• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    桑輪紋病病斑內(nèi)部及周邊真菌群落結(jié)構(gòu)研究

    2020-06-22 02:35:46李星月尹詩琳張建華
    西南農(nóng)業(yè)學(xué)報 2020年4期
    關(guān)鍵詞:輪紋病病斑病原

    王 謝,李星月,尹詩琳,3,唐 甜,張建華*

    (1. 四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所,四川 成都 610066; 2. 四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所,四川 成都 610066; 3. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院,四川 成都 611130)

    【研究意義】桑輪紋病又稱桑輪斑病,是一種桑樹真菌病害,長期影響著亞洲諸國的蠶桑生產(chǎn)?!厩叭搜芯窟M展】1980年,該病被Takahashi等[1]在日本首次報道,稱為zonate leaf spot of mulberry ,并指出該病的病原菌為“Gonatophragmiummori”。后Takahashi等[2]又調(diào)查指出其寄主涉及16科24屬 28植物種,完整描述了該病原菌的整個生活史階段。1999年,該病被Maji等[3]在印度發(fā)現(xiàn) ,稱為brown ring leaf spot disease of mulberry,并指出其病原菌為Cephalosporiumstrictum。我國從20世紀80年代開始對該病進行報道研究,1994年首次正式報道了廣西百色蠶區(qū)發(fā)生的桑輪紋病災(zāi)情[4],2007年江西修水縣爆發(fā)了桑輪紋病并呈較快的蔓延趨勢[5],2011年浙江淳安縣也報道了一起特大桑輪斑病災(zāi)害事件[6],2012年云南省昭通地區(qū)也首次報道了該地區(qū)出現(xiàn)的桑輪紋病[7]。2016年,筆者在四川眉山地區(qū)調(diào)研時發(fā)現(xiàn)桑輪紋病是當?shù)孛磕瓯匕l(fā)生的一種病害,在隨后的兩年里,又在四川綿陽地區(qū)、四川仁壽地區(qū)、重慶潼南地區(qū)等地發(fā)現(xiàn)大面積桑樹輪紋病病害?!颈狙芯壳腥朦c】雖然桑輪紋病的傳統(tǒng)植物病理學(xué)研究已經(jīng)有了一定的基礎(chǔ),但其具體的宿主-環(huán)境微生物-病原菌之間的關(guān)系研究尚處于空白?!緮M解決的關(guān)鍵問題】因此,本研究試圖利用高通量測序分析技術(shù)探索桑輪紋病病斑內(nèi)部及周邊的真菌群落結(jié)構(gòu),為未來進一步揭示桑輪紋病的致病機理和構(gòu)建其綠色防治技術(shù)體系提供理論基礎(chǔ)和數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 樣品的前處理和采集

    2017年10月31日,在青神桑輪紋病發(fā)病桑園中隨機選取10株發(fā)病桑樹,每株樹上取10片成熟的具有桑輪紋病病斑的桑葉,用95 %的乙醇將葉片表面消毒2次,再用無菌水沖洗2次,并用無菌濾紙拭干。然后,根據(jù)病斑在葉片上的空間位置劃分出病斑的核心區(qū)(簡稱H區(qū))、病斑的邊緣區(qū)(簡稱L區(qū))和病斑周圍的未發(fā)病區(qū)(簡稱N區(qū))3個特定區(qū)域(圖1)。其中,H區(qū)是指從外向內(nèi)第2圈層及其以內(nèi)的所有輪狀圈層所涉及的區(qū)域,顏色通常表現(xiàn)為枯黃色;L區(qū)是指最外層輪狀圈層(該層外半徑r1-內(nèi)半徑r0=距離a,顏色通常為棕色)及其相連的外半徑為(r1+ 1.5×a)的輪狀圈層(顏色通常為綠色)。N區(qū)是指與L區(qū)外緣相鄰的外半徑為(r1+

    H: 病斑的核心區(qū); L: 病斑的邊緣區(qū); N: 病斑周圍的未發(fā)病區(qū); a: 距離H: Core area of lesion; L: Marginal area of lesion; N: Peripheral area of lesion; a: Distance圖1 桑輪紋病病斑特定取樣位置的設(shè)定Fig.1 Setting schematic of specific sampling location for mulberry ring sheath lesions

