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    贛南臍橙園枯枝微生物的研究初探

    2020-06-13 05:33張油兵牛王翠張洪銘夏長秀李夢媛陳兆星
    現(xiàn)代園藝 2020年11期
    關(guān)鍵詞:進化樹菌絲體培養(yǎng)皿

    張油兵,牛王翠,張洪銘,夏長秀,李夢媛,婁 偉,陳兆星,嚴 翔

    (贛州市柑桔科學研究所,江西贛州 341000)

    贛南臍橙園內(nèi)健康樹上掛有枯枝,而枯枝表層含有多種微生物,如果清理不及時,在病健交界處,枯枝上的致病菌勢必會通過農(nóng)事活動、雨水、刮風等感染健康枝,進而影響樹的生長勢。贛南地區(qū)近年來柑桔黑點病發(fā)生嚴重,據(jù)報道,在管理良好,枝干樹脂病不發(fā)生或發(fā)生很輕的果園,黑點病侵染來源主要來自枯死枝梢上的分生孢子[1];炭疽病是嚴重危害農(nóng)作物生產(chǎn)和農(nóng)產(chǎn)品儲運的一大真菌性病害,具有危害廣和危害時間長的特點,主要侵害農(nóng)作物葉片、枝條、花、果實和果柄,常造成大量落葉、枝條枯死、落花、落果和果實腐爛[2]。本研究旨在從枯枝上分離出菌并進行鑒定,及時了解不同季節(jié)枯枝上的病原菌,有針對性地進行提前防治,減少柑桔的發(fā)病率。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    分離材料選取贛州市柑桔所內(nèi)臍橙果園的枯枝,采用PDA 培養(yǎng)基進行培養(yǎng)篩選菌株,其成分為馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂15g(1L)。

    1.2 試驗方法

    采用五點取樣法,于4月份及8月份從果園內(nèi)采集枯枝,并立即送實驗室進行處理:剪取枯枝的一小段,置入含有滅菌水的培養(yǎng)皿中,浸泡清洗2~3min,吸取培養(yǎng)皿中的洗滌水30uL 到固體PDA 培養(yǎng)皿中,涂平板,之后放入28℃人工恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3d,隨后用牙簽挑取培養(yǎng)皿中的單菌落至固體PDA 培養(yǎng)皿中,放入28℃人工恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3d,觀察單菌落的外觀形態(tài),并將樣品送到南昌科暢生物科技有限公司進行鑒定菌的種屬關(guān)系,并進行系統(tǒng)性的分類。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 外觀形態(tài)學觀察

    圖1 4月份篩選的菌株

    將分離到的菌株在PDA 培養(yǎng)基中進行劃線培養(yǎng)3d 后,從外觀形態(tài)進行觀察(見圖版),篩選到的Ap1-1 和Au4-3在基質(zhì)上菌絲體呈現(xiàn)灰綠色,菌落灰色;Ap1-2和Au3-1 呈乳白色,翻開培養(yǎng)皿蓋子有股惡臭味,無菌絲體;Ap4-2 呈粉紅色,無菌絲體;Au1-1 菌絲體白色,菌落雪白,邊緣褶痕狀;Au4-4 菌落外觀呈黃色,無明顯菌絲體。

    圖2 8月份篩選的菌株

    圖3 Ap4-2進化樹

    圖4 Ap1-2進化樹

    圖5 Au4-4進化樹

    2.2 菌的種屬鑒定

    將挑取的單菌落送到南昌科暢生物科技有限公司進行測定16SrDNA 序列,通過構(gòu)建進化樹分析菌的種屬關(guān)系,針對細菌菌株Ap1-2、Ap4-2 和Au4-4進行構(gòu)建進化樹,如圖3~5 所示。

    3 結(jié)論與討論

    贛南臍橙園內(nèi)的枯枝表層含有的微生物群落依不同的季節(jié)、不同的生態(tài)環(huán)境,分布情況不一樣;本研究結(jié)果表明,4月份共篩選獲得3 株單菌株,分別為Ap1-1(枝狀枝孢菌)、Ap1-2(短小桿菌屬)和Ap4-2(甲基細菌),8月份篩選出4 株單菌株,分別為Au1-1(裂褶菌)、Au3-1(短小桿菌屬)、Au4-3(枝狀枝孢菌)和Au4-4(鞘氨醇單胞菌屬);4月份和8月份均篩選出了枝狀枝孢菌和短小桿菌屬的菌株。

    贛南地區(qū)一般在臍橙采摘完后,進行果園的清理,往往這個時候,枯枝上的致病菌很可能已經(jīng)感染了健康的枝條或果面,及時了解不同季節(jié)枯枝上的病原菌,有針對性地進行提前防治,以減少果園的打藥次數(shù),減少發(fā)病率等,顯得尤為重要。枯枝菌的分離鑒定及防治研究能夠很好地為贛南柑橘產(chǎn)區(qū)從源頭上防治病害提供理論依據(jù)及技術(shù)支撐,對于穩(wěn)定柑桔產(chǎn)區(qū)的經(jīng)濟效益具有重大意義。

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