家禽胚蛋注射技術(shù)的應用研究(綜述)（2）

賈良梁　張配配

摘? 要：在孵化后期，入孵種蛋的胚胎發(fā)育迅速，營養(yǎng)供應緊張，通過胚蛋注射技術(shù)供應養(yǎng)分可能有利于胚胎的組織發(fā)育和雛雞出殼后的早期生長。本文介紹了給入孵種蛋注射卵清蛋白、氨基酸和多肽后胚胎的發(fā)育及隨后出殼雛禽的生長情況。

關(guān)鍵詞：胚蛋注射技術(shù);卵清蛋白;氨基酸;肽;β-羥基-β-甲基丁酸

中圖分類號：S815 文獻標志碼：C 文章編號：1001-0769（2020）02-0003-04

1? 卵清蛋白

Foye等（2006a）利用胚蛋注射技術(shù)給入孵的火雞種蛋供應卵清蛋白并檢測了對火雞種蛋胚胎的生長和肝臟糖原水平的影響。在種蛋孵化的第23天（約胚胎啄殼前1 d），F(xiàn)oye等將1.5 mL含有卵清蛋白的液體注入火雞種蛋胚胎的羊膜腔內(nèi)。試驗時，他們對卵清蛋白和β-羥基-β-甲基丁酸（β-hydroxy-β-methylbutyrate，HMB;亮氨酸的一種代謝產(chǎn)物）各設(shè)置兩個劑量，前者分別為0和18%，后者分別為0和0.1%，聯(lián)合使用。Foye等發(fā)現(xiàn)，與由不注射卵清蛋白和HMB的對照組種蛋孵出的雛火雞相比，由單獨注射18%卵清蛋白或注射卵清蛋白（18%）+HMB（0.1%）的種蛋孵出的雛火雞體重顯著更大;與由不注射卵清蛋白和HMB的對照組種蛋孵出的雛火雞相比，孵化時種蛋胚胎只注射18%卵清蛋白提高了出殼雛火雞的胸肌重量以及雛火雞出殼和7日齡時肝臟中的糖原水平。這些結(jié)果暗示了卵清蛋白對入孵種蛋的營養(yǎng)價值，因為注入卵清蛋白能夠在整個應激性出殼過程和雛火雞出殼后1周中提高入孵種蛋胚胎的肌肉重量、雛火雞的出殼體重以及雛火雞肝臟中的糖原水平。

2? 氨基酸

Ohta等（1999）用胚蛋注射技術(shù)給入孵種蛋注射氨基酸組成與正常雞蛋一致的氨基酸溶液（氨基酸混懸于無菌蒸餾水中），并檢測肉種雞入孵種蛋的胚胎生長和孵化率情況。Ohta以手工方式將0.5 mL該溶液注入孵化第0天和第7天的科寶肉雞入孵種蛋的胚胎卵黃囊中。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在孵化的第0天注射氨基酸，入孵種蛋的孵化率顯著降低;在孵化的第7天注射，入孵種蛋的孵化率未受影響，并且出殼雛雞體重相對于未注射時，入孵種蛋的蛋重比有了提高。因此，Ohta等（1999）認為，在孵化的第7天給入孵種蛋的胚胎卵黃囊注射含有與雞蛋本身氨基酸組成相近的氨基酸溶液可以有效提高肉雛雞的出殼體重。

在一項后續(xù)研究中，Ohta等（2001）手工將0.5 mL含有18種純的晶體氨基酸自由基態(tài)的溶液注入孵化第7天的科寶肉雞入孵種蛋的胚胎卵黃囊中。與前期研究相似，氨基酸混合物混懸于無菌蒸餾水中。Ohta等檢測了種蛋、雞胚和雛雞對胚蛋注射氨基酸的反應。與不注射氨基酸的對照組種蛋相比，由注射氨基酸的入孵種蛋所孵出的雛雞出殼時血漿中除谷氨酸和賴氨酸的含量不變外其他氨基酸的水平均下降。此外，入孵種蛋在孵化第7天注入氨基酸溶液后，孵化第19天時胚胎、卵黃、蛋清、尿囊液以及羊膜腔羊水中的氨基酸水平均升高。該研究清晰地證明，在孵化第7天將氨基酸溶液注入入孵種蛋胚胎的卵黃囊可以提高肉雞種蛋胚胎和蛋成分中的氨基酸含量。正如在第二項研究中觀察到的那樣，種蛋和種蛋胚胎組織中氨基酸含量的升高可能與在第一項研究中觀察到的雛雞出殼體重增加有關(guān)。

