前置胎盤患者血清及胎盤組織中Eph A5表達水平與妊娠結局的關系探討

劉曉寧 宋振霞 潘曉華

前置胎盤（PP）是妊娠晚期嚴重并發(fā)癥之一， 發(fā)病率占孕產(chǎn)婦總數(shù)的1%左右[1]。PP患者主要表現(xiàn)為無痛性反復陰道出血及產(chǎn)時、產(chǎn)后大出血，引發(fā)不良妊娠結局，對孕產(chǎn)婦和胎兒生命造成嚴重威脅。研究發(fā)現(xiàn)[2]，促紅細胞生成素產(chǎn)生肝細胞受體Eph A5具有促進血管內(nèi)皮生長、調節(jié)缺血缺氧相關信號通路等作用，但關于Eph A5表達水平與PP發(fā)生發(fā)展及分娩結局關系的研究尚少，需進一步探討。為此本研究特選擇2016年1月～2018年1月醫(yī)院收治的98例PP患者及40例健康孕產(chǎn)婦為研究對象，探討血清及胎盤組織中Eph A5的表達，以期為PP患者防治提供新的思路，詳述如下。

資料與方法

1 一般資料 取2 0 1 6年1月～2 0 1 8年1月醫(yī)院收治的9 8例待產(chǎn)P P患者為觀察組，年齡2 0～3 2歲，平均（2 6.8 0±4.5 8）歲，孕周3 6～3 8周，平均（3 7.0 2±1.6 7）周，體質指數(shù)（B M I）（21.34±2.60）kg/m2，初產(chǎn)婦68例、經(jīng)產(chǎn)婦30例，PP類型：完全型33例、部分型24例、邊緣型41例，分別納入A、B、C組；選取同期收住的40例待產(chǎn)健康孕婦為對照組，年齡20～32歲，平均（26.53±4.62）歲，孕周36～39周，平均（37.54±1.75）周，BMI（20.87±2.82）kg/m2，初產(chǎn)婦28例、經(jīng)產(chǎn)婦12例，兩組均為單胎妊娠，兩組年齡、孕周、BMI、初產(chǎn)婦及經(jīng)產(chǎn)婦構成比比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批。

2 納入及排除標準

2.1 納入標準：①觀察組患者符合PP診斷標準[3]；②均為單胎妊娠孕產(chǎn)婦；③知情且同意本次研究。

2.2 排除標準：①合并子癇前期、妊娠期糖尿病、嚴重貧血等妊娠期合并癥者；②合并嚴重肝腎功能不全者；③既往高血壓、糖尿病及精神病史者。

3 方法

3.1 血清Eph A5水平檢測：收集觀察組和對照組產(chǎn)前空腹血樣3 mL，加入肝素抗凝管中，靜置后分層，3 000 r/min、10 min后，收集上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒（北京安必奇生物科技有限公司），嚴格按照說明書操作步驟進行，應用FC型酶標儀（Thermo公司）檢測570 nm波長處吸光度值，根據(jù)建立的標準曲線計算血清Eph A5濃度。

3.2 胎盤組織中Eph A5表達水平檢測：收集觀察組和對照組產(chǎn)后新鮮胎盤組織70 mg，加入蛋白裂解液（武漢博士德生物工程有限公司）0.5 mL，充分研磨，置于沸水浴中10 min，12 000 r/min、10 min后收集上清液，二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量試劑盒（Thermo公司）測定蛋白總量。取50μg待測樣品加入等量商鞅緩沖液，充分混勻后沸水浴3 min，12 000 r/min、10 min后收集上清液，進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳分離，然后電轉儀60 min轉至硝酸纖維素膜NC膜，脫脂奶粉封閉液室溫孵育2 h（室溫），然后加入稀釋兔抗人Eph

A5一抗（1∶500，Abcam公司）置于搖床孵育過夜（4℃），漂洗緩沖液洗滌后，加入山羊抗兔Eph A5二抗（1∶2 000，Abcam公司）搖床孵育1 h（室溫），暗室中曝光和顯影，應用Tannon1600凝膠成像儀（上海天能科技有限公司）掃描，并采用Image J軟件進行灰度值分析，以Eph A5與內(nèi)參β-肌動蛋白（β-actin，Abcam公司）灰度值比值表示目的蛋白相對表達量。