    4.5×a)的輪狀圈層,顏色通常為綠色。接著,每片葉子取1個病斑,并在超凈工作臺下用手術(shù)剪刀分別剪下H區(qū)、L區(qū)和N區(qū)。最后,按照病斑的位置將剪下的H區(qū)、L區(qū)和N區(qū)分別混合為3個不同的待測樣品,用病斑位置的簡稱分別將樣品命名為H、L、N,并將其放入4 ℃冰箱中待測。

    1.2 高通量宏基因組微生物測序的樣品處理

    參照OMEGA試劑盒E.Z.N.ATM Mag-Bind Soil DNA Kit的使用說明書進行DNA提取,提取DNA后進行DNA完整性檢測。利用Qubit3.0 DNA檢測試劑盒對基因組DNA精確定量,以確定PCR反應(yīng)應(yīng)加入的DNA量。PCR所用的引物為已經(jīng)融合了Miseq測序平臺的ITS1-2通用引物。ITS1F引物為CCCTACACGACGCTCTTCCGATCTN (barcode) CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA,ITS2R引物為GTGACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCAGCTGCGTTCTTCATCGATGC。PCR結(jié)束后,PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖電泳檢測。真菌PCR產(chǎn)物和其他擴增片段小于400bp的PCR產(chǎn)物,選用0.8倍的磁珠處理。利用Qubit3.0 DNA檢測試劑盒對回收的DNA精確定量,以方便按照1∶1的等量混合后測序。等量混合時,每個樣品DNA量取10 ng,最終上機測序濃度為20 pmol。該環(huán)節(jié)委托生工生物工程(上海)股份有限公司完成。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    基于對reads數(shù)據(jù)的拼接、過濾、去嵌合及非特異性擴增序列的數(shù)據(jù)前處理,分別進行OTU聚類分析、Alpha多樣性分析、物種分類分析、多維度分析和物種分類樹分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 測序序列長度分析

    質(zhì)量控制后,平均剩余序列52 205條,平均序列長度229.22 bp(表1)。

    2.2 桑輪紋病病斑及周邊內(nèi)真菌的OTUs數(shù)

    各樣品文庫的覆蓋率為0.99,表明樣本中序列沒有被測出的概率越低,本次測序結(jié)果可代表樣本的真實情況。在97 %的相似水平下,進行生物信息統(tǒng)計分析,共計比對1822個OTUs。其中,H區(qū)有604個OTUs,L區(qū)有499個OTUs,N區(qū)有974個OTUs。由圖2可知,H、L和N區(qū)3個區(qū)域內(nèi)的真菌存在明顯差異,其共有OTUs較少,而多為獨有的OTUs。

    2.3 桑輪紋病病斑內(nèi)部及周邊的真菌群落結(jié)構(gòu)

    經(jīng)過鑒定發(fā)現(xiàn),除未鑒定的物種(圖3中的unclassified)外,在種水平上H區(qū)中相對豐度排名前5的真菌分別是Gonatophragmiumtriuniae、Myrotheciumroridum、Bannoahahajimensis、Incertaesedissp.和Hannaellaoryzae,其相對豐度分別為96.25 %、1.04 %、0.39 %、0.37 %和0.27 %;L區(qū)中相對豐度排名前5的真菌分別是Gonatophragmiumtriuniae、Myrotheciumroridum、Bannoahahajimensis、Strelitzianaalbiziae和Cercosporaapii,其相對豐度分別為96.95 %、0.48 %、0.13 %、0.13 %和0.09 %;N區(qū)中相對豐度排名前5的真菌分別是Gonatophragmiumtriuniae、Strelitzianaalbiziae、Chaetothyriaceaesp.、Myrotheciumroridum和Ascomycotasp.,其相對豐度分別為31.29 %、13.24 %、6.99 %、6.84 %和6.39 %。

    表1 測序數(shù)據(jù)處理后的結(jié)果統(tǒng)計表

    圖2 桑輪紋病病斑特定取樣位置共有的和獨有的OTU數(shù)目Fig.2 Number of common and unique OTUs at specific sampling locations of mulberry ring sheath patches

