崔雨明

（盤錦檢驗(yàn)檢測(cè)中心（盤錦市疾病預(yù)防控制中心） 遼寧盤錦 124010）

1 前言

食品作為人類生活的物質(zhì)基礎(chǔ)，與人們的身體健康息息相關(guān)。因此，食品安全至關(guān)重要。微生物是影響食品安全的主要因素，本文對(duì)快速測(cè)試片法在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行分析，為食品微生物檢測(cè)探究更為有效的方法，以期保證食品衛(wèi)生的安全。

2 方法與結(jié)果

2.1 傳統(tǒng)檢測(cè)方法

篩選白色、無毒、中速、密度均勻、吸附力合格的濾紙，將濾紙裁剪成合適的尺寸。將滅菌氯化三苯四氮唑（TIC）加入到無菌培養(yǎng)基后，將無菌濾紙浸入其中，根據(jù)需要控制濾紙的培養(yǎng)基吸附量，在適宜的溫度下干燥，分裝于已滅菌的聚丙烯塑料口袋內(nèi)，密封備用。TIC是氧化還原指示劑，接受氫后可形成非水溶性的紅色三苯甲脂。在濾紙上形成紅色點(diǎn)狀物出現(xiàn)，對(duì)紅點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)，即得細(xì)菌總數(shù)。

2.2 快速測(cè)試片檢測(cè)法

檢驗(yàn)前需要做好準(zhǔn)備工作，合理選擇快速測(cè)試片進(jìn)行食品微生物檢驗(yàn)工作。測(cè)試片可以采用培養(yǎng)基系統(tǒng)和冷水可溶性凝膠進(jìn)行制備，并在同時(shí)準(zhǔn)備好指示劑。在進(jìn)行菌落總數(shù)測(cè)試時(shí)，必須使用白色無毒、密度均勻、中速且吸附力合格的測(cè)試片。除此之外，還要合理裁剪濾紙，大小控制在1～5 cm左右。在無菌培養(yǎng)基中加入2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）滅菌，再將無菌濾紙緩慢浸入；濾紙浸入后，對(duì)濾紙吸附量及干燥溫度進(jìn)行合理控制；最后，用滅菌聚丙烯塑料袋進(jìn)行分裝，密封處理。使用時(shí)，需要在紙片上方加入1 mL待測(cè)液，經(jīng)壓平處理后，放置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～20 h，然后計(jì)數(shù)。由于濾紙間隙較大，纖維之間會(huì)存在菌體，此變化肉眼不可見，同實(shí)際菌數(shù)進(jìn)行比較后，結(jié)果顯示，菌落程度減小。檢測(cè)試片使用后要進(jìn)行焚燒處理，不可重復(fù)使用。

在食物微生物檢測(cè)中，以對(duì)大腸桿菌、大腸菌群和金黃色葡萄球菌的檢測(cè)作為普遍檢測(cè)技術(shù)。傳統(tǒng)方法需要較多人力、物力，且培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)，而選擇大腸桿菌計(jì)數(shù)紙片、大腸菌群和金黃色葡萄球菌測(cè)試片進(jìn)行檢測(cè)，培養(yǎng)時(shí)間在24～48 h[3]。通過測(cè)試，可對(duì)大腸桿菌及大腸菌群數(shù)進(jìn)行確定。

2.3 結(jié)果

傳統(tǒng)檢測(cè)法一般需要較長(zhǎng)的時(shí)間，且需要在相對(duì)穩(wěn)定的溫度下進(jìn)行，但是采用測(cè)試片法，可以在短時(shí)間內(nèi)無固定溫度條件下進(jìn)行操作，提升了檢測(cè)效率，結(jié)果詳見表1。

表1 食品微生物檢測(cè)時(shí)間分析（單位：h)

2.4 討論

通過以上食品微生物的檢測(cè)結(jié)果可以看出，快速測(cè)試片法有檢測(cè)率高、培養(yǎng)時(shí)間短、操作較為簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。但是快速測(cè)試片法也存在一定的問題，仍需不斷進(jìn)行探索，以實(shí)現(xiàn)快速測(cè)試片法的廣泛應(yīng)用。