3.3 隨訪 隨訪統(tǒng)計觀察組中不同類型PP患者及圍生兒妊娠結局，將母體及圍生兒不良妊娠結局者納入不良組，其余納入良好組。母體不良妊娠結局如胎盤粘連、胎盤植入、產(chǎn)后出血和子宮切除；圍生兒不良妊娠結局如早產(chǎn)、低體重兒、窒息和死亡。順產(chǎn)者第3產(chǎn)程時間≥30 min時需人工剝離胎盤，或娩出不完整胎盤，剖宮產(chǎn)者需人工鉗取或剝離殘留胎盤者則為胎盤粘連[4]；胎盤絨毛侵犯子宮肌層并與其連接緊密者則為胎盤植入[5]；分娩后24 h內(nèi)出血量＞500 mL者則為產(chǎn)后出血；圍生兒體重＜2.5 kg者則為低體重兒[6]。

4 觀察指標 ①對比觀察組與對照組血清及胎盤組織中Eph A5水平；②對比不同類型PP患者血清及胎盤組織中Eph A5水平；③觀察組母體與胎兒不良妊娠結局發(fā)生情況；④對比母體妊娠結局與血清和胎盤組織中Eph A5水平；⑤對比圍生兒妊娠結局與血清和胎盤組織中Eph A5水平。

5 統(tǒng)計學分析 應用SPSS26.0統(tǒng)計軟件分析處理數(shù)據(jù)，計量資料和計數(shù)資料分別以（）、率（%）描述，并分別采用t檢驗和χ2檢驗。P＜0.05有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 對比觀察組與對照組血清及胎盤組織中Eph A5水平 觀察組與對照組血清及胎盤組織中Eph A5水平比較，采用t檢驗，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），觀察組血清及胎盤組織中Eph A5水平低于對照組。結果見表1。

2 對比不同類型PP患者血清及胎盤組織中Eph A5水平 C組與A組、B組血清及胎盤組織中Eph A5水平比較，采用單因素方差分析，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），C組血清及胎盤組織中Eph A5水平均高于A組和B組；A組與B組血清及胎盤組織中Eph A5水平比較，采用單因素方差分析，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結果見表2。

表1 對比觀察組與對照組血清及胎盤組織中Eph A5水平（）

表1 對比觀察組與對照組血清及胎盤組織中Eph A5水平（）

胎盤組織Eph A5相對表達量觀察組 98 2.61±0.62 0.86±0.10對照組 40 14.60±2.58 2.95±0.45 t值 43.251 43.623 P值 0.000 0.000組別 例數(shù) 血清Eph A5（pmol/L）

表2 對比不同PP患者血清及胎盤組織中Eph A5水平（）

表2 對比不同PP患者血清及胎盤組織中Eph A5水平（）

注：與A組比，aP＜0.05；與B組比，bP＜0.05

組別 例數(shù) 血清Eph A5（pmol/L）胎盤組織Eph A5相對表達量A組 33 2.43±0.31 0.58±0.09 B組 24 2.36±0.32 0.61±0.07 C組 41 2.90±0.36ab 1.23±0.24ab F值 1.746 0.123 P值 0.180 0.885

3 觀察組母體與胎兒不良妊娠結局發(fā)生情況 98例前置胎盤患者中，胎盤粘連者25例、胎盤植入者22例、產(chǎn)后出血者6例，其中39例存在1種不良結局、13例存在2種不良結局、6例存在3種不良結局，母體不良妊娠結局發(fā)生率為59.18%（58/98）；娩出98例胎兒中，早產(chǎn)26例、低體重兒15例、窒息5例、死亡3例，其中33例存在1種不良結局、5例存在2種不良結局、3例存在3種不良結局，圍生兒不良妊娠結局發(fā)生率為41.84%（41/98）。

4 對比母體妊娠結局與血清和胎盤組織中Eph A5水平 母體妊娠結局不良組與良好組血清Eph A5水平比較，采用t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），不良組血清Eph A5水平低于良好組；母體妊娠結局不良組與良好組胎盤組織Eph A5水平比較，采用t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結果見表3。

表3 對比母體妊娠結局與血清和胎盤組織中Eph A5水平（）

表3 對比母體妊娠結局與血清和胎盤組織中Eph A5水平（）

胎盤組織Eph A5相對表達量不良組 58 1.89±0.26 0.83±0.08良好組 40 3.65±0.42 0.91±0.33 t值 25.611 1.776 P值 0.000 0.079組別 例數(shù) 血清Eph A5（pmol/L）