    2.4 桑輪紋病病斑內(nèi)部及周邊的真菌多樣性

    H、L和N區(qū)的Shannon多樣性指數(shù)值分別為0.36、0.30和3.56,表明桑葉上病斑區(qū)內(nèi)生真菌多樣性低于周邊未發(fā)病區(qū)。

    2.5 桑輪紋病病斑內(nèi)部及周邊的真菌之間相關(guān)性

    將除未鑒定的物種(圖3中的unclassified)外,H、L和N區(qū)排名前5的真菌的相對豐度進行泊松相關(guān)性分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):病斑內(nèi)G.triuniae與B.hahajimensis、Incertaesedissp.、H.oryzae、S.albiziae、Chaetothyriaceaesp.、C.apii和Ascomycotasp.呈顯著的負相關(guān)關(guān)系,其相關(guān)系數(shù)分別為-0.97、-0.99、-0.83、-1.00、-1.00、-1.00和-1.00。而其他真菌之間呈現(xiàn)顯著的正相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)皆大于0.82。這表明桑輪紋病病斑的內(nèi)部及周邊真菌G.triuniae與其他真菌存在著激烈的競爭。

    3 討 論

    3.1 桑輪紋病的病原真菌有待進一步確定

    圖3 桑輪紋病病斑特定取樣位置的種水平上內(nèi)生真菌分布Fig.3 Endophytic fungi distribution at species level at specific sampling location of mulberry ring sheath disease

    本研究中病斑H和L區(qū)相對豐度最大的真菌為G.triunia,而報道的桑輪紋病的病原真菌為G.mori[1]。鑒于發(fā)病樣品中檢測到的最大相對豐度真菌與傳統(tǒng)描述的病原真菌作為同屬真菌,且測得的病原真菌序列與文庫中G.triunia的序列比對相似度為100 %,在此,可初步認為G.triunia為桑輪紋病的病原真菌。但必須注意的是,由于目前比對文庫中沒有G.mori的序列記載,加之高通量測序原理上存在不完整性,G.triunia與G.mori是否為同一個種,及兩者序列之間的差異到底有多大,這是尚未可知的。在尚未明確兩者是同一菌種的前提下,未來還需要進一步分離桑輪紋病病原真菌并進行遺傳鑒定。

    3.2 桑輪紋病病斑的不斷擴大與病原真菌的相對豐度密切相關(guān)

    桑輪紋病病斑的不斷擴大與病原真菌的相對豐度密切相關(guān)。在桑輪紋病病斑周圍N區(qū)中依然存在著31.29 %相對豐度的病原真菌(G.triunia),這表明病斑的不斷增大與葉片內(nèi)病原真菌相對豐度的增加密切相關(guān),且30 %的病原真菌相對豐度絕對不是其出現(xiàn)病斑的環(huán)境閾值。對比出現(xiàn)病斑的地方(L和H區(qū)),病原真菌的相對豐度都已經(jīng)達到了96 %以上。

    3.3 桑輪紋病病斑內(nèi)病原真菌種群優(yōu)勢的建立主要依賴于植物毒素

    病原真菌(G.triunia)在桑葉內(nèi)表現(xiàn)出明顯的競爭優(yōu)勢。Kinjo 等[8]于1987年研究發(fā)現(xiàn)桑輪紋病病原真菌可以釋放植物毒素,并對這些毒素的結(jié)構(gòu)進行了研究。這表明桑輪紋病病斑內(nèi)病原真菌種群優(yōu)勢的建立主要依賴于其釋放的植物毒素在真菌種群拮抗競爭過程中所起到的作用,所以它與其它主要真菌之間都呈現(xiàn)顯著的負相關(guān)關(guān)系。

    3.4 桑輪紋病病斑中心穿孔可能與Myrothecium roridum有關(guān)

