基于QuEChERS-氣相色譜法測定平菇中蟲螨腈殘留研究

甘玉晶

摘要? ? 本文采用QuEChERS方法凈化，建立了氣相色譜法/電子捕獲檢測器（GC/ECD）檢測平菇中蟲螨腈殘留的分析方法。樣品用乙腈提取，提取液經(jīng)含50 mg PSA、50 mg C18EC、50 mg GCB、150 mg MgSO4的2 mL凈化管凈化，GC/ECD檢測，標(biāo)準(zhǔn)溶液外標(biāo)法定量。蟲螨腈在0.01～0.50 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 32，方法檢出限為0.001 mg/kg，方法定量限為0.003 mg/kg。0.02、0.05、0.10、0.20 mg/kg 4個(gè)含量水平的添標(biāo)回收率在88.5%～105.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在3.11%～5.22%之間，本方法簡便、快速、準(zhǔn)確，能夠滿足平菇中蟲螨腈殘留檢測的需要。采用該方法測定了蟲螨腈在平菇中的殘留量，結(jié)果滿意。

關(guān)鍵詞? ? QuEChERS;GC/ECD;平菇;蟲螨腈

蟲螨腈（Chlorfenapyr，CAS號(hào)122453-73-0），又名溴蟲腈，分子式C15H11BrClF3N2O，分子量437.2，是新型吡咯類殺蟲殺螨劑，具有觸殺、胃毒作用，同時(shí)有一定的內(nèi)吸作用。蟲螨腈具有殺蟲譜廣、防效高及持效長的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于蔬菜、茶葉、水果、食用菌等農(nóng)產(chǎn)品上。

蟲螨腈持效長，在農(nóng)產(chǎn)品中的半衰期較長，容易造成殘留，危害農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全，在《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）中規(guī)定了蔬菜、水果、茶葉中的最大殘留限量[1]，因而開展農(nóng)產(chǎn)品中蟲螨腈殘留檢測研究具有重要意義。目前，蟲螨腈殘留的檢測方法主要有氣相色譜法[2-5]、高效液相色譜法[6-9]、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[10-14]等。

食用菌含有豐富的蛋白質(zhì)和氨基酸，是一類有機(jī)、營養(yǎng)、保健的綠色食品。平菇作為食用菌中的主要種植品種，物美價(jià)廉，口感好，深受人們的喜愛。由于平菇生產(chǎn)中采收期較長，單朵菇生長快，生長分散不集中，在栽培生產(chǎn)過程中易受病蟲害危害，需使用農(nóng)藥進(jìn)行病蟲害防治。這樣以來，容易造成農(nóng)藥殘留?；赒uEChERS-氣相色譜法測定平菇中蟲螨腈殘留方法的研究未見報(bào)道。本文研究建立QuEChERS測定平菇中蟲螨腈殘留的方法，該方法操作簡單、快速、準(zhǔn)確可靠、靈敏度高、實(shí)用性強(qiáng)，可為控制平菇中蟲螨腈的殘留危害和保護(hù)人民食品安全提供可靠的檢測手段。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗(yàn)材料

1.1.1? ? 供試樣品。供試樣品為平菇，購自廈門市農(nóng)貿(mào)市場。

1.1.2? ? 主要儀器設(shè)備。Agilent 7890A氣相色譜儀帶微池電子捕獲檢測器（μECD）及工作站（美國Agilent公司），HITACHI CF16RXⅡ離心機(jī)（日本日立公司），ZZDCH16水浴氮吹儀（廣州智真公司），VORTEX GENIUS 3渦旋混合器（德國IKA公司），SCDEALL VX-Ⅲ多管渦旋振蕩器，PL602-S電子天平（梅特勒-托利多公司）。