在孵化的第14天，Bhanja和Mandal（2005）用配置11 mm或24 mm針頭的注射器分別從肉雞種蛋的小頭或大頭手工注入必需氨基酸和非必需氨基酸的混合物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在孵化第14天注入氨基酸混合物可以提高雛雞體重/種蛋重的比值。此外，由注射氨基酸混合物的入孵種蛋孵出的雛雞的采食量以及細胞介導免疫力和體液免疫力均得到了提高，而由注射甘氨酸和脯氨酸混合物或賴氨酸、甲硫氨酸和半胱氨酸混合物的種蛋孵出的雛雞其飼料轉(zhuǎn)化率得到了改善。這些研究人員指出，利用胚蛋注射技術(shù)將氨基酸注入入孵種蛋可以起到非常有效的免疫調(diào)節(jié)作用。

Kadam等（2008）研究了利用胚蛋注射技術(shù)給入孵的肉雞種蛋單獨注射蘇氨酸后對所孵出雛雞的早期生長速度、免疫應答反應和消化酶活性的影響。在孵化第14天，他們用配置24-G針頭的皮下注射器手工將含有10 mg、20 mg、30 mg或40 mg蘇氨酸的0.5 mL生理鹽水從入孵種蛋的小頭注入胚胎的卵黃囊內(nèi)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這些劑量的蘇氨酸均提高了所孵出雛雞28日齡時的體重，其中注射30 mg的蘇氨酸還提高了雛雞體重/種蛋重的比值。雖然出殼雛雞體內(nèi)消化酶的活性未得到明顯的增強，但注射10 mg、20 mg和40 mg的蘇氨酸使出殼雛雞第1周的飼料轉(zhuǎn)化率得到了明顯的改善，注射10 mg、20 mg和30 mg的蘇氨酸增強了雛雞的體液免疫力。這些研究人員總結(jié)道，給入孵種蛋的胚胎注射? ? 20 mg～30 mg的蘇氨酸可以提高雛雞出殼后的生長速度和體液免疫水平。

Zhang等（2018b）最近檢測了利用胚蛋注射技術(shù)給入孵的家鴿種蛋胚胎特異性注射陽離子氨基酸后對種蛋孵化率、出殼雛鴿的體重和組織發(fā)育的影響情況。在孵化的第13天，他們用配置21-G針頭的注射器手工將200 μL添加了陽離子氨基酸混合物的0.75%緩沖鹽溶液注入種蛋胚胎的羊膜腔中，陽離子氨基酸混合物含有純的晶體L-精氨酸、L-賴氨酸和L-組氨酸，濃度分別為0.1%、1.0%和10.0%（相對于它們在鴿蛋中的總含量）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與由僅注入生理鹽水的對照組種蛋孵出的家鴿相比，由注入1.0%氨基酸的處理組種蛋孵出的家鴿相對于去卵黃的出雛體重以及相對于去卵黃出雛體重的心、腎、肝和小腸重量均有所提高。據(jù)推斷，向家鴿入孵種蛋的胚胎羊膜腔內(nèi)注射陽離子氨基酸在提高多種器官的相對重量后可以改善胚胎發(fā)育。