    桑樹輪紋病發(fā)展到后期,中心會出現(xiàn)穿孔的現(xiàn)象。反觀在桑輪紋病病斑H區(qū),真菌M.roridum的相對豐度比L區(qū)高;因此,研究猜測在真菌M.roridum會在病原真菌(G.triunia)利用完葉內(nèi)生長資源后對葉片進行二次資源利用。經(jīng)觀察,H 區(qū)組病斑類似枯葉,微生物可利用的主要部分為葉表皮的角質(zhì)層。這表明了真菌M.roridum在進行二次資源再利用時,需要對角質(zhì)蛋白具有明顯的可利用性。經(jīng)查,真菌M.roridum為桑樹漆斑病的病原菌[9-11],其習(xí)性就是喜角質(zhì)蛋白[12]。真菌M.roridum的這一習(xí)性基本可以回答如此假設(shè),即H區(qū)中心出現(xiàn)的穿孔是由M.roridum分解完葉表皮的角質(zhì)層后所留下的。雖然這需要更多的試驗進行進一步的論證,但這也暗示了桑輪紋病病斑形成機理的復(fù)雜性,從病原菌的附著到病斑的出現(xiàn)、再到擴大和穿孔,整個過程涉及多種真菌的作用,這將為揭示桑輪紋病致病機理和研究綠色防控技術(shù)提供重要的參考依據(jù)。

    4 結(jié) 論

    在種水平上桑輪紋病發(fā)病葉片的病斑核心區(qū)(H區(qū))、病斑邊緣區(qū)(L區(qū))和病斑周圍的未發(fā)病區(qū)(N區(qū))的真菌G.triuniae相對豐度排名皆是最高,分別為96.25 %、96.95 %和31.29 %。真菌M.roridum在H區(qū)的相對豐度為1.04 %,是L區(qū)的相對豐度2.17倍。該結(jié)果揭示了桑輪紋病病斑形成過程是復(fù)雜的,病斑的出現(xiàn)、擴大和穿孔是多種真菌共同作用的結(jié)果。此外,研究結(jié)果還引出了桑輪紋病病原菌G.mori與數(shù)據(jù)庫100 %比對的真菌G.triuniae是否為同一種病原微生物需要進一步確定的科學(xué)問題。

