譜捕獲的峰面積呈線(xiàn)性相關(guān)(R2=0.991),表明此冷阱富集條件對(duì)該信號(hào)范圍內(nèi)的樣品峰可基本實(shí)現(xiàn)完全富集。

    3.2.3 激光能量 由于IAEA-CH-7聚乙烯塑料膜形態(tài)相對(duì)特殊,相對(duì)薄而容易被擊穿,在驗(yàn)證激光能量時(shí),選擇了常規(guī)EA-IRMS常用的粉末狀標(biāo)物IAEA 600(半胱氨酸)并對(duì)其壓片后測(cè)試。壓片后的樣品厚度可控,形態(tài)如圖4A所示。連續(xù)調(diào)整激光輸出能量,

    由20%調(diào)整至100%(20%以下無(wú)法剝蝕出足夠樣品),重復(fù)3次。激光能量對(duì)同位素比值的影響見(jiàn)圖5,激光能量<50%時(shí),同位素比值整體偏正;激光能量>50%時(shí),同位素比值趨于恒定。有研究表明[7],激光能量密度需高于樣品的剝蝕閾值,能量過(guò)低會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的元素分餾效應(yīng)。由圖5可推測(cè),激光能量<50%時(shí),對(duì)輕質(zhì)量的同位素產(chǎn)生質(zhì)量歧視;當(dāng)激光能量>50%時(shí),方可對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行完整剝離,獲得穩(wěn)定的、能夠反應(yīng)基體真實(shí)同位素比值的樣品。研究結(jié)果也表明,激光能量密度亦影響氣溶膠顆粒尺寸,低能量激光傾向形成小尺寸顆粒氣溶膠,利于傳輸和離子化。綜合考慮尺寸因素,規(guī)避分餾效應(yīng),選擇在激光能量60%的輸出條件下對(duì)樣品進(jìn)行剝蝕。

    值得注意的是,文獻(xiàn)[8]指出激光剝蝕光斑大小同樣會(huì)影響元素的分餾效應(yīng),激光光斑越小,分餾因子越大,可能與激光剝蝕頻率和剝蝕直徑共同影響的剝蝕坑形狀有關(guān)。本研究結(jié)果表明,激光光斑大小對(duì)穩(wěn)定同位素比值存在顯著影響,但在恒定光斑尺寸下,同位素比值恒定,可以認(rèn)為此影響可作為整套設(shè)備的系統(tǒng)誤差通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行校正。

    3.3 標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)試

    在激光能量60%、光斑55 μm、冷阱捕集50 s、剝蝕線(xiàn)性長(zhǎng)度300 μm條件下,對(duì)IAEA-CH-7和壓片后的IAEA 600和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)Urea重復(fù)測(cè)試,剝蝕痕跡電鏡圖見(jiàn)圖4,平行樣剝蝕尺寸、形狀和深度基本可控。3種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)平均峰面積分別為6.7、10.7 和3.7 V s,標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.15‰、0.07‰和0.18‰,精度滿(mǎn)足測(cè)試要求。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)采用元素分析-同位素質(zhì)譜測(cè)試(Element analyzer-isotope ratio mass spectrometry,EA-IRMS),結(jié)果見(jiàn)表1和圖6。分別以?xún)煞N測(cè)試結(jié)果與真值作圖,3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品以EA-IRMS測(cè)試線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R2=1,而LA-IRMS方法測(cè)試的樣品用量?jī)H為元素分析方法樣品用量的萬(wàn)分之一,線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R2=0.992。

    另外,對(duì)IAEA 600在同一個(gè)剝蝕痕跡槽內(nèi)重復(fù)剝蝕,以檢驗(yàn)上一次剝蝕是否存在質(zhì)量歧視,或是否導(dǎo)致基質(zhì)同位素比值發(fā)生變化。選擇兩個(gè)點(diǎn)位,在每個(gè)點(diǎn)位連續(xù)重復(fù)剝蝕5次,均值分別為27.69±0.16和27.78±0.19,在誤差范圍內(nèi),可認(rèn)為剝蝕過(guò)程并未產(chǎn)生同位素分餾。

