家禽胚蛋注射技術(shù)的應(yīng)用研究(綜述)

賈良梁　夏俊花

摘? 要：益生菌可以是一種活菌制劑，也可以是細(xì)菌的代謝產(chǎn)物，它可以通過改變或重建動(dòng)物腸道微生物菌群的組成來提高宿主的健康水平。益生元是植物中不能被宿主（動(dòng)物）體內(nèi)的酶分解的非淀粉多糖，能通過選擇性刺激動(dòng)物腸道微生物菌群的生長(zhǎng)與活性對(duì)宿主產(chǎn)生有益的影響，從而改善宿主的健康水平。益生菌和益生元已經(jīng)在畜牧生產(chǎn)中得到廣泛的應(yīng)用，一般經(jīng)口補(bǔ)給，而胚胎供應(yīng)或?qū)⒊蔀榻o家禽添加益生菌或益生元的新途徑，擴(kuò)展其在動(dòng)物保健方面的新功能。

關(guān)鍵詞：益生菌;益生元;胚蛋注射技術(shù)

中圖分類號(hào)：S815 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：C 文章編號(hào)：1001-0769（2020）02-0001-02

1? 競(jìng)爭(zhēng)性排斥培養(yǎng)物——益生菌

在對(duì)出殼肉雛雞經(jīng)口腔人工感染 1×103 CFU、1×105 CFU或1×107 CFU鼠傷寒沙門氏菌耐萘啶酮酸菌株之前，Cox等（1992）利用胚蛋注射技術(shù)將一種未純化的厭氧培養(yǎng)的競(jìng)爭(zhēng)性排斥培養(yǎng)物注射到即將出殼的入孵種蛋胚胎中，并檢測(cè)了其潛在保護(hù)效力。在孵化第18天，Cox等將分離自健康成年雞盲腸的該培養(yǎng)物按1∶1 000或1∶1 000 000稀釋，隨后取100 μL稀釋液手工注射到種蛋的氣室中。由于在一些已完成的試驗(yàn)中種蛋的孵化率達(dá)到了商業(yè)生產(chǎn)可接受水平，同時(shí)用培養(yǎng)物處理的試驗(yàn)雛雞能夠抵抗鼠傷寒沙門氏菌的攻毒，說明向入孵種蛋胚胎內(nèi)注射競(jìng)爭(zhēng)性排斥培養(yǎng)物可能成為給生活在污染環(huán)境中的雞提供抵抗沙門氏菌感染保護(hù)力的實(shí)用手段。

1997年，Meijerhof和Hulet報(bào)道了3項(xiàng)向入孵種蛋胚胎注射競(jìng)爭(zhēng)性排斥培養(yǎng)物作為防止肉雞種蛋感染巴拿馬沙門氏菌保護(hù)措施潛在作用的試驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)所用培養(yǎng)物含有多種未披露的精心挑選的細(xì)菌混合物。研究人員在孵化第18天用配置20-G針頭的注射器將含有1 mg干培養(yǎng)物的? ?0.2 mL液體手工注射到入孵種蛋的氣室或胚體中。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，將培養(yǎng)物注入氣室可導(dǎo)致種蛋的孵化率下降，而注入胚體則可導(dǎo)致入孵種蛋的孵化率幾乎降為0。氣室注射帶來的影響是雛雞出殼后1周內(nèi)的死亡率提高，其原因是卵黃吸收量減少。雖然試驗(yàn)期間采用了無菌操作，但是這些研究人員認(rèn)為雛雞出殼后第1周卵黃的吸收量減少是由于胚胎感染了較多的細(xì)菌。這可能與細(xì)菌通過入孵種蛋大頭端的孔侵入蛋中，最終經(jīng)內(nèi)層蛋殼膜進(jìn)入胚胎有關(guān)。然而，保持蛋殼孔敞開是商業(yè)生產(chǎn)中的常規(guī)做法，胚蛋注射可以通過此孔進(jìn)行。4周齡時(shí)，孵化期間經(jīng)氣室注射該培養(yǎng)物的雛雞體內(nèi)巴拿馬沙門氏菌污染水平與空白對(duì)照組雛雞的污染水平相接近，但是高于出殼時(shí)口服接種該培養(yǎng)物的雛雞的污染水平。