5 對比圍生兒妊娠結局與血清和胎盤組織中Eph A5水平 圍生兒妊娠結局不良組與良好組胎盤組織Eph A5水平比較，采用t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），不良組胎盤組織Eph A5水平低于良好組；圍生兒妊娠結局不良組與良好組母體血清Eph A5水平比較，采用t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結果見表4。

表4 對比圍生兒妊娠結局與血清和胎盤組織中Eph A5水平（）

表4 對比圍生兒妊娠結局與血清和胎盤組織中Eph A5水平（）

胎盤組織Eph A5相對表達量不良組 41 2.48±0.46 0.50±0.06良好組 57 2.70±0.63 1.12±0.25 t值 1.900 15.540 P值 0.060 0.000組別 例數(shù) 血清Eph A5（pmol/L）

討 論

PP是妊娠晚期嚴重的并發(fā)癥之一，其發(fā)病原因及機制十分復雜，目前尚未完全明了。有學者認為[7]，子宮內(nèi)膜損傷、瘢痕形成、母體對滋養(yǎng)細胞生長的異常反應、炎癥等因素均可導致PP形成。在PP形成過程中，胎盤血供差，機體存在慢性缺血缺氧狀態(tài)，導致母體及胎兒血供不足，進而引起不良妊娠結局。

Eph A5是廣泛表達于多種器官、組織和細胞中的酪氨酸激酶受體，參與機體多種生長因子、細胞因子信號通路。Peuckert C等人通過敲除小鼠Eph A5基因，小鼠表現(xiàn)為血管生成緩慢，并伴隨發(fā)育遲緩和認知功能障礙等情況[8]。劉田田等人關于Eph A5及其配體ephrin A5在癲癇模型大鼠腦組織海馬區(qū)表達的研究發(fā)現(xiàn)，Eph A5及其配體表達量均下調，參與癲癇發(fā)作[9]。以上研究均提示Eph A5磷酸化被抑制可能導致缺血缺氧調控通路阻斷，進而引起血管新生能力下降和相應組織或器官損害。本研究檢測健康孕產(chǎn)婦及PP患者血清和胎盤組織中Eph A5的表達狀況，結果表明，觀察組血清及胎盤組織中Eph A5水平低于對照組（P＜0.05），A組和B組血清及胎盤組織中Eph A5水平低于C組（P＜0.05），提示PP患者血清及胎盤組織中Eph A5水平異常低，其中完全型和部分型PP患者血清及胎盤組織中Eph A5水平低尤其顯著。

本研究中不良妊娠結局統(tǒng)計資料表明，母體不良妊娠結局發(fā)生率為59.18%，圍生兒不良妊娠結局發(fā)生率為41.84%（41/98），母體妊娠結局不良組血清Eph A5水平低于良好組（P＜0.05），圍生兒妊娠結局不良組胎盤組織Eph A5水平低于良好組（P＜0.05）。在PP妊娠晚期，促進血管新生的關鍵因子Eph A5表達量顯著下降，可引起血管功能受限，繼而影響母體各項功能，增加不良妊娠結局發(fā)生。當外界刺激信號激活Eph A5，其磷酸化激活后，可將信號傳遞至細胞核，進而參與細胞增殖、生長及胎盤發(fā)育過程[10]。相反，下調的Eph A5引起的血管新生功能下降，可直接加重胎兒缺血缺氧環(huán)境，增加圍生兒不良妊娠結局風險[11]。本研究中圍生兒妊娠結局不良組胎盤組織中Eph A5表達水平與良好組相比較低，其胚胎發(fā)育調控作用降低，進而增加不良妊娠結局風險。由此，血清、胎盤組織中Eph A5表達水平與母體和圍生兒不良妊娠結局關系密切，進而提示Eph A5作為預測妊娠結局的潛在標志物之一。

綜上所述，PP患者血清及胎盤組織中Eph A5水平較低，其中完全型和部分型PP患者血清及胎盤組織中Eph A5水平異常低。血清Eph A5水平異常低可能與母體不良妊娠結局有關，而胎盤組織中Eph A5水平異常低可能與胎兒不良妊娠結局有關，提示臨床中應密切關注PP患者血清及胎盤組織中Eph A5水平變化，提前預測妊娠結局，但Eph A5參與PP病情的發(fā)生和發(fā)展機制仍需進一步探討。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突