    3.4 同位素標(biāo)記的水稻葉片微區(qū)測(cè)試

    選擇以13C標(biāo)記的CO2培養(yǎng)的水稻葉片尖部,進(jìn)行微區(qū)碳同位素分布測(cè)試(圖4和圖7)。在1 mm寬的葉尖橫面,從右到左,依次間隔剝蝕取樣8次,平行兩次。剝蝕后的葉片電鏡圖和碳同位素測(cè)試結(jié)果如圖7所示。每個(gè)取樣點(diǎn)為55 μm直徑的圓孔,同一葉片在相同培養(yǎng)條件下,不同區(qū)域?qū)?3C標(biāo)記的CO2吸收效率不同,呈現(xiàn)中間和邊緣貧化、兩端富集的趨勢(shì)。水稻葉片中心葉脈和葉片邊緣處對(duì)標(biāo)記的13CO2吸收相對(duì)較弱,而兩邊葉肉部分對(duì)13CO2 吸收較強(qiáng),即葉肉部分光合作用和呼吸作用強(qiáng)于葉脈和葉緣。研究表明[9],植物13CO2短期動(dòng)態(tài)存在同種植物不同器官的差異,植物葉片呼吸釋放CO2碳同位素組成有較大的差異,變化幅度大于樹(shù)干/莖呼吸釋放。本研究在葉肉,葉脈和葉緣微觀尺度上研究植物呼吸釋放CO2的行為差異,此差異細(xì)節(jié)有望為環(huán)境生態(tài)研究人員提供關(guān)于植物呼吸、營(yíng)養(yǎng)吸收,光合作用等生態(tài)過(guò)程更詳細(xì)的信息,使植物生長(zhǎng)過(guò)程可視化。

    4 結(jié) 論

    將激光剝蝕取樣技術(shù)與穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用,用于微區(qū)有機(jī)碳同位素測(cè)試。自行研制了激光剝蝕與同位素連用接口,定制了多重載氣過(guò)濾裝置和低流速微型樣品池,以微量高溫反應(yīng)爐將剝蝕出的氣溶膠在線(xiàn)轉(zhuǎn)化為CO2,并采用雙冷阱對(duì)轉(zhuǎn)化后的CO2進(jìn)行富集和聚焦。該套設(shè)備獲得了超低空白信號(hào),并有效避免了激光剝蝕技術(shù)在傳輸和離子化過(guò)程產(chǎn)生的分餾。分析樣品量?jī)H需數(shù)十納克,為傳統(tǒng)元素分析同位素質(zhì)譜分析方法樣品量的萬(wàn)分之一,而測(cè)試精度相近。對(duì)13C標(biāo)記的水稻葉片尖進(jìn)行測(cè)試,結(jié)果表明,葉緣、葉脈對(duì)CO2交換速率低于葉肉區(qū)域。激光剝蝕取樣與穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)能夠原位、在線(xiàn)獲得動(dòng)植物等生態(tài)樣品碳同位素空間分布信息,分辨率低至50 μm,在環(huán)境、農(nóng)林、生態(tài)學(xué)等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。

    References

    1 CHEN Jin-Zhong,ZHENG Jie,LIANG Jun-Lu,SU Hong-Xin,LI Guang,WEI Yan-Hong. Spectroscopy and Spectral Analysis,2009,29(10): 2843-2847

    陳金忠,鄭 杰,梁軍錄,蘇紅新,李 光,魏艷紅. 光譜學(xué)與光譜分析,2009,29(10): 2843-2847

    2 Moran J J,Newburn M K,Alexander M L,SamsR L,Kelly J F,Kreuzer H W. Rapid Commun. Mass Spectrom.,2011,25(9): 1282-1290

    3 Moran J J,Doll C G,Bernstein H C,Renslow R S,Cory A B,Hutchison J R,Lindemann S R,F(xiàn)redrickson J K. Environ. Microbiol. Rep.,2014,6(6): 786-791

    4 Denis E H,Ilhardt P D,Tucker A E,Huggett N L,Rosnow J J,Moran J J. J. Plant Nutr. Soil Sci.,2019,182,401-410

    5 van Roij L,Sluijs A,Laks J J,Reichart G J. Rapid Commun. Mass Spectrom.,2017,31(1): 47-58

    6 Schilder J,VanRoij L,Reichart G,Sluijs A,Heiri O. Quat. Sci. Rev., 2018,189: 127-133

    7 Rodionov A,Lehndorff E,Stremtan C C,Brand W A,Knigshoven H,Amelung W. Anal. Chem.,2019,91 (9): 6225-6232

    8 Jeong S H,Borisov O V,Yoo J H,Mao X L,Russo R E. Anal. Chem.,1999,71(22): 5123-5130

    9 Werner C,Gessler A. Biogeosciences, 2011,8(9): 2437-2459

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