在最近的一項(xiàng)研究中，Teague等（2017）通過給白來航雞和肉雞接種火雞皰疹病毒（Herpesvirus of Turkey，HVT）疫苗評(píng)估了一種分離自家禽腸胃內(nèi)容物的成分明確的益生菌培養(yǎng)物對(duì)提高雞抵抗馬立克氏病（Marek's Disease，MD）和腸炎沙門氏菌感染的能力。在孵化第18天，他們向入孵種蛋的胚胎羊膜腔中人工注射含有或不含HVT疫苗的1×104 CFU FloraMax?-B11乳酸菌，試驗(yàn)雛雞在出殼當(dāng)日經(jīng)口接種腸炎沙門氏菌。在不影響入孵種蛋孵化率的同時(shí)，該益生菌降低了雛雞體內(nèi)乳糖陽性革蘭氏陰性菌的水平以及腸炎沙門氏菌的感染率。他們的結(jié)論是，在不影響種蛋孵化率或HVT疫苗對(duì)MD的預(yù)防效果的情況下，F(xiàn)loraMax?-B11能提高雛雞抗腸炎沙門氏菌感染的能力，并且能夠提高雛雞出殼后前7 d的體重。

Oliveira等（2014）利用胚蛋注射技術(shù)將由枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）和屎腸球菌（Enterococcus faecium）組成的益生菌注入羅斯308肉雞的入孵種蛋胚胎中，以此研究該益生菌預(yù)防雛雞感染腸炎沙門氏菌的效果。在孵化第17.5天，他們用配置22-G針頭的注射器將該益生菌手工注入入孵種蛋的胚胎中。在所孵出雛雞4日齡時(shí)，他們用0.4 mL含1×106 CFU腸炎沙門氏菌的液劑對(duì)雛雞經(jīng)口攻毒。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胚胎注射屎腸球菌可以減少腸炎沙門氏菌陽性的雛雞數(shù)，這表明益生菌在胚胎中的定植能夠使雛雞有效抵抗腸道菌的感染。與之類似，Triplett等（2017）同樣將枯草芽孢桿菌用作自動(dòng)化商業(yè)性胚蛋注射所用益生菌的菌種，同時(shí)還將嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）和動(dòng)物雙歧桿菌（Bifidobacterium animalis）用作益生菌菌種。在種蛋孵化的第18天，研究人員將上述任意一種細(xì)菌按1×103 CFU、1×104 CFU、1×105 CFU或1×106 CFU稀釋的液劑（50 mL）注入肉雞入孵種蛋的胚胎羊膜腔中。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌顯著降低了種蛋的孵化率，種蛋孵化率隨著枯草芽孢桿菌注入濃度的升高而下降，當(dāng)枯草芽孢桿菌的濃度提高到1×105 CFU時(shí)，種蛋的孵化率降低至1.67%。然而，嗜酸乳桿菌或動(dòng)物雙歧桿菌的注射濃度達(dá)到1×106 CFU時(shí)，種蛋的孵化率未受影響。嗜酸乳桿菌的注射濃度為1×106 CFU時(shí)，入孵種蛋的孵化殘毒分析結(jié)果未受影響，當(dāng)向入孵種蛋注入1×105 CFU或1×106 CFU的動(dòng)物雙歧桿菌時(shí)，死雛和污染蛋的比例提高。因此，他們認(rèn)為嗜酸乳桿菌和動(dòng)物雙歧桿菌（而非枯草芽孢桿菌）是適合用作注入肉雞入孵種蛋胚胎的益生菌。

2? 益生元

在種蛋孵化的第12天，Sobolewska等（2017）利用胚蛋注射技術(shù)將商品化益生元產(chǎn)品DiNovo?注入種蛋的氣室中，以此測(cè)定其對(duì)羅斯308肉雞21日齡時(shí)的生產(chǎn)性能和多種腸組織形態(tài)學(xué)參數(shù)的影響。DiNovo?是海帶屬海藻的提取物，含有一定數(shù)量的昆布多糖和墨角藻聚糖。在動(dòng)物體內(nèi)，昆布多糖具有免疫調(diào)節(jié)的活性，墨角藻聚糖則具有抗病毒和抗菌的特性。對(duì)照組的入孵種蛋僅注入0.2 mL生理鹽水，試驗(yàn)組的入孵種蛋注射相同體積的含0.88 mg DiNovo?的溶液。對(duì)42日齡雛雞檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，益生元對(duì)多種生產(chǎn)性能參數(shù)無影響，但是對(duì)21日齡雛雞腸道的組織形態(tài)學(xué)有不同影響。在雛雞21日齡時(shí)，雖然DiNovo?未影響試驗(yàn)組雛雞十二指腸的重量、長(zhǎng)度、橫斷面積或直徑，但是提高了十二指腸的肌肉層厚度、絨毛寬度和隱窩深度。雛雞42日齡時(shí)，DiNovo?處理組雛雞的十二指腸絨毛的高度、寬度和橫斷面積均小于對(duì)照組雛雞的。Sobolewska等只能推斷出向入孵種蛋的胚胎注射益生元DiNovo?只會(huì)影響出殼肉用雛雞十二指腸的組織形態(tài)學(xué)特征，不會(huì)影響它們的生長(zhǎng)性能。

原題名：In ovo applications in poultry： a review （英文）

原作者：E. D. Peebles（美國(guó)密西西比州立大學(xué)）