不同照射下核黃素-A 波紫外線交聯(lián)術(shù)后早期對(duì)兔鞏膜成纖維細(xì)胞影響

韓寶雁，米強(qiáng)，賈冠美

（1.廊坊愛(ài)爾眼科醫(yī)院，河北 冀州 065000；2.定州市人民醫(yī)院，河北 定州 065000；3.保定市第二中心醫(yī)院，河北 涿州 065000）

0 引言

近視是現(xiàn)代人的常見(jiàn)疾病，且患病率不斷提升。近視的發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，有環(huán)境因素與遺傳因素的共同參與[1]。鞏膜生物力學(xué)改變會(huì)導(dǎo)致鞏膜產(chǎn)生重塑的病理變化，導(dǎo)致眼軸長(zhǎng)度增加。鞏膜主要是由成纖維細(xì)胞構(gòu)成，其力學(xué)特征以及信號(hào)通路的變化在近視發(fā)病機(jī)制中起到了重要的作用[2]。鞏膜交聯(lián)術(shù)是近些年來(lái)臨床新研發(fā)的一種術(shù)式，主要是通過(guò)改變鞏膜生物力學(xué)特性，從而預(yù)防鞏膜擴(kuò)張，能夠有效改善近視癥狀[3]。目前該術(shù)式主要采用了不同的照射方式，本次研究主要針對(duì)兩種照射方式的應(yīng)用效果展開(kāi)分析，研究如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。隨機(jī)分組法將24 只兔分為A、B 兩組，每組12 只，均為醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室提供。每組選取左眼為實(shí)驗(yàn)眼，選取右眼為對(duì)照眼。

1.2 方法。兩組實(shí)驗(yàn)兔均行核黃素-A 波紫外線交聯(lián)術(shù)，具體方法為：使用注射水合氯醛合劑作為麻醉劑，用量為3 mL/kg，常規(guī)腹腔注射；固定好兔頭位置后使用開(kāi)瞼器開(kāi)瞼，然后使用0.1%丁卡因眼液；分離球結(jié)膜與筋膜，然后在角膜緣使用6-0 縫線做一條牽引線并向顳下拉，充分暴露鼻上方鞏膜，使用薄棉片覆蓋角膜，然后在暴露的部位滴入0.1%核黃素5-磷酸鈉溶液，浸潤(rùn)5 min，之后使用外線燈照射，A組的照射時(shí)間為30 min，功率為3.0 mW/cm2，B 組的照射時(shí)間為9 min，功率為10.0 mW/cm2。間隔2 min 滴入0.1%核黃素5-磷酸鈉溶液避免鞏膜水分下降。之后拆除牽引線并復(fù)位結(jié)膜與筋膜，術(shù)后常規(guī)使用氯霉素眼藥水和紅霉素眼膏。

1.3 觀察指標(biāo)。觀察兩組兔術(shù)后早期1 d、7 d、30 d 鞏膜成纖維細(xì)胞生物力學(xué)變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用SPSS 16.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

兩組兔實(shí)驗(yàn)眼與對(duì)照眼鞏膜細(xì)胞楊氏模量與表觀黏性明顯提升（P＜0.05），但是兩組間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這說(shuō)明不同照射方式對(duì)實(shí)驗(yàn)兔鞏膜細(xì)胞的影響無(wú)較大差異，見(jiàn)表1、表2。

表1 A 組鞏膜成纖維細(xì)胞生物力學(xué)改變

表1 A 組鞏膜成纖維細(xì)胞生物力學(xué)改變

時(shí)間 組別 E ∞/kPa E0/kPa u/kPa·s-1 細(xì)胞直徑（um）術(shù)后1 d 實(shí)驗(yàn)眼 0.26±0.10 0.65±0.17 3.81±1.23 12.08±1.68對(duì)照眼 0.15±0.08 0.53±0.24 1.75±1.06 11.75±1.58術(shù)后7 d 實(shí)驗(yàn)眼 0.32±0.14 0.71±0.21 4.22±1.32 12.84±1.78對(duì)照眼 0.20±0.11 0.60±0.25 2.23±1.21 12.05±1.74術(shù)后30 d 實(shí)驗(yàn)眼 0.56±0.15 0.82±0.25 5.26±1.45 13.62±1.25對(duì)照眼 0.32±0.13 0.71±0.27 3.25±1.35 12.65±1.88

表2 B 組鞏膜成纖維細(xì)胞生物力學(xué)改變

表2 B 組鞏膜成纖維細(xì)胞生物力學(xué)改變

時(shí)間 組別 E ∞/kPa E0/kPa u/kPa·s-1 細(xì)胞直徑（um）術(shù)后1 d 實(shí)驗(yàn)眼 0.27±0.11 0.66±0.16 3.80±1.24 12.21±1.56對(duì)照眼 0.14±0.10 0.52±0.23 1.74±1.10 11.65±1.58術(shù)后7 d 實(shí)驗(yàn)眼 0.33±0.15 0.73±0.24 4.21±1.35 12.79±1.69對(duì)照眼 0.22±0.13 0.61±0.23 2.20±1.20 12.12±1.36術(shù)后30 d 實(shí)驗(yàn)眼 0.58±0.17 0.84±0.27 5.27±1.44 13.59±1.78對(duì)照眼 0.36±0.13 0.70±0.26 3.26±1.32 12.54±1.56

