4種殺菌劑對遠志根腐病的防治效果

劉 佳，郭淑紅，裴帥帥，羅淑政，田洪嶺

（1.忻州師范學(xué)院生物系，山西忻州034000；2.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟作物研究所，山西汾陽032200）

遠志（Polygala tenuifolia Willd.）屬于遠志科遠志屬多年生草本植物，以根入藥，是我國重要的傳統(tǒng)出口藥材，國家重點保護的三級野生品種。山西省作為遠志主產(chǎn)區(qū)[1]，所產(chǎn)遠志占全國產(chǎn)量的80%以上，以運城、臨汾為主向周邊縣市延伸[2]。運城市新絳縣陽王鎮(zhèn)地處山西省境西南，屬丘陵旱垣地區(qū)，海拔400～450 m，生態(tài)環(huán)境適宜遠志生長，是遠志的道地產(chǎn)區(qū)，全國栽培種源的90%以上遠志由此地提供，是當(dāng)?shù)剞r(nóng)民致富的主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)。但是，近年來，新絳遠志根腐病發(fā)生嚴重，降低了農(nóng)民種植遠志的積極性，使其種植面積開始萎縮，嚴重制約了山西遠志產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前，對遠志根腐病的研究還很少。

本試驗以遠志為主要研究對象，分離鑒定遠志根腐病的主要致病菌，并探究多菌靈、苯醚甲環(huán)唑、代森錳鋅、甲基立枯磷4種殺菌劑對遠志根腐病病原菌的防治效果，篩選出最佳防治濃度，采用合理有效的殺菌劑對遠志的根腐病進行防治，為提高遠志的產(chǎn)量和質(zhì)量提供一定的栽培依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 病原菌的采集

采集自山西省新絳縣陽王鎮(zhèn)遠志種植基地，選取根部腐爛嚴重的病株，進行取樣。

1.2 試驗方法

1.2.1 病原菌的分離純化 將遠志根部腐爛組織截成每段5 mm長，用5%的次氯酸鈉消毒3 min，然后用無菌水多次沖洗干凈，接種在PDA培養(yǎng)基平板上，25℃人工氣候箱中進行培養(yǎng)、純化，獲分離菌的純培養(yǎng)。

1.2.2 致病性測定 采用離體根部刺傷接種法，選取健康無病的遠志，截取長3 cm的根段，用滅菌后的針淺刺根部，將純化后的病原菌打成菌餅，接種到刺傷部位，每種病原菌3次重復(fù)。用無菌的脫脂棉包裹住根部的兩端，然后在棉花上滴加無菌水，放到培養(yǎng)皿上在25℃的恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，5 d后統(tǒng)計發(fā)病情況，計算根腐病的發(fā)病率。以發(fā)病率為依據(jù)，進行再次分離試驗。

1.2.3 病原菌的鑒定 參照STAMPS[3]和HAWKSWORTH等[4]的方法以及《土壤微生物分析方法手冊》[5]，通過觀察病原菌的菌落大小、形態(tài)、顏色及菌絲的形狀、顏色等進行初步鑒定。

1.2.4 室內(nèi)藥劑抑菌效果的測定 藥劑的種類及稀釋：將50%多菌靈可濕性粉劑（蘇州遍凈植?？萍加邢薰荆┓謩e稀釋450、600、750、900、1 050倍，20%的苯醚甲環(huán)唑水乳劑（山東省青島瀚生生物科技股份有限公司）分別稀釋1 000、1 250、1 500、1 750、2 000倍，80%代森錳鋅可濕性粉劑（利民化工股份有限公司）分別稀釋450、600、750、900、1 050倍，20%甲基立枯磷乳油（江蘇省連云港市東金化工有限公司）分別稀釋250、500、750、1 000、1 250倍。

采用生長速率法[6]，將錐形瓶中定量滅菌后的PDA培養(yǎng)基溫度降至50℃，加入以上稀釋好的藥劑，搖勻后倒入培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻制板，將活化好的帶有致病性的4種菌株打取6 mm菌餅，將菌餅分別接種到含藥PDA上，置于25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每個處理重復(fù)3次，以不加藥劑的平板為對照，培養(yǎng)5d后測量病原菌菌落直徑，計算抑菌率。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel軟件統(tǒng)計數(shù)據(jù)并作圖分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌的初步鑒定

從采集的病株中，共分離出來112株病原菌，從致病性測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4種主要的致病菌為鐮刀菌屬菌株，其由強到弱依次為Y6-3、Y2-1、Y8-2、M6-3。

2.2 不同藥劑對遠志根腐病病原菌的抑制效果

以分離出的致病率在50%以上的4種菌株為藥劑防治對象，進行室內(nèi)藥劑測定，結(jié)果表明，不同濃度的多菌靈對遠志根腐病的病原菌整體抑制效果很差（圖1），其中，對Y8-2菌株幾乎無抑制效果；對Y2-1、Y6-3的抑制效果在最高濃度450倍稀釋時抑菌率僅分別為21.35%、12.55%，低濃度時對其無法抑制；對M6-3菌株稀釋450倍時抑制率最高為32.57%，且隨著濃度逐漸降低抑制效果變差。