Yu等（2017）最近還探討了在肉雞種蛋孵化的第17.5天僅給胚胎注射L-精氨酸后對雛雞出殼后能量代謝的影響。與Zhang等（2018b）的研究相似，Yu等將0.75%的生理鹽水溶液用作稀釋劑，用配置21-G針頭的注射器手工將其注入入孵種蛋胚胎的羊膜腔內(nèi)。生理鹽水溶液的注射劑量為600 μL而不是200 μL，這顯然是因為雞蛋遠大于鴿蛋而做出的相應調(diào)整。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與由僅注射稀釋劑的對照組種蛋孵出的雛雞相比，由注射L-精氨酸的試驗組種蛋孵出的雛雞出殼時其肝臟和胸肌含有的糖原和葡萄糖水平較高，同時其血漿中葡萄糖和胰島素的水平也較高。此外，在給入孵種蛋的胚胎注射L-精氨酸后，所孵出雛雞在出殼時肝臟中6-磷酸葡萄糖酶的活性得到了提高，磷酸烯醇丙酮酸羧基激酶和果糖-1，6-二磷酸酶mRNA的表達水平也得到提高。由胚胎注射L-精氨酸的種蛋孵出的雛雞在7日齡時肝磷酸烯醇丙酮酸羧基激酶mRNA的相對表達水平有所提高。孵化時給種蛋胚胎注射L-精氨酸，所孵出雛雞在出殼時體內(nèi)糖原合成酶mRNA的表達水平提高，肝臟和胸肌中糖原磷酸化酶的水平下降。這些研究人員認為，給入孵種蛋的胚胎供應L-精氨酸或許可成為提高肉雞肝臟和胸肌中能量儲備以及調(diào)節(jié)早期能量代謝的一種有效策略。該研究結(jié)果也作為Zhang等（2018b）觀察到的入孵種蛋胚胎發(fā)育改善和與之相關(guān)的器官相對重量增加的潛在依據(jù)。

在較早進行的一項研究中，F(xiàn)oye等（2006b）將L-精氨酸注射到孵化第23天的火雞種蛋的胚胎羊膜腔中以檢測精氨酸的生理效應。他們用配置23-G針頭的注射器手工將含0.7% L-精氨酸的0.4%生理鹽水溶液注入入孵種蛋的胚胎羊膜腔中。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然精氨酸沒有影響所孵出雛火雞從出殼到14日齡的體重，但它在與HMB聯(lián)合使用（同樣通過胚蛋注射注入）時，所孵出雛火雞血漿中IGF-I的水平在出殼、3日齡以及7日齡時均得到了提高。在相同時間點上，它還提高了雛火雞血漿中IGF-Ⅱ的水平。然而，當給入孵種蛋的胚胎注射HMB時，所孵出雛火雞的該項指標下降。此外，給入孵種蛋的胚胎注射精氨酸后，所孵出雛火雞在出殼時肝臟中6-磷酸葡萄糖酶的水平得到了提高，但是在生長到7日齡時下降。相反，給入孵種蛋的胚胎注射精氨酸，所孵出雛火雞肝臟中的總糖原水平僅在出殼時有所提高。該結(jié)果表明，通過胚蛋注射技術(shù)給入孵種蛋注射L-精氨酸能夠在不影響所孵出雛火雞胰島素分泌水平的情況下提高肝臟中的能量儲備，從而可以為雛火雞出殼后的早期生長提供額外的能量。