3 快速測(cè)試片在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用

3.1 以濾紙為基礎(chǔ)的測(cè)試片

大腸菌群、大腸桿菌紙片熒光法中所用的測(cè)試片由上海醫(yī)科大學(xué)研制。此方法利用細(xì)菌會(huì)產(chǎn)生代謝酶或代謝產(chǎn)物這一特點(diǎn)，建立了一種酶底物反應(yīng)法。通過檢測(cè)大腸菌群、大腸桿菌產(chǎn)生的相關(guān)酶的活性，達(dá)到檢測(cè)目的。目前，2種測(cè)試可以分別檢測(cè)大腸菌群和大腸肝菌，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后可以在熒光燈下得到相應(yīng)的結(jié)果，方法用時(shí)短、操作簡(jiǎn)單，被廣泛應(yīng)用于我國(guó)的食品微生物檢測(cè)中。

3.2以Petrifilm作為基礎(chǔ)的測(cè)試片

Petrifilm測(cè)試片主要由上、下2層薄膜組成，下層的聚乙烯薄膜上有網(wǎng)格，覆蓋在培養(yǎng)基上，上層是聚丙烯薄膜。微生物生長(zhǎng)以及生化試驗(yàn)所需的營(yíng)養(yǎng)試劑，由冷水可溶性凝膠劑附著在上、下2層膜上。Petrifilm紙片已經(jīng)通過國(guó)際認(rèn)可，我國(guó)已經(jīng)有400多個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用此測(cè)試片進(jìn)行微生物檢測(cè)，主要研究對(duì)象為大腸菌群、金黃色葡萄球菌。此檢測(cè)片的檢測(cè)率較高，檢測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確有效，被廣泛運(yùn)用于食品微生物的檢測(cè)中。

4 結(jié)語

快速測(cè)試片可測(cè)量少量樣品，整個(gè)操作過程較為簡(jiǎn)單，便于消毒保存和運(yùn)輸攜帶?？焖贉y(cè)試片的價(jià)格較低，不會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染，在減少工作量的同時(shí)降低了成本，適用于我國(guó)食品實(shí)驗(yàn)室微生物的檢測(cè)[4]。

另外，快速測(cè)試片法可以在取樣的同時(shí)進(jìn)行接種，在一定程度上避免了細(xì)菌繁殖造成的數(shù)量增多現(xiàn)象，可以反映樣品的真實(shí)細(xì)菌數(shù)。快速檢測(cè)法不須特定溫度，檢測(cè)前也無須進(jìn)行大量的準(zhǔn)備工作，縮短了試驗(yàn)過程，提高了測(cè)試效率，能及時(shí)將檢測(cè)結(jié)果反饋給食品企業(yè)。

目前，我國(guó)對(duì)快速測(cè)試片法的研究已有部分成效，但快速測(cè)試片法仍存在許多問題。例如，濾紙濾孔過大，雙面都有菌落生長(zhǎng)，無法計(jì)數(shù)，且濾紙保水性較差，在檢驗(yàn)過程中，不能保持合適的濕度，導(dǎo)致菌體的生長(zhǎng)較差；另外，濾紙檢驗(yàn)卡上營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分布不均勻，樣品中的細(xì)菌不能迅速擴(kuò)散，進(jìn)而導(dǎo)致菌體生長(zhǎng)分布不均勻；快速測(cè)試片的顯色指示劑系統(tǒng)較為單一，不能對(duì)細(xì)菌、真菌進(jìn)行有區(qū)別的計(jì)數(shù)，因此，很難全面推廣；Petrifilm測(cè)試片上覆蓋有一層薄膜，如果細(xì)菌產(chǎn)氣、產(chǎn)粘液較多，會(huì)出現(xiàn)菌落的擴(kuò)散和融合，也會(huì)使最終結(jié)果存在一定的誤差[5]。

雖然測(cè)試片已經(jīng)在我國(guó)食品微生物的檢測(cè)中有了一定的發(fā)展，但其僅局限于幾個(gè)單一的指標(biāo)檢測(cè)，因此，需要開發(fā)更為優(yōu)質(zhì)的載體以及更高效的顯色物質(zhì)，做進(jìn)一步研究，為食品微生物的檢測(cè)提供不同類型的測(cè)試片。相關(guān)人員應(yīng)該重視快速測(cè)試片在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用，研究更多新型的高分子聚合物，彌補(bǔ)現(xiàn)有方法的不足，推出更為有效、準(zhǔn)確的優(yōu)質(zhì)快速測(cè)試片，讓快速測(cè)試片法充分發(fā)揮其作用，提高食品微生物的檢測(cè)質(zhì)量，從而保證食品衛(wèi)生安全。