    猜你喜歡
    輪紋病病斑病原
    長絲鱸潰爛癥病原分離鑒定和耐藥性分析
    蒼耳不同溶劑提取物對蘋果輪紋病菌的抑制效果
    河北果樹(2020年4期)2020-11-26 06:04:50
    3種中藥提取物對蘋果輪紋病菌的室內(nèi)抑制作用
    河北果樹(2020年4期)2020-11-26 06:04:38
    蘋果輪紋病防治技術(shù)
    河北果樹(2020年2期)2020-01-09 11:15:07
    改進自適應(yīng)分水嶺方法分割棉花葉部粘連病斑
    一種桑輪紋病病葉發(fā)病程度的評價指數(shù)
    9種藥劑防治山核桃干腐病試驗研究
    豬繁殖與呼吸綜合征病原流行病學(xué)調(diào)查
    鵝病毒性傳染病病原的采集和分離
    食源性病原微生物的危害
    kizo精华| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲国产精品专区欧美| 日韩伦理黄色片| 国产熟女午夜一区二区三区 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 91精品国产九色| 日韩视频在线欧美| 国产男女超爽视频在线观看| 成人手机av| 国产男人的电影天堂91| 国产精品熟女久久久久浪| 如何舔出高潮| 欧美日本中文国产一区发布| 五月伊人婷婷丁香| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久精品久久久久久久性| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美精品亚洲一区二区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久国产精品大桥未久av| 最黄视频免费看| 青青草视频在线视频观看| 少妇 在线观看| 欧美97在线视频| 国产有黄有色有爽视频| 桃花免费在线播放| 春色校园在线视频观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 99视频精品全部免费 在线| 最新中文字幕久久久久| 美女福利国产在线| 婷婷色av中文字幕| 久久久久久久久久成人| 国产黄频视频在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 国产精品一二三区在线看| av专区在线播放| 寂寞人妻少妇视频99o| 日韩大片免费观看网站| 免费观看的影片在线观看| 亚洲国产精品国产精品| av.在线天堂| 色婷婷av一区二区三区视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 乱人伦中国视频| 久久久久久久久久久免费av| 99热网站在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| tube8黄色片| 99视频精品全部免费 在线| 精品一区二区免费观看| 一级毛片我不卡| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产一区二区三区综合在线观看 | 97在线视频观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 午夜福利网站1000一区二区三区| 精品亚洲成国产av| 99久久人妻综合| 美女中出高潮动态图| 尾随美女入室| 插逼视频在线观看| 国产成人精品无人区| 欧美精品一区二区免费开放| 日本vs欧美在线观看视频| 日韩大片免费观看网站| 精品酒店卫生间| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产精品一区二区在线观看99| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 又大又黄又爽视频免费| 成人国语在线视频| 18禁在线播放成人免费| 亚洲av免费高清在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 97超碰精品成人国产| 精品视频人人做人人爽| 亚洲中文av在线| 久久久欧美国产精品| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 女的被弄到高潮叫床怎么办| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 免费人妻精品一区二区三区视频| 日日撸夜夜添| 成人漫画全彩无遮挡| 成人无遮挡网站| 国产精品国产三级国产专区5o| 极品少妇高潮喷水抽搐| 免费看不卡的av| 免费高清在线观看日韩| 狂野欧美激情性bbbbbb| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产爽快片一区二区三区| 精品人妻在线不人妻| 亚洲av二区三区四区| 午夜日本视频在线| 只有这里有精品99| av线在线观看网站| 丝袜喷水一区| 成年女人在线观看亚洲视频| kizo精华| 看十八女毛片水多多多| 免费大片黄手机在线观看| 大陆偷拍与自拍| 色网站视频免费| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产精品国产三级专区第一集| 三级国产精品欧美在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久精品国产a三级三级三级| 三上悠亚av全集在线观看| 午夜影院在线不卡| 国产精品国产av在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 91精品三级在线观看| 制服丝袜香蕉在线| 看非洲黑人一级黄片| 国产精品免费大片| 日韩欧美精品免费久久| 简卡轻食公司| 亚洲国产精品国产精品| 热99久久久久精品小说推荐| 99视频精品全部免费 在线| 大香蕉久久成人网| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久久青草综合色| 99九九在线精品视频| 久久精品国产亚洲网站| 天天影视国产精品| 五月开心婷婷网| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品卡一卡二卡四卡免费| 在线免费观看不下载黄p国产| av黄色大香蕉| 十八禁网站网址无遮挡| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 五月玫瑰六月丁香| 日日摸夜夜添夜夜爱| 韩国av在线不卡| 欧美一级a爱片免费观看看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲国产精品一区三区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 五月天丁香电影| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 在线观看国产h片| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲国产精品国产精品| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产精品久久久久久av不卡| 高清欧美精品videossex| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 两个人免费观看高清视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产精品无大码| 国产精品人妻久久久影院| 黄色怎么调成土黄色| 五月玫瑰六月丁香| 视频在线观看一区二区三区| 26uuu在线亚洲综合色| 国产亚洲最大av| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲五月色婷婷综合| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲成人av在线免费| 日韩人妻高清精品专区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 精品少妇久久久久久888优播| 国产乱来视频区| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产免费一级a男人的天堂| 