酶聯(lián)免疫法在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展

林光強(qiáng)

本文介紹酶聯(lián)免疫法在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中的應(yīng)用研究情況。對(duì)酶聯(lián)免疫法的原理，以及在獸藥殘留、農(nóng)藥殘留、生物毒素檢測(cè)中的應(yīng)用作了具體的介紹。并闡述了酶聯(lián)免疫法在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中的應(yīng)用前景。

農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的保障，一方面靠農(nóng)業(yè)生產(chǎn)者的自律，另一方面更需要檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的支撐。目前農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)主要有快速檢測(cè)和定量檢測(cè)?？焖贆z測(cè)技術(shù)更適宜于基層監(jiān)管機(jī)構(gòu)、檢測(cè)機(jī)構(gòu)和農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)者使用，它具有相對(duì)簡(jiǎn)單的操作流程和技術(shù)要求。

一、酶聯(lián)免疫法的原理

酶聯(lián)免疫法簡(jiǎn)稱酶標(biāo)法（英文簡(jiǎn)稱ELISA），是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)，自70年代初問世以來，迅速發(fā)展，現(xiàn)在已廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)等多個(gè)方面。酶聯(lián)免疫法的原理是：抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，利用產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，從而進(jìn)行定性或者定量分析。酶聯(lián)免疫法常用的檢測(cè)儀器是酶標(biāo)儀，主要有兩種常見類型手動(dòng)型和全自動(dòng)型。手動(dòng)型靠手動(dòng)移動(dòng)微孔板來進(jìn)行檢測(cè)，一般為單通道型，儀器小巧，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。全自動(dòng)型酶標(biāo)儀，一般采用多通道，是在手動(dòng)單通道的基礎(chǔ)上發(fā)展而來，運(yùn)用微機(jī)處理系統(tǒng)，檢測(cè)精度高、重復(fù)性好、速度快。

二、酶聯(lián)免疫法在獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

隨著規(guī)?；B(yǎng)殖的逐漸擴(kuò)大，養(yǎng)殖生產(chǎn)中獸藥的使用會(huì)越來越多。不規(guī)范使用獸藥和違規(guī)使用獸藥的現(xiàn)象日益突出。特別是一些違禁獸藥的使用會(huì)對(duì)人體造成極大的傷害，輕者出現(xiàn)過敏、惡心、嘔吐，重者甚至出現(xiàn)中毒，引發(fā)生命危險(xiǎn)。常規(guī)實(shí)驗(yàn)中畜禽水產(chǎn)品中檢測(cè)獸藥殘留的方法一般是采用液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，這兩類方法都需要昂貴的儀器設(shè)備，相對(duì)復(fù)雜的前處理過程，需要較多的時(shí)間，較高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)水平。而酶聯(lián)免疫法與其相比具有儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、前處理過程少、時(shí)間短，適合基層人員在日常工作開展中應(yīng)用。

畜禽產(chǎn)品檢測(cè)中酶聯(lián)免疫法的應(yīng)用情況。李亞楠等采用酶聯(lián)免疫法對(duì)動(dòng)物組織中呋喃妥因代謝物殘留進(jìn)行檢測(cè)，豬肉、雞肉回收率在82.6%～104.7%，檢出限為0.115、0.113μg/kg，該方法適合豬肉、雞肉樣品的檢測(cè)。楊燕燕采用酶聯(lián)免疫法對(duì)豬尿、豬肉和豬肝中鹽酸克倫特羅進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在豬尿中鹽酸克倫特羅的方法比較成熟，回收率可滿足需要，豬肉中鹽酸克倫特羅方法回收率偏低，基本可以滿足需要，但是在豬肝中鹽酸克倫特羅方法存在一定的差異，需要進(jìn)一步改進(jìn)。蜂蜜中采用酶聯(lián)免疫法可檢測(cè)四環(huán)素族抗生素、泰樂菌素、氯霉素殘留，并有相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)可以參考。

水產(chǎn)品檢測(cè)中酶聯(lián)免疫法的應(yīng)用情況。張勝幫等采用酶聯(lián)免疫分析法對(duì)水產(chǎn)品中氯霉素殘留量進(jìn)行了檢測(cè)，樣品回收率為92.5%～102.0%，檢出限為0.009ng/ml，變異系數(shù)為3.0%，相對(duì)偏差為3.4%～7.1%，該方法適合水產(chǎn)品中氯霉素殘留的檢測(cè)。鄭百芹等采用酶聯(lián)免疫法開發(fā)了一種快速檢測(cè)魚肉中喹諾酮類藥物的試劑盒，并檢測(cè)了魚肉樣品中氧氟沙星、環(huán)丙沙星、氨氟沙星3種喹諾酮類藥物，樣品檢測(cè)限為1μg/kg，批內(nèi)、批間相對(duì)偏差均小于10%，該方法可適合魚肉樣品的檢測(cè)。

