宮頸癌細胞增殖、凋亡與病理學(xué)的相關(guān)性

莫梅山 張雪蕓 張彩鈴

宮頸癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率一直位居女性生殖道惡性腫瘤的首位。當前我國宮頸癌發(fā)病率不斷上升，且朝著著呈低齡化方向發(fā)展，對婦女健康造成了嚴重影響[1-2]。目前對于宮頸癌的治療方式主要采用有化療、放療、手術(shù)等方式，但是宮頸癌細胞的快速增殖凋亡抑制是宮頸癌患者治療失敗及死亡的1個主要原因[3]。同時由于各種因素的影響，宮頸癌患者的早期診斷率落后于發(fā)達國家，患者確診時大多數(shù)已經(jīng)屬于為中晚期患者，導(dǎo)致預(yù)后比較差[4-5]?，F(xiàn)代研究表明腫瘤的形成是腫瘤細胞異常增殖的結(jié)果，其發(fā)生與發(fā)展涉及多中心、多環(huán)節(jié)、多通路，特別是目前宮頸癌增殖和凋亡的分子機制已被廣泛研究[6-7]。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)可促進體內(nèi)血管內(nèi)皮細胞分化，產(chǎn)生金屬蛋白酶、內(nèi)皮細胞間質(zhì)膠原酶，增強血管通透性，促進腫瘤增殖與抑制凋亡[8]。特別是VEGF的高表達可激活端粒酶活性，使細胞凋亡障礙，引起細胞增殖與凋亡失衡，最終導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生[9-10]。本文具體探討了宮頸癌細胞增殖、凋亡與VEGF免疫組化病理學(xué)的相關(guān)性，希望為宮頸癌的預(yù)防、監(jiān)測及治療探索一些可能的途徑?，F(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 材料與方法

1.1 對象

本研究得到了醫(yī)院倫理委員會的批準，患者在自愿條件下簽署了同意書，研究時間2016年8月至2019年1月。選擇在我院就診的120例宮頸癌患者來作為觀察組，納入標準：臨床與病理資料完整；病理診斷為宮頸癌；非其他部位轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的宮頸癌病例。排除標準：精神疾病患者；未行手術(shù)或活檢病例；組織病理學(xué)不明確的病例；妊娠孕婦與哺乳期婦女。年齡29～76歲，平均(54.83±1.38)歲；平均體重指數(shù)(22.74±1.22)kg/m2；平均產(chǎn)次(1.82±0.21)次；吸煙31例；臨床分期：Ⅰ期48例，Ⅱ期40例，Ⅲ期32例；分化程度：高分化60例，中分化40例，低分化20例；遠處轉(zhuǎn)移：有60例，無60例。

同期選擇在我院因其他病變行子宮切除術(shù)的具有正常宮頸組織患者120例作為對照組。年齡31～78歲，平均年齡(55.99±2.11)歲；平均體重指數(shù)(23.01±1.74)kg/m2；平均產(chǎn)次(1.92±0.42)次；吸煙34例。

兩組患者的年齡、體重指數(shù)、吸煙、產(chǎn)次等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。

1.2 VEGF表達病理分析

取兩組患者的宮頸組織標本，立即用10%甲醛固定、石蠟包埋，給予免疫組化分析，Anti-VEGF由Abcam公司提供，工作濃度為1∶500。以磷酸緩沖鹽溶液(PBS)代替一抗作為陰性對照。分別由兩名有經(jīng)驗的病理科醫(yī)生在雙盲情況下根據(jù)切片的陽性細胞數(shù)比例和染色深度進行判定。染色結(jié)果判斷：組織切片中胞質(zhì)染為淡黃色至棕褐色者為陽性細胞標志，4分：陽性細胞>60%；3分：30%<陽性細胞≤60%；2分：5%<陽性細胞≤30%： 陽性；1分：陽性細胞0%<陽性細胞≤5%；0分：陰性?！?分為VEGF表達陽性。

1.3 細胞凋亡分析

將兩組的宮頸組織標本進行脫蠟，PBS浸泡5 min，各組織切片滴加TUNEL檢測液50 μl，混勻后濕盒里37 ℃遮光反應(yīng)1 h，PBS洗滌3次。每片各加50 μl DAPI染色液避光反映5 min，淬滅劑封片，鏡下觀察并采集圖像，用己知宮頸癌陽性片作為陽性對照，以PBS設(shè)立陰性對照，計算細胞凋亡指數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析方法

2 結(jié)果

2.1 VEGF表達陽性率比較

觀察組的VEGF表達陽性率為75.0%(90/120)，對照組為3.3%(4/120)，觀察組VEGF表達陽性率高于對照組(χ2=129.338，P<0.05)。