不同濃度的苯醚甲環(huán)唑?qū)h志根腐病的病原菌整體抑制效果好（圖2），最高濃度1 000倍稀釋時對4個菌株的抑制率均高于70%，對菌株Y8-2、Y6-3、M6-3和Y2-1的抑制率依次為88.07%、85.67%、85.59%、73.07%；不同稀釋倍數(shù)對Y6-3和Y8-2菌株的抑制率影響較小，平均抑菌率分別為84.98%、84.19%，均高于84%；1 500倍稀釋時對菌株Y2-1、M6-3的抑制率下降明顯，抑菌率分別為43.69%、61.26%。4個菌株中，對Y2-1的整體抑制效果最差。

不同濃度代森錳鋅對遠志根腐病整體抑制效果較差（圖3），其中，最高濃度450倍稀釋后對Y2-1的抑菌率最高，僅為44.88%；隨著濃度降低，抑菌率逐漸降至1.37%；對其他3個菌株的抑制率均低于20%，其中，對M6-3和Y6-3的菌株幾乎無抑制作用，最高濃度時，抑菌率僅分別為7.86%、6.25%。

不同濃度甲基立枯磷對遠志根腐病整體抑制效果較好（圖4），最高濃度對Y6-3、Y2-1、M6-3和Y8-2這4個菌株的抑制率均高于50%，分別依次為64.75%、65.77%、57.88%、52.47%，且對4個菌株的抑制趨勢相同，隨著濃度的下降，抑菌率逐漸下降，當(dāng)稀釋倍數(shù)為750倍時，對菌株Y2-1、Y6-3、Y8-2的抑制率下降顯著，抑菌率分別為18.91%、22.53%、26.44%。

3 結(jié)論與討論

供試的4種殺菌劑均對遠志根腐病的4種病原菌菌絲的生長有一定的抑制作用，其中，苯醚甲環(huán)唑?qū)Ω〉囊种坡首罡撸? 000倍稀釋后抑制效果最好，對菌株Y8-2、Y6-3、M6-3和Y2-1的抑菌率分別達到了88.07%、85.67%、85.59%、73.07%；甲基立枯磷次之，稀釋250倍后，對菌株Y6-3、Y2-1、M6-3和Y8-2的抑制率分別為65.77%、64.75%、57.88%、52.47%；多菌靈和代森錳鋅對菌絲的抑制效果較差。根據(jù)菌株的致病性強弱，對Y6-3、Y2-1菌株，用苯醚甲環(huán)唑1 000倍液、甲基立枯磷250倍液都可以很好抑制菌絲生長；對于Y8-2、M6-3菌株，苯醚甲環(huán)唑1 000倍抑制效果好。

根腐病是根莖類藥用植物栽培過程中高發(fā)的一類病害，它具有易傳染、致死率高、防治難度大等特點[8]。近年來，對遠志的進一步研究發(fā)現(xiàn)，其有保護神經(jīng)、增強記憶、抗炎、抗抑郁等多種藥理作用[9-20]，使其在發(fā)現(xiàn)新的藥物方面發(fā)揮重要作用，因此，對遠志的需求量逐年增長，而遠志根腐病的暴發(fā)是制約遠志產(chǎn)量的重要影響因素之一。遠志根腐病的發(fā)病首先表現(xiàn)在根莖相連的地表位置，引起地下部分腐爛，地上部分葉片發(fā)黃、植株干枯、萎蔫。農(nóng)民一味追求遠志的產(chǎn)量，長期濫用農(nóng)藥，使病原菌的抗藥性增加，防治效果降低，生態(tài)系統(tǒng)被破壞，致使藥材減產(chǎn)、農(nóng)藥殘留超標、品質(zhì)下降。因此，尋找引起遠志根腐病的主要致病菌，根據(jù)病原菌特性，篩選出合理安全防治遠志根腐病的殺菌劑至關(guān)重要。

目前，對根莖類藥用植物的防治大部分都以化學(xué)農(nóng)藥防治為主。單一的化學(xué)防治對遠志根腐病病原菌在一定時間內(nèi)可能會有較好的殺菌效果，但是長時間使用同一種化學(xué)殺菌劑，會使病原菌產(chǎn)生一定抗藥性，后期無法達到預(yù)期的防治效果。從食用安全角度出發(fā)，應(yīng)當(dāng)交替使用不同種類、濃度的殺菌劑，避免產(chǎn)生抗藥性。在種植過程中，遇到根腐病大暴發(fā)時，嚴重影響農(nóng)民經(jīng)濟收入，可以合理適當(dāng)使用殺菌劑。但由于遠志的經(jīng)濟效益較高，農(nóng)民在種植過程中，為了利益往往過量使用殺菌劑，造成農(nóng)藥殘留，污染生態(tài)環(huán)境，而使用生物防治的方法可以很好地避免這些問題。目前，白術(shù)、黃芪、黨參等已在生物防治上取得了一定研究成果，生物防治的這一優(yōu)點，受到廣泛重視并發(fā)揮著越來越重要的作用[21]。本研究下一步也將繼續(xù)朝著生物防治的方向，對遠志根腐病的生物防治進行研究。