三、酶聯(lián)免疫法在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

農(nóng)藥殘留超標(biāo)中毒事件，在我國(guó)時(shí)有發(fā)生，而在出口貿(mào)易中存在農(nóng)藥殘留超標(biāo)引發(fā)貿(mào)易受阻的問題也屢見不鮮。農(nóng)藥殘留對(duì)我國(guó)蔬菜產(chǎn)品的質(zhì)量安全和人民的健康安全具有重要的影響。果蔬中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法常用酶抑制率法和酶聯(lián)免疫法。酶抑制率法方法比較成熟，但是只能用于定性判定，而且由于樣品取樣和操作的影響，檢測(cè)結(jié)果相對(duì)誤差比較大，重復(fù)性差。農(nóng)殘檢測(cè)常用的定量檢測(cè)方法一般是氣相色譜法、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，準(zhǔn)確度高，前處理過程復(fù)雜，儀器設(shè)備昂貴，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)。酶聯(lián)免疫法檢測(cè)過程簡(jiǎn)單，可以大量快速篩查，目前許多國(guó)際權(quán)威分析檢測(cè)農(nóng)藥都首選這種方法，并且很多農(nóng)藥類別都建立了酶聯(lián)免疫法。

曾俊源等采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定了桃中氰戊菊酯，回收率在81%～106%，相對(duì)偏差5.1%～7.7%，檢出限為0.014mg/kg，該方法可用于桃中氰戊菊酯快速的定量測(cè)定。華修德采用酶聯(lián)免疫法對(duì)卷心菜、蘋果、青菜樣品中的甲基對(duì)硫磷、對(duì)硫磷、殺螟硫磷單個(gè)農(nóng)藥進(jìn)行了測(cè)定，回收率在78.9%～118.1%之間，并用氣相色譜法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了比較驗(yàn)證，兩種分析方法的測(cè)定結(jié)果接近，表明該方法可以用于檢測(cè)不同樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留檢測(cè)。

四、酶聯(lián)免疫法在生物毒素檢測(cè)中的應(yīng)用

生物毒素是由于微生物新陳代謝過程中產(chǎn)生的具有危害身體健康的物質(zhì)。其中的一些種類對(duì)人類危害較大，是食品污染最重要污染因素之一，而毒性最大、致癌能力強(qiáng)當(dāng)屬黃曲霉毒素，它在小麥、玉米、稻米、茶葉等農(nóng)作物產(chǎn)品中最易感染，且不易察覺。黃曲霉毒素是一種具有雙呋喃環(huán)和氧雜萘鄰?fù)膹?fù)雜結(jié)構(gòu)，已發(fā)現(xiàn)有B1、B2、G1、G2、M1、P1等17種多結(jié)構(gòu)亞型化合物，其中以B1結(jié)構(gòu)的黃曲霉毒素毒性最強(qiáng)，理化性質(zhì)穩(wěn)定，因此目前世界上都將黃曲霉毒素B1檢出量作為食品黃曲霉污染和評(píng)價(jià)安全的重要指標(biāo)。黃曲霉毒素常用的定量測(cè)定方法是高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，測(cè)量準(zhǔn)確度高，但是儀器設(shè)備價(jià)格昂貴，實(shí)驗(yàn)技術(shù)水平要求高，時(shí)間長(zhǎng)。而酶聯(lián)免疫法相比具有儀器設(shè)備便宜，操作簡(jiǎn)便，時(shí)間短的優(yōu)勢(shì)。

Stachowiak等采用酶聯(lián)免疫法建立了檢測(cè)黃曲霉毒素B1直接競(jìng)爭(zhēng)法，通過對(duì)單克隆抗體準(zhǔn)確度的實(shí)驗(yàn)確定了兩種單克隆抗體，半抑制濃度分別是0.037ng/ml和0.031ng/ml，該方法可以用于黃曲霉毒素B1的快速刷查。謝琿等采用酶聯(lián)免疫法建立了黃曲霉毒素B1間接競(jìng)爭(zhēng)法，回收率在85%～120%內(nèi)，檢測(cè)限為1.04μg/l，可用于實(shí)際樣品的快速檢測(cè)。

農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全隨著我國(guó)社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展會(huì)越來越重要，覆蓋各個(gè)層次的監(jiān)管機(jī)構(gòu)、檢測(cè)體系也會(huì)更加完善，基層監(jiān)管、檢測(cè)機(jī)構(gòu)和農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)主體在實(shí)際工作中對(duì)于快速準(zhǔn)確的檢測(cè)方法需求會(huì)更加明顯。酶聯(lián)免疫法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、成本低，設(shè)備簡(jiǎn)單，不需要專業(yè)的人員操作，就可以快速檢測(cè)，該方法必將在基層得到大量廣泛的使用，為我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全生產(chǎn)貢獻(xiàn)重要力量。

（作者單位：638400四川省廣安市武勝縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)檢測(cè)站）