肺炎支原體抗體IgG、IgM和DNA檢測(cè)在兒童呼吸道感染中的診斷價(jià)值

張 寧，陸東明，顧 猛

南通大學(xué)附屬常州兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州 213003

肺炎支原體(MP) 目前是兒童支原體肺炎最常見(jiàn)的病原體，因它對(duì)抗菌藥物的敏感性較低通常會(huì)導(dǎo)致“非典型性肺炎”，引起兒童呼吸道感染及肺部的急性炎癥改變。近年來(lái)有研究表明，支原體肺炎在兒童中的患病率呈上升趨勢(shì)[1]，約占住院兒童社區(qū)獲得性肺炎的10%～40%[2-5]。早期MP 感染的患兒臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、全身乏力、咳嗽等，因臨床表現(xiàn)缺乏特異性，所以實(shí)驗(yàn)室的病原學(xué)檢查顯得尤為重要。目前，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)MP 的方法很多，如MP抗體定性檢測(cè)和MP-DNA定量檢測(cè)，均是診斷MP感染最常用的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，但是由于檢測(cè)方法的差異，對(duì)同一患兒而言，檢測(cè)結(jié)果有差異。因此，本研究采用直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)和熒光探針PCR技術(shù)，分別檢測(cè)呼吸道感染患兒的MP-IgM、MP-IgG和MP-DNA，旨在分析MP-IgM、MP-IgG和MP-DNA檢測(cè)在兒童呼吸道感染中的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年5-10月按照呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]收治入住南通大學(xué)附屬常州兒童醫(yī)院的172例兒童作為研究對(duì)象，其中男87例，女85例；年齡1月至13歲,平均年齡(5.12 ±3.61)歲。<8歲患兒150例(88.37%)，≥8歲患兒22例(11.63%)。根據(jù)患兒不同年齡段的生理特性、免疫力不同，將支原體肺炎感染組患兒進(jìn)行年齡分組，其中<1歲25例，1～<4歲79例，4～<8歲46例，≥8歲22例。

1.2儀器與試劑 MP-IgM和MP-IgG檢測(cè)試劑由亞輝龍生物科技股份有限公司提供，并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作；MP-DNA熒光探針PCR檢測(cè)試劑由達(dá)安基因股份有限公司提供。擴(kuò)增儀為ABI7500。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 所有患兒均是住院24 h內(nèi)采集外周血標(biāo)本用于MP-IgM和MP-IgG檢測(cè)，同時(shí)取咽部分泌物或痰液至密封無(wú)菌容器中，用于MP-DNA 檢測(cè)。

1.3.2MP-IgM和MP-IgG檢測(cè) MP-IgM和MP-IgG的檢測(cè)采用直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)，試劑盒由亞輝龍生物科技股份有限公司提供，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3.3MP-DNA的檢測(cè) MP-DNA的檢測(cè)采用熒光探針PCR技術(shù)，試劑盒由達(dá)安基因股份有限公司提供。

1.3.4MP-IgM、MP-IgG和MP-DNA的診斷價(jià)值 分別繪制MP-IgM、MP-IgG和MP-DNA檢測(cè)指標(biāo)的受試者工作特征曲線(ROC曲線)，比較曲線下面積(AUC)；比較上述指標(biāo)在 MP檢測(cè)中的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值和約登指數(shù)，評(píng)價(jià)上述指標(biāo)的診斷價(jià)值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS24.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1MP-IgM、MP-IgG和MP-DNA在不同年齡組呼吸道感染患兒的陽(yáng)性率比較 172例呼吸道感染患兒中，4組不同年齡組患兒的 MP-IgM、MP-IgG和MP-DNA陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2MP-IgM、MP-IgG和MP-DNA的ROC曲線分析 以172例呼吸道感染患兒為分析對(duì)象，做ROC曲線圖，在AUC>0.5的情況下，AUC越接近1，說(shuō)明診斷效能越高。MP-DNA的AUC為0.763，MP-IgG的AUC為0.546，MP-IgM的AUC為0.678,由此可看出，MP-DNA和MP-IgM對(duì)兒童呼吸道感染性疾病的診斷效能高于MP-IgG，且MP-DNA的診斷效能高于MP-IgM。見(jiàn)表2、圖1。