2.2 細胞凋亡指數(shù)對比

觀察組的細胞凋亡指數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組細胞凋亡指數(shù)對比

2.3 VEGF表達與宮頸癌細胞增殖、凋亡的相關(guān)性

在觀察組中，不同臨床分期、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移與凋亡指數(shù)患者的VEGF表達陽性率對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 宮頸癌患者VEGF表達與宮頸癌細胞增殖、凋亡的相關(guān)性(例，%)

Spearman等級相關(guān)分析顯示：宮頸癌患者VEGF表達陽性率與臨床分期、遠處轉(zhuǎn)移、細胞凋亡指數(shù)都存在相關(guān)性(P<0.05)。見表3。

表3 宮頸癌患者VEGF表達陽性率與臨床分期、遠處轉(zhuǎn)移、細胞凋亡指數(shù)的相關(guān)性

3 討論

宮頸癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一。流行病學(xué)調(diào)查顯示，宮頸癌總的5年生存率幾乎達約70%，其中局部晚期者5年生存率分別為都均在50%以下[11]。宮頸癌的影像學(xué)檢查有會導(dǎo)致一定的誤差性，近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，通過檢測腫瘤標志物等進行早期診斷宮頸癌與判斷病情已成為了可能[12]。

宮頸癌該病的發(fā)病機理尚未完全了解明確，可歸因于基因-環(huán)境的相互作用[13]。VEGF是最具特異性的促進淋巴管內(nèi)皮生成的因子，可以對誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞進行誘導(dǎo)，使其鈣濃度在短時間內(nèi)升高，還可提升基底膜的降解速度，對內(nèi)皮細胞的基因表達產(chǎn)生影響，并促進血管生成[14-15]。此外VEGF還能提升血管通透性，能為內(nèi)皮細胞的遷移提供網(wǎng)架，讓血漿蛋白外滲，同時也為腫瘤增殖提供基質(zhì)。本研究顯示觀察組的VEGF表達陽性率為75.0%，對照組為3.3%，觀察組VEGF表達陽性率高于對照組(P<0.05)，表明宮頸癌患者多伴隨有VEGF的高表達。當前研究表明VEGF可與EGF受體相結(jié)合而促進淋巴管內(nèi)皮的生長，還可通過抑制促血管生長因子的表達，從而間接抑制血管新[16]。同時VEGF在參與各種炎癥反應(yīng)、細胞間黏附、腫瘤轉(zhuǎn)移、細胞生長和分化方面也具有一定的作用，VEGF的高表達可直接和間接介導(dǎo)細胞毒效應(yīng)，從而加重炎性反應(yīng)過程或產(chǎn)生致癌作用[17-18]。

宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展是1個多因素多步驟的復(fù)雜病理過程，涉及到不同基因參與；并且宮頸癌的形成以基因異常細胞的增殖為主，誘發(fā)機體細胞凋亡；若細胞增殖與細胞凋亡能保持動態(tài)平衡，則會抑制腫瘤的形成[19]。VEGF是最具特異性的促進淋巴管內(nèi)皮生成的因子，在人體正常組織當中，VEGF微量表達，而在腫瘤組織當中，VEGF呈現(xiàn)高表達狀況[20]。VEGF與受VEGFR結(jié)合后，可誘導(dǎo)淋巴管生成，促進腫瘤增殖與抑制凋亡。本研究顯示觀察組的細胞凋亡指數(shù)顯著低于對照組；在觀察組中，不同臨床分期、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移與凋亡指數(shù)患者的VEGF表達陽性率對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義；Spearman等級相關(guān)分析顯示宮頸癌患者VEGF表達陽性率與臨床分期、遠處轉(zhuǎn)移、細胞凋亡指數(shù)都存在相關(guān)性。VEGF作為分泌型糖蛋白，隨著VEGF的逐步水解，其對于受體VEGFR的親和力逐步升高[21-22]。在VEGF的誘導(dǎo)下，內(nèi)皮細胞大量增殖，導(dǎo)致人體的血管出現(xiàn)分支，對腫瘤的發(fā)展及凋亡都有著重要調(diào)節(jié)作用，可促使腫瘤朝著肌層深部方向發(fā)展[23]。并且VEGF家族也是參與淋巴管新生、血管新生的主要因子，在淋巴管生成、腫瘤血管過程中有重要作用[24]。同時VEGF的高表達可導(dǎo)致細胞凋亡和增殖的平衡被打破，從而促進宮頸癌形成和擴散[25]。不過由于本研究中的病例量有限，后續(xù)試驗研究仍需進一步搜集病例，增大樣本量，以進一步驗證該結(jié)論。

總之，宮頸癌病灶組織細胞表現(xiàn)為高增殖與低凋亡狀況，且伴隨有VEGF的高表達，它們之間存在顯著相關(guān)性，從而促使宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展。