久久久久久久久大av| 久久 成人 亚洲| 美女视频免费永久观看网站| a级片在线免费高清观看视频| 中文天堂在线官网| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 午夜精品国产一区二区电影| 国产精品99久久久久久久久| 色婷婷av一区二区三区视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产综合精华液| 人妻人人澡人人爽人人| 中文字幕免费在线视频6| 99热6这里只有精品| 欧美精品亚洲一区二区| 黄色欧美视频在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 97精品久久久久久久久久精品| 如何舔出高潮| 18+在线观看网站| 国产高清不卡午夜福利| 日本午夜av视频| 久久久国产一区二区| 2018国产大陆天天弄谢| 交换朋友夫妻互换小说| 草草在线视频免费看| 热re99久久国产66热| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 青春草视频在线免费观看| 久久久国产精品麻豆| 91久久精品电影网| 亚洲国产av影院在线观看| 国产视频首页在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲av二区三区四区| 一区二区av电影网| 久久韩国三级中文字幕| 欧美成人午夜免费资源| 国产男女超爽视频在线观看| 精品久久久久久久久亚洲| 观看美女的网站| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产爽快片一区二区三区| 看免费成人av毛片| 视频在线观看一区二区三区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产精品久久久久久精品古装| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 日日啪夜夜爽| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 日韩三级伦理在线观看| 亚洲四区av| 久久狼人影院| 男女免费视频国产| 国产亚洲欧美精品永久| 精品人妻熟女av久视频| 另类亚洲欧美激情| 亚洲av国产av综合av卡| 黑人欧美特级aaaaaa片| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产一区有黄有色的免费视频| 99久久精品一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| av福利片在线| 精品久久国产蜜桃| 日韩av免费高清视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产亚洲精品久久久com| 久久久久久久久久久丰满| 久久久久久久久久久免费av| 制服诱惑二区| 久久久久人妻精品一区果冻| 欧美丝袜亚洲另类| 91精品三级在线观看| 精品久久久久久久久亚洲| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品不卡视频一区二区| 哪个播放器可以免费观看大片| 午夜福利视频精品| 香蕉精品网在线| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲av日韩在线播放| 少妇丰满av| 日本av手机在线免费观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产淫语在线视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 女人精品久久久久毛片| 国精品久久久久久国模美| 欧美成人午夜免费资源| 99精国产麻豆久久婷婷| 大码成人一级视频| 亚洲精品第二区| 午夜免费男女啪啪视频观看| 波野结衣二区三区在线| 国产精品人妻久久久影院| 97精品久久久久久久久久精品| 国产高清三级在线| 久久99精品国语久久久| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产色爽女视频免费观看| 赤兔流量卡办理| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲精品久久午夜乱码| 伊人久久国产一区二区| 岛国毛片在线播放| 看非洲黑人一级黄片| 在线观看国产h片| 午夜91福利影院| 日韩视频在线欧美| 人体艺术视频欧美日本| 日韩三级伦理在线观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产伦理片在线播放av一区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 一个人免费看片子| 大话2 男鬼变身卡| 91久久精品国产一区二区三区| 国产乱来视频区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 一本色道久久久久久精品综合| 我要看黄色一级片免费的| 18+在线观看网站| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 美女福利国产在线| 久久久国产欧美日韩av| 欧美xxⅹ黑人| 一级a做视频免费观看| 久久青草综合色| 亚洲精品自拍成人| 成人国语在线视频| a 毛片基地| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 亚洲天堂av无毛| 午夜久久久在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 国产 精品1| 晚上一个人看的免费电影| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 2018国产大陆天天弄谢| 免费观看无遮挡的男女| 晚上一个人看的免费电影| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 街头女战士在线观看网站| 亚洲国产精品一区三区| 秋霞在线观看毛片| 青春草视频在线免费观看| 国产av码专区亚洲av| av免费观看日本| 视频中文字幕在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲精品,欧美精品| 18禁在线播放成人免费| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲久久久国产精品| 久久免费观看电影| 欧美精品国产亚洲| 日本欧美国产在线视频| 午夜福利视频在线观看免费| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 一本色道久久久久久精品综合| 国产亚洲精品久久久com| 久久婷婷青草| av网站免费在线观看视频| 国产综合精华液| 内地一区二区视频在线| 久久女婷五月综合色啪小说| 大码成人一级视频| 最近的中文字幕免费完整| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日韩av免费高清视频| 三上悠亚av全集在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久国产亚洲av麻豆专区| 午夜免费观看性视频| 看非洲黑人一级黄片| 精品人妻熟女av久视频| 久久久久久久久久久免费av| 在线观看国产h片| 一个人免费看片子| 91国产中文字幕| 插阴视频在线观看视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产一级毛片在线| 国产高清不卡午夜福利| 久久ye,这里只有精品| 久久精品国产亚洲av天美| 视频在线观看一区二区三区| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲性久久影院| 一边亲一边摸免费视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 大香蕉久久网| 国产成人精品婷婷| 久久久久久人妻| 两个人的视频大全免费| 国产av国产精品国产| 日韩视频在线欧美| 国产黄频视频在线观看| 久久国内精品自在自线图片| 熟女av电影| 