3 討論

隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及人們生活方式的改變，人們?cè)诠ぷ魃钜约皩W(xué)習(xí)中常需要使用電腦以及各種電子產(chǎn)品，這就導(dǎo)致近視的發(fā)生率不斷的升高。近視稱(chēng)為現(xiàn)代社會(huì)中的常見(jiàn)疾病，有研究指出，美國(guó)近視患病率超過(guò)30%，而亞洲近視患病率約為美國(guó)的2 倍，尤其是高度近視引起的眼軸延長(zhǎng)以及鞏膜葡萄腫，增加了近視患者失明風(fēng)險(xiǎn)[3]。為了有效避免近視患者發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥，需要積極采取有效的治療措施。

膠原交聯(lián)法是一種提高生物組織強(qiáng)度的方法，隨著核黃素A-波紫外線角膜膠原交聯(lián)術(shù)的提出，其被臨床證實(shí)為是一種有效的治療方法[4]。由于鞏膜與角膜的生物結(jié)構(gòu)存在一定的共同點(diǎn)，因此采用該方法治療高度近視成為臨床研究的重要課題。膠原交聯(lián)法主要是指膠原分子內(nèi)部與膠原分子之間通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合從而提高膠原纖維的張力和穩(wěn)定性。目前主要是采用紫外線照射，尤其是370 nm 的紫外線A。其能有效激發(fā)核黃素的三線態(tài)，從而產(chǎn)生活性氧族（ROS）。ROS主要包括了超氧化物、單線態(tài)氧以及超氧陰離子自由基等，能夠與多種分子產(chǎn)生反應(yīng)，從而引起化學(xué)交聯(lián)反應(yīng)，能夠提升膠原纖維的機(jī)械強(qiáng)度，從而避免膠原纖維的擴(kuò)張，同時(shí)提升膠原纖維的耐熱性能[5]。而臨床研究發(fā)現(xiàn)，交聯(lián)在人體生長(zhǎng)過(guò)程中也有相同的表現(xiàn)，例如隨著年齡的增長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生糖基化交聯(lián)，從而導(dǎo)致角膜膠原纖維直徑改變；晶狀體也會(huì)隨著年齡的增加其蛋白分子量與硬度也不斷增長(zhǎng)，這也是老年人群容易產(chǎn)生青光眼的重要因素。由此可見(jiàn)，核黃素-UVA 鞏膜交聯(lián)術(shù)對(duì)于鞏膜疾病也有較好的治療效果，可在高度近視臨床治療中應(yīng)用。

臨床研究發(fā)現(xiàn)無(wú)論是近視還是高度近視人群，鞏膜生物力學(xué)均發(fā)生了較大的而改變，其與正常人群相比，承載能力較低且更加容易變形。有研究指出近視眼鞏膜膠原含量與正常人群相比明顯減少，從而降低了鞏膜的承載力，更容易發(fā)生變形的情況。因此本次研究中主要通過(guò)觀察實(shí)驗(yàn)兔鞏膜成纖維細(xì)胞生物力學(xué)性能改評(píng)價(jià)不同照射方式的效果。本次研究主要針對(duì)不同照射方式的療效展開(kāi)對(duì)照分析，A 組的照射時(shí)間為30 min，功率為3.0 mW/cm2，B 組的照射時(shí)間為9 min，功率為10.0 mW/cm2，結(jié)果顯示兩組兔實(shí)驗(yàn)眼與對(duì)照眼鞏膜細(xì)胞楊氏模量與表觀黏性明顯提升（P＜0.05），但是兩組間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這說(shuō)明不同照射方式對(duì)實(shí)驗(yàn)兔鞏膜細(xì)胞的影響無(wú)較大差異，由此可見(jiàn)這兩種照射方式局能能夠改變鞏膜成纖維細(xì)胞的生物力學(xué)特性，且兩種方式之間所造成的影響無(wú)明顯差異，無(wú)論采取那種方式均可達(dá)到相似的效果[6]。但是由于本次研究實(shí)驗(yàn)數(shù)量較小，仍舊需要擴(kuò)大樣本數(shù)量進(jìn)行進(jìn)一步的觀察，從而減少數(shù)量誤差。

綜上所述，不同照射方式都能夠提升鞏膜成纖維細(xì)胞的生物力學(xué)指標(biāo)，但是對(duì)其造成的影響無(wú)明顯差異。