長(zhǎng)白山野生珊瑚狀猴頭菌菌絲最佳培養(yǎng)基配方研究*

曲 娜，劉 迪，2**，王 皓，王靜文，劉玉冰，徐鐵金，胡 雪

[1.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林 延吉 133002；2.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院食（藥）用真菌研究所，吉林 延吉 133002]

珊 瑚 狀 猴 頭 菌 [Hericium coralloides（Scop.）Pers.]，其屬于擔(dān)子菌亞門(mén)（Basidiomycetes） 傘菌綱（Agaricomycetes） 紅 菇 目（Russulales） 猴 頭 菌 科（Hericiaceae） 猴頭菌屬（Hericium）[1]。珊瑚狀猴頭菌含有多種人體必須氨基酸、不飽和脂肪酸、以及維生素等，是十分美味的珍稀食（藥）用菌[2]。圖力古爾等[3]在2010年對(duì)長(zhǎng)白山野生珊瑚狀猴頭菌完成了馴化栽培；張鵬等[4]對(duì)珊瑚狀猴頭菌子實(shí)體進(jìn)行了研究；針對(duì)長(zhǎng)白山區(qū)珊瑚狀猴頭菌的生態(tài)栽培技術(shù)，吳秀玲等[5]進(jìn)行了研究。隨著社會(huì)的發(fā)展，越來(lái)越多的人注重食品保健，市場(chǎng)上也更需要珊瑚狀猴頭菌這樣的藥食兼用菌，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)珊瑚狀猴頭菌的多糖進(jìn)行了大量的研究[6-11]。由于野生珊瑚狀猴頭菌有性繁殖時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，而無(wú)性繁殖約20 d左右，因此篩選珊瑚狀猴頭菌的最佳培養(yǎng)基配方具有重要的研究意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

菌種：猴頭1號(hào)，延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院食（藥）用真菌研究所保藏菌種。

1.2 基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方

葡萄糖 20 g·L-1、蛋白胨 2 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1。

2 因素分析

2.1 不同碳源對(duì)珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的影響

在培養(yǎng)基 （蛋白胨 2 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1、瓊脂20 g·L-1）中，分別將20 g·L-1的葡萄糖、淀粉、蔗糖、乳糖以及甘露醇作為碳源。另設(shè)1組對(duì)照組（CK），其中不添加任何碳源，每個(gè)處理重復(fù)5次。采取平板培養(yǎng)法，每個(gè)培養(yǎng)皿倒入35 mL培養(yǎng)液。將大小約為0.5 mm長(zhǎng)勢(shì)良好的菌塊用打孔器接種于平板中央，并于25℃恒溫箱中進(jìn)行暗培養(yǎng)。菌絲生長(zhǎng)后，用十字交叉法測(cè)定菌落直徑并記錄菌落生長(zhǎng)速度、菌絲長(zhǎng)勢(shì)、干重和邊緣等特征。采取Excel以及SPSS 22.0整理和分析數(shù)據(jù)。

2.2 不同氮源對(duì)珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的影響

在培養(yǎng)基 （葡萄糖 20 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1、瓊脂20 g·L-1）中，分別將2 g·L-1的酪蛋白胨、酵母膏、氯化銨、硝酸銨、硝酸鉀作為氮源。另設(shè)1組對(duì)照組（CK），其中不添加任何氮源，其余試驗(yàn)方法，測(cè)定項(xiàng)目及數(shù)據(jù)分析同2.1。

2.3 不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的影響

在培養(yǎng)基 （葡萄糖 20 g·L-1、蛋白胨 2 g·L-1、瓊脂20 g·L-1）中，分別添加0.5 g·L-1的MgSO4、CaSO4、ZnSO4和MnSO4的無(wú)機(jī)鹽，另設(shè)1組對(duì)照組（CK），其中不添加任何無(wú)機(jī)鹽。其他試驗(yàn)方法，測(cè)定項(xiàng)目及數(shù)據(jù)分析同2.1。

2.4 正交試驗(yàn)

采用L9（33）正交設(shè)計(jì)設(shè)定試驗(yàn)因素與水平見(jiàn)表1，從單因素分析中的最佳碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽中選取各因素之間的最佳組合，便于選取最適珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的培養(yǎng)基配方。其余試驗(yàn)方法、步驟、測(cè)定項(xiàng)目同2.1。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平Tab.1 Factors and levels in orthogonal test

3 結(jié)果與分析

3.1 不同碳源對(duì)珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的影響

不同碳源對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表2。

表2 不同碳源對(duì)珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的影響Tab.2 Effects of different carbon sources on mycelia growth of Hericium coralloides

從表2可以看出，珊瑚狀猴頭菌菌絲體在不同碳源中均可生長(zhǎng)，在以葡萄糖為碳源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)勢(shì)最優(yōu)且干重最重，為1.7 mg，菌絲生長(zhǎng)速度最快。綜上所述，適合珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的最佳碳源為葡萄糖，其次為甘露醇。

3.2 不同氮源對(duì)珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的影響

不同氮源對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表3。

表3 不同氮源對(duì)珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的影響Tab.3 Effects of different nitrogen sources on mycelia growth of Hericium coralloides

從表3可看出，珊瑚狀猴頭菌在以酵母膏為氮源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)勢(shì)最優(yōu)且干重最重，為23.6 mg，明顯高于其余處理，但菌絲長(zhǎng)速與酪蛋白胨并無(wú)明顯差異。綜上所述，最適合珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的氮源為酵母膏，其次為酪蛋白胨。

3.3 不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的影響不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表4。

從表4可看出，珊瑚狀猴頭菌菌絲體在以CaSO4為無(wú)機(jī)鹽時(shí)，菌絲體生長(zhǎng)速度及生長(zhǎng)勢(shì)最佳，菌絲體粗壯，菌絲邊緣整齊，干重最重，為1.7 mg。綜上所述，最適合珊瑚狀猴頭菌菌絲體生長(zhǎng)的無(wú)機(jī)鹽為CaSO4，其次是MgSO4。

表5 L9（33）正交試驗(yàn)結(jié)果Tab.5Results of L9（33）orthogonal test

3.4 正交試驗(yàn)

L9（33）正交試驗(yàn)結(jié)果與極差分析見(jiàn)表5。

如表5所示，A、B、C因素的極差值分別為1.14、0.67、0.95，所以對(duì)菌絲體干重的影響程度為葡萄糖＞CaSO4＞酵母膏。因此影響菌絲干重的重要因素是葡萄糖。A3B2C1是珊瑚狀猴頭菌菌絲生長(zhǎng)和發(fā)育的最佳組合，即培養(yǎng)基最佳比例為葡萄糖25 g·L-1、酵母膏 2.5 g·L-1、CaSO40.3 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1。

4 結(jié)論

通過(guò)正交試驗(yàn)研究表明，珊瑚狀猴頭菌菌絲生長(zhǎng)的最佳培養(yǎng)基配為葡萄糖25 g·L-1、酵母膏2.5 g·L-1、CaSO40.3 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1。

通過(guò)單因子方差明確了影響菌絲干重的3個(gè)因素，最適宜猴頭菌菌絲生長(zhǎng)的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽分別為葡萄糖、酵母膏、硫酸鈣。