2.3MP-IgM、MP-IgG和MP-DNA對(duì)呼吸道感染患兒的診斷價(jià)值 MP-DNA、MP-IgG和MP-IgM的靈敏度分別為73.45%、71.11%、70.45%，特異度分別為94.92%、79.27%、86.67%；MP-DNA>MP-IgM>MP-IgG，這與上述ROC曲線繪制結(jié)果一致；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值中，MP-DNA、MP-IgM和MP-IgG陽(yáng)性預(yù)測(cè)值分別為96.51%、89.13%、79.01%，說(shuō)明MP-DNA與MP-IgM陽(yáng)性者患呼吸道感染疾病的可能性較高。同時(shí)，陰性預(yù)測(cè)值中，MP-DNA、MP-IgM和MP-IgG的陰性預(yù)測(cè)值分別為65.12%、81.25%和71.43%，表明當(dāng)MP-DNA、MP-IgM和MP-IgG為陰性時(shí)，患兒存在患呼吸道感染性疾病的可能。見(jiàn)表3。

表1 不同年齡組呼吸道感染患兒檢測(cè)陽(yáng)性率比較[n(%)]

表2 各項(xiàng)指標(biāo)ROC曲線下面積

圖1 呼吸道感染疾病各項(xiàng)指標(biāo)ROC曲線圖

表3 各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)對(duì)呼吸道感染性疾病的診斷價(jià)值

3 討 論

支原體肺炎在兒童時(shí)期是一種輕微的自限性疾病，但嚴(yán)重的支原體肺炎可危及生命或產(chǎn)生嚴(yán)重的并發(fā)癥，如肺后遺癥、腦炎、心肌炎、肝炎和腎炎。因此尋找支原體肺炎的聯(lián)合檢測(cè)指標(biāo)至關(guān)重要，不僅可用于疾病診斷，還可用于治療效果監(jiān)測(cè)。熒光定量 PCR檢測(cè) MP-DNA 是近年來(lái)發(fā)展的技術(shù)，能夠?qū)C(jī)體內(nèi)MP-DNA水平進(jìn)行定量，并準(zhǔn)確反映患兒體內(nèi)MP的感染及復(fù)制情況。臨床醫(yī)生可以根據(jù) MP-DNA 拷貝數(shù)的多少來(lái)推斷患兒病情嚴(yán)重程度，進(jìn)而控制用藥量，以期達(dá)到理想的治療效果[7-10]。

本次研究選取172例呼吸道感染的患兒對(duì)其進(jìn)行分層研究，不同年齡段患兒的MP-DNA、MP-IgG和MP-IgM的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中<8歲的呼吸道感染患兒約占88.37%，而≥8歲的占11.63%，這與相關(guān)研究報(bào)道的MP感染可發(fā)生于兒童任何年齡段，以學(xué)齡前期和學(xué)齡期兒童為多見(jiàn)的觀點(diǎn)保持一致[11-15]。分析其原因可能是由于低齡兒童免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完成，機(jī)體免疫力相對(duì)低下，一旦被MP感染后，很容易出現(xiàn)呼吸道感染，而≥8歲的兒童，由于免疫系統(tǒng)相對(duì)成熟，MP致病性相對(duì)于8歲前有所降低。

MP-IgG有較高的靈敏度(71.11%)，可能是由于機(jī)體內(nèi)MP-IgG持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)，而且一旦患兒既往感染了MP，機(jī)體內(nèi)也存在抗體，易造成假陽(yáng)性。MP-IgM是患兒感染MP的早期指標(biāo)，但由于持續(xù)時(shí)間短，可能會(huì)導(dǎo)致患兒窗口期出現(xiàn)假陰性。通過(guò)繪制ROC曲線來(lái)判斷這3項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的診斷效能，MP-DNA> MP-IgM>MP-IgG。

綜上所述，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢查血清MP兩種抗體和PCR熒光定量檢測(cè)咽部分泌物或痰液中的MP-DNA對(duì)于兒童呼吸道感染性疾病的診斷具有一定意義。不同年齡段的兒童由于免疫系統(tǒng)發(fā)育處于不同的發(fā)展階段，對(duì)MP的免疫應(yīng)答存在差異。