1.1.3? ? 試劑、材料。QuEChERS萃取鹽包（Part No.5982-7555，內(nèi)含1.5 g NaCl、6.0 g MgSO4，美國Agilent公司）;QuEChERS凈化管A（Part No.5982-5122CH，2 mL，內(nèi)含50 mg PSA、50 mg C18EC、50 mg GCB、150 mg MgSO4）;QuEChERS凈化管B（Part No.5982-5421CH，2 mL，內(nèi)含50 mg PSA、50 mg C18EC、150 mg MgSO4）;乙腈、丙酮、正己烷、甲醇，均為色譜純?cè)噭绹鳷EDIA公司生產(chǎn);氯化鈉，為優(yōu)級(jí)純上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.1.4? ? 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液。蟲螨腈農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所（天津），質(zhì)量濃度為1 000.0 mg/L。首先以丙酮+正已烷（10+90）配制成100.0 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液，再用丙酮+正已烷（10+90）將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋分別配制成濃度為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2? ? 試驗(yàn)方法

1.2.1? ? 樣品制備。平菇樣品取樣按《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）附錄A[1]執(zhí)行，將整朵菇切碎，放入組織搗碎機(jī)攪碎充分混勻，制成待測樣，裝入潔凈密封的塑料袋中備用。

1.2.2? ? 提取。準(zhǔn)確稱取待測樣10.00 g（精確到0.01 g）于50 mL塑料離心管中，加入10.0 mL乙腈，在渦旋混合器上渦旋振蕩2 min后，再加入2 g萃取鹽包，混勻后在多管渦旋振蕩器劇烈振蕩2 min，以9 000 r/min離心5 min，取出上清液待凈化。

1.2.3? ? 凈化。準(zhǔn)確吸取1.0 mL上清液至凈化管，充分混勻，在多管渦旋振蕩器劇烈振蕩5 min，以15 000 r/min離心5 min，準(zhǔn)確吸取0.5 mL上清液至10 mL試管中，50 ℃水浴中氮?dú)獯抵两?，?zhǔn)確加入0.5 mL丙酮+正已烷（10+90）復(fù)溶，待測。

1.3? ? 氣相色譜條件

色譜柱：Agilent DB-1MS，30.0 mm×250 μm×0.25 μm;進(jìn)樣口溫度為240 ℃，微池電子捕獲檢測器（μECD）溫度為320 ℃。柱溫為程序升溫，初始溫度80 ℃，保持1.0 min，以15 ℃/min的升溫速率升到230 ℃，保持1.0 min，再以40 ℃/min的升溫速率升到270 ℃，保持2 min。氣體及流量：載氣為高純氮?dú)猓兌?99.999%），恒流模式，流速1.0 mL/min，檢測器尾吹氣氣體為高純度的氮?dú)?，流?0.0 mL/min。進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口隔墊吹掃流量3.0 mL/min，0.75 min打開吹掃，吹掃流量60.0 mL/min，進(jìn)樣量1.0 μL。自動(dòng)進(jìn)樣器洗針：進(jìn)樣前依次用正己烷、樣品洗進(jìn)樣針3次，進(jìn)樣后再用丙酮洗進(jìn)樣針3次。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 色譜條件優(yōu)化建立

配制蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行上機(jī)分析，多次優(yōu)化進(jìn)樣口溫度、檢測器溫度、柱溫的升溫程序及氣體流量等儀器參數(shù)，使蟲螨腈能夠得到較好的峰型和最好的響應(yīng)強(qiáng)度，同時(shí)縮短分析時(shí)間。優(yōu)化色譜條件后得到的蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1 μg/mL）色譜圖，如圖1（a）所示。

2.2? ? 前處理方法優(yōu)化

本試驗(yàn)分別采用乙腈、乙酸乙酯、丙酮作為提取溶劑進(jìn)行添標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果表明，用乙腈提取該農(nóng)藥的添標(biāo)回收率優(yōu)于乙酸乙酯、丙酮，因而選擇乙腈作為提取溶劑。同時(shí)，本試驗(yàn)進(jìn)行了2種凈化管的凈化效果對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果表明，2種凈化管的添標(biāo)回收率均在85%以上，但用凈化管A凈化后的樣品色譜圖雜峰明顯比用凈化管B凈化后的樣品色譜圖雜峰少，凈化效果更好，因而選擇含50 mg GCB的凈化管A作為前處理凈化管。