中国三级夫妇交换| 蜜桃国产av成人99| 高清午夜精品一区二区三区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品一区二区三卡| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产精品一二三区在线看| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产熟女午夜一区二区三区 | 亚洲无线观看免费| 美女国产视频在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 交换朋友夫妻互换小说| 天堂8中文在线网| 青春草视频在线免费观看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 免费大片黄手机在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲成人一二三区av| 母亲3免费完整高清在线观看 | 日本91视频免费播放| 蜜臀久久99精品久久宅男| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产成人午夜福利电影在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 一本一本综合久久| 午夜免费观看性视频| 一区二区三区精品91| 亚洲精品av麻豆狂野| 丝瓜视频免费看黄片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久青草综合色| 色5月婷婷丁香| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 国精品久久久久久国模美| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲精品aⅴ在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 久久久a久久爽久久v久久| 少妇人妻 视频| 国产精品一二三区在线看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 午夜免费男女啪啪视频观看| 日本wwww免费看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 大香蕉久久网| 久久久精品94久久精品| 老熟女久久久| 亚洲一区二区三区欧美精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 国产精品国产av在线观看| 黑人高潮一二区| 91精品国产九色| 中文天堂在线官网| 日韩免费高清中文字幕av| 看免费成人av毛片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | freevideosex欧美| 插阴视频在线观看视频| 99re6热这里在线精品视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产黄色免费在线视频| 日韩欧美精品免费久久| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 成人国产av品久久久| 欧美人与善性xxx| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲成色77777| 国产成人av激情在线播放 | a级毛片在线看网站| 最近手机中文字幕大全| 久久久久国产网址| 丰满迷人的少妇在线观看| 午夜免费观看性视频| 欧美精品国产亚洲| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 亚洲四区av| 亚洲av中文av极速乱| 飞空精品影院首页| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久久精品免费免费高清| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美最新免费一区二区三区| 国产精品一区www在线观看| 只有这里有精品99| 亚洲国产精品国产精品| 多毛熟女@视频| 亚洲,欧美,日韩| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产免费福利视频在线观看| 日韩一区二区三区影片| 亚洲欧洲国产日韩| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 午夜激情福利司机影院| 观看av在线不卡| 乱码一卡2卡4卡精品| 一级毛片电影观看| 女性生殖器流出的白浆| av女优亚洲男人天堂| 黄片无遮挡物在线观看| 成人二区视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 蜜桃国产av成人99| 日本与韩国留学比较| 欧美日韩av久久| 在线看a的网站| 亚洲成人手机| 久久精品国产亚洲av涩爱| 人人澡人人妻人| 国产精品99久久久久久久久| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 男女无遮挡免费网站观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲精品视频女| 女性被躁到高潮视频| 99国产综合亚洲精品| 91精品伊人久久大香线蕉| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产熟女午夜一区二区三区 | 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 女人久久www免费人成看片| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产在线免费精品| av在线播放精品| 久久鲁丝午夜福利片| 人人澡人人妻人| 熟女av电影| 国产片内射在线| 精品一区二区三卡| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 日本av免费视频播放| 国产一级毛片在线| 国产一区二区在线观看日韩| 午夜精品国产一区二区电影| 视频区图区小说| 丝袜在线中文字幕| 久久精品国产自在天天线| 美女视频免费永久观看网站| 日韩伦理黄色片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 日本免费在线观看一区| 另类精品久久| 亚洲国产欧美在线一区| 看免费成人av毛片| 欧美日韩av久久| 视频区图区小说| av视频免费观看在线观看| 大片免费播放器 马上看| 视频在线观看一区二区三区| 国产乱人偷精品视频| 免费av中文字幕在线| .国产精品久久| 麻豆乱淫一区二区| 美女国产视频在线观看| 亚洲无线观看免费| 亚洲四区av| 69精品国产乱码久久久| 精品一区二区三卡| 国产免费视频播放在线视频| 日韩av不卡免费在线播放| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久午夜综合久久蜜桃| 中文字幕人妻丝袜制服| 丝袜在线中文字幕| 精品久久久久久久久av| 国产成人精品在线电影| 少妇 在线观看| av免费在线看不卡| 在线精品无人区一区二区三| 成年人午夜在线观看视频| 又大又黄又爽视频免费| 久久久欧美国产精品| 性色avwww在线观看| 国产精品无大码| 精品亚洲成国产av| av天堂久久9| 欧美最新免费一区二区三区| 国产成人aa在线观看| 少妇丰满av| 男女无遮挡免费网站观看| 日日爽夜夜爽网站| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲精品乱久久久久久| 高清视频免费观看一区二区| 热99国产精品久久久久久7| 日本av免费视频播放| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 青青草视频在线视频观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲av男天堂| 在线播放无遮挡| 国产在视频线精品| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 免费黄频网站在线观看国产|