HMB是亮氨酸的一種代謝產(chǎn)物，是α-酮異己酸（L-亮氨酸分解產(chǎn)生的一種酮酸）氧化產(chǎn)生的天然產(chǎn)物，已被用作提高人類肌肉質(zhì)量和力量以及瘦肉組織質(zhì)量的食品添加劑。在檢測給入孵種蛋胚胎注射0.7% L-精氨酸對雛火雞相關(guān)指標影響的同一篇論文中，F(xiàn)oye等（2006b）測定了在火雞種蛋孵化第23天手工將HMB注入胚胎羊膜腔內(nèi)后所孵出雛火雞的體重以及肌肉和肝臟中糖原含量受影響情況。Foye等將HMB（0和0.1%）與卵清蛋白（0和18%）以不同劑量組合使用。與不注射HMB和卵清蛋白的對照組種蛋孵出的雛火雞相比，給入孵種蛋的胚胎單獨注射0.1% HMB或與卵清蛋白聯(lián)合注射，所孵出雛火雞的出殼體重得到了提高，并且單獨注射HMB還可以提高雛火雞7日齡時的體重。單獨注射HMB或HMB與卵清蛋白聯(lián)合注射不會影響雛雞出殼或7日齡時胸肌的相對重量或肝臟重，但是單獨注射HMB可以提高雛火雞出殼時肝臟中的糖原含量，并能夠提高出殼和7日齡時胸肌中的肌糖原總含量。Foye等認為：單獨注射HMB可能會刺激入孵種蛋胚胎釋放胰島素或胰島素樣生長因子;當與卵清蛋白聯(lián)合注射時，可通過提高入孵種蛋胚胎對氨基酸的吸收和利用而增加肌肉的沉積。

Tako等（2004）也探討了在孵化第17.5天給“羅斯×羅斯”肉雞的入孵種蛋胚胎注射HMB后產(chǎn)生的效應。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用配置21-G針頭的注射器將1.0 mL HMB溶液（在5 g/L的NaCl溶液中按1 g/L的水平添加HMB）注入入孵種蛋胚胎羊膜腔內(nèi)，能提高所孵出雛雞的體重，同時使雛雞腸道絨毛平均表面積提高45%。該研究結(jié)果表明：HMB能夠促進雛雞腸道的發(fā)育，繼而可以加快肉雞的生長。隨后，Uni等（2005）證明，給入孵種蛋的胚胎注射HMB能夠提高所孵出雛雞的出殼體重、肝臟糖原水平和胸肌的相對重量。

3? 多肽

Peebles等（2001）在肉種雞入孵種蛋孵化第18天按600 μg/kg的劑量給種蛋的氣室注射100 μL的多肽YY激素（Peptide YY，PYY）或表皮生長因子（Epidermal Growth Factor，EGF），并測定這些處理對出殼雛雞的生長、卵黃吸收和卵柄功能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然EGF可以提高回腸濕重/雛雞體重和回腸濕重/回腸漿膜干物質(zhì)重的比值，但是PYY或EGF均不會影響雛雞在出殼后5 d中對卵黃的吸收和卵柄的功能。然而，當對卵黃轉(zhuǎn)化和器官或組織質(zhì)量的影響進行評估時，更為精密的組織學評估揭示EGF對雛雞腸道上皮細胞的影響不明顯。因此，這證明有必要進行進一步的研究，以探索對肉用種雞種蛋胚胎和所孵出雛雞的潛在影響，尤其是對那些采用不同應激日糧和生理學飼喂策略的雛雞的作用。

Dalloul等（2005）利用胚蛋注射技術(shù)在白來杭雞入孵種蛋孵化第18天通過向胚胎羊膜腔中注射柔嫩艾美耳球蟲重組微線體蛋白，測定了重組微線體蛋白產(chǎn)生的抗艾美耳球蟲感染的預防效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當給入孵種蛋胚胎注射100 μL含100 μg 重組微線體蛋白的無菌磷酸鹽緩沖生理鹽水時，所孵出雛雞在感染柔嫩艾美耳球蟲后的9 d中持續(xù)減少球蟲卵排出量。在感染柔嫩艾美耳球蟲后，與不注射重組微線體蛋白的對照組種蛋所孵出的雛雞相比，種蛋注射重組微線體蛋白還可以提高所孵出雛雞的體液免疫應答反應水平。該研究結(jié)果證明，給入孵種蛋的胚蛋注射重組微線體蛋白能夠有效地減少雛雞在感染球蟲后對外排出的球蟲卵數(shù)量。

原題名：In ovo applications in poultry： a review（英文）

原作者：E. D. Peebles（美國密西西比州立大學）