2.3? ? 定性與定量

由自動(dòng)進(jìn)樣器吸取1.0 μL蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)溶液和凈化后的待測樣品溶液注入色譜儀中，以保留時(shí)間（RT）定性，測得樣品溶液中未知組分的保留時(shí)間分別與標(biāo)準(zhǔn)溶液在同一色譜柱上的保留時(shí)間相比較，如果樣品溶液中某組分的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中某一農(nóng)藥的保留時(shí)間相差在±0.05 min內(nèi)的可認(rèn)定為該農(nóng)藥。同時(shí)，以色譜柱獲得的樣品溶液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比較定量。空白平菇基質(zhì)色譜圖和空白平菇基質(zhì)添加0.10 μg/mL蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖分別如圖1（b）、（c）所示。

2.4? ? 方法的線性關(guān)系及檢出限

在優(yōu)化建立的色譜條件下，對(duì)不同質(zhì)量濃度的蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測定，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)樣測定3次，以質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)，以峰面積平均值（Y）為縱坐標(biāo)，獲得蟲螨腈的標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=54 834.176 6X+161.936 32，結(jié)果表明，在0.01～0.50 μg/mL范圍內(nèi)，線性良好，相關(guān)系數(shù)（r）為0.999 32。以信噪比的3倍計(jì)算得出方法的檢出限（LOD）為0.001 mg/kg，以信噪比的10倍計(jì)算得出方法的定量限（LOQ）為0.003 mg/kg，在《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）中規(guī)定了蔬菜、水果和茶葉中蟲螨腈的殘留限量，而沒有規(guī)定食用菌中殘留限量，參照其中最低的芥藍(lán)最大殘留限量0.1 mg/kg[1]，該方法能夠滿足實(shí)際檢測要求。

2.5? ? 方法的回收率與精密度

應(yīng)用建立的方法在空白平菇樣品分別添加0.02、0.05、0.10、0.20 mg/kg 4個(gè)含量水平進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)添加水平重復(fù)測定5次，計(jì)算平均回收率及精密度，蟲螨腈的添標(biāo)回收率在88.5%～105.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在3.11%～5.22%之間，結(jié)果表明該方法具有良好的回收率和精密度。

2.6? ? 實(shí)際樣品檢測

應(yīng)用本方法對(duì)市售的10份平菇樣品進(jìn)行檢測，9份樣品未檢出，1份樣品檢出蟲螨腈，濃度為0.0281 mg/kg，色譜圖見圖1（d）。在《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）中規(guī)定了蔬菜、水果和茶葉中蟲螨腈的殘留限量，而沒有規(guī)定食用菌中殘留限量[1]，應(yīng)引起相關(guān)部門的重視。將該樣品應(yīng)用《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（GB 23200.113—2018）[15]進(jìn)行測定，測定的結(jié)果與本方法相一致。結(jié)果表明，本方法能應(yīng)用于市場平菇中蟲螨腈殘留實(shí)際檢測。

3? ? 結(jié)論與討論

本文通過對(duì)平菇中蟲螨腈進(jìn)行氣相色譜法的測定，結(jié)果表明，在0.01～0.50 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 32，方法檢出限為0.001 mg/kg，方法定量限為0.003 mg/kg。在0.02、0.05、0.10、0.20 mg/kg 4個(gè)含量水平的添標(biāo)回收率在88.5%～105.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在3.11%～5.22%之間，本方法簡便、快速、準(zhǔn)確，能滿足實(shí)際檢測分析要求。

4? ? 參考文獻(xiàn)

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