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    芩白清肺方聯(lián)合糖皮質(zhì)激素對(duì)肺炎支原體肺炎患者的臨床療效

    2020-06-02 09:32:14霞,張
    中成藥 2020年5期
    關(guān)鍵詞:清肺支原體外周血

    趙 霞,張 岳

    (南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校,河南 南陽(yáng)473000)

    肺炎支原體作為無(wú)細(xì)胞壁原核細(xì)胞型生物,可通過(guò)呼吸道傳播,入侵機(jī)體后引發(fā)炎癥免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)紊亂,伴隨C-反應(yīng)蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、白介素-6 (IL-6)、白介素-8 (IL-8) 等炎癥細(xì)胞因子過(guò)度活化,從而發(fā)生肺炎支原體肺炎[1-2],若不及時(shí)治療,則容易促發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征及多器官功能不全綜合癥等,兒童是肺炎支原體肺炎易感人群。作為一種先天性免疫的病原模式識(shí)別受體,Toll 樣受體(TLRs) 具有識(shí)別多種病原微生物抗原成分的功能,通過(guò)髓樣分化因子88 依賴(lài)性途徑和非依賴(lài)性途徑進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)并活化NFκB,后者可啟動(dòng)CRP、TNF-α、IL-6、IL-8 等炎性細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄表達(dá),啟動(dòng)適應(yīng)性免疫,激發(fā)炎性連鎖反應(yīng),促進(jìn)病情發(fā)生發(fā)展[3-4],可知以TLRs、炎癥因子變化相關(guān)的免疫紊亂是病理特點(diǎn)。

    西醫(yī)治療肺炎支原體時(shí),常利用糖皮質(zhì)激素迅速抑制內(nèi)毒素分泌和合成,緩解臨床癥狀,但其不良反應(yīng)明顯,芩白清肺方是根據(jù)南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校第二附屬醫(yī)院治療經(jīng)驗(yàn)及文獻(xiàn)報(bào)道制備的院內(nèi)制劑。

    本研究考察芩白清肺方聯(lián)合糖皮質(zhì)激素對(duì)肺炎支原體肺炎患者的臨床療效,以期為該方臨床應(yīng)用提供參考。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 2013 年5 月至2018 年4 月收治于南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科的168 例肺炎支原體患者,隨機(jī)分為對(duì)照組(85 例) 和觀察組(83 例)。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),患者家屬或監(jiān)護(hù)人均簽署知情同意書(shū)。

    1.2 材料 紅細(xì)胞裂解液(美國(guó)eBioscience 公司);CRP、TNF-α、IL-6、IL-8 試劑盒均購(gòu)自上海研生實(shí)業(yè)有限公司。iMARK 型酶標(biāo)儀、GENE Genius 凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)Bio-Rad 公司);PCR 擴(kuò)增儀(德國(guó)Biometra 公司);MX3000P熒光定量PCR 儀(美國(guó)Stratagene 公司);JM-250 電泳儀(大連捷邁科貿(mào)有限公司);Du-640 紫外分光光度儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司);Master ScreenTMPAED 肺功能監(jiān)測(cè)儀(德國(guó)耶格公司);BJ05-4 血?dú)夥治鰞x(德國(guó)拜耳公司)。

    1.3 治療手段 2 組患者入院后,立即給予祛痰、結(jié)合、平喘、吸氧等常規(guī)治療,對(duì)照組注射甲潑尼龍琥珀酸鈉[輝瑞制藥比利時(shí)公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H20080284,40 mg/瓶(以甲潑尼龍計(jì)),批號(hào)20130302] 靜脈滴注,48 h 內(nèi)每隔6 h 給藥1 次,每次30 mg/kg,48 h 后改為醋酸潑尼松片(蘭州佛慈制藥股份有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H62020884,5 mg/片,批號(hào)20130501) 口服,劑量1 mg/kg;觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上加用芩白清肺方,組方藥材(黃芩、百部、桔梗、地龍、麥冬、紫苑) 均購(gòu)自河南省內(nèi)中藥批發(fā)公司,經(jīng)南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校中醫(yī)系吳黎明教授鑒定為正品,取上述藥材各15 g,煎煮2 次,合并煎液,濃縮至200 mL,每天分2 次服用。兩組均連續(xù)給藥5 d。

    1.4 指標(biāo)檢測(cè)

    1.4.1 肺功能 肺功能監(jiān)測(cè)儀檢測(cè)肺活量(VC)、用力肺活量(FVC)、1 s 用力呼氣容積(FEV1)、峰值呼氣流速(PEF)、最大呼氣中段流量(MMEF)。

    1.4.2 血?dú)?血?dú)夥治鰞x檢測(cè)血液pH、PCO2、PO2、HCO-3、血紅蛋白、血氧飽和度、紅細(xì)胞壓積。

    1.4.3 炎癥因子 ELISA 法檢測(cè)空腹外周血CRP、TNF-α、IL-6、IL-8 水平。

    1.4.4 To11 樣受體2 (TLR2)、To11 樣受體4 (TLR4)mRNA 表達(dá) 采用RT-PCR 法檢測(cè)。治療前后收集空腹外周血各約5 mL,置于抗凝試管中,分離外周血單個(gè)核細(xì)胞,重懸RPMI-1640 培養(yǎng)基,置于96 孔板中,于37 ℃、5%CO2下培養(yǎng)60 min 后,Trrizol 法、紫外分光光度計(jì)分別提取并測(cè)定外周血單個(gè)核細(xì)胞總RNA 及純度,引物序列見(jiàn)表1,以RNA 為模板,加2.5 mmol/L olig (dT) 18 與莫洛尼氏鼠白血病毒逆轉(zhuǎn)錄酶。TLR2、TLR4 mRNA 擴(kuò)增條件為94 ℃預(yù)變性120 s,循環(huán)擴(kuò)增,97 ℃變性90 s,56 ℃退火60 s,72 ℃延伸60 s,35 次循環(huán),72 ℃延伸10 min,反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。采用Imag-proplus 軟件分析條帶,以TLR2、TLR4 與NAPDH的IOD 比值為兩者mRNA 表達(dá)。

    表1 引物序列

    1.4.5 療效評(píng)價(jià) (1) 治愈,治療2 周內(nèi),呼吸道癥狀、體溫、血象、C 反應(yīng)蛋白(CRP) 均正常;(2) 顯效,體溫有降低趨勢(shì),呼吸道癥狀、血象、CRP 均未完全恢復(fù);(3) 進(jìn)步,體溫未退,但呼吸道癥狀,血象、CRP 中至少有1 項(xiàng)改善;(4) 無(wú)效,體溫未退,呼吸道癥狀,血象、CRP 均未改善,甚至惡化??傆行剩?[(治愈例數(shù)+顯效例數(shù)+進(jìn)步例數(shù)) /總例數(shù)] ×100%。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò)SPSS 17.0 軟件進(jìn)行處理,計(jì)數(shù)資料以百分率表示,組間比較采用卡方檢驗(yàn);計(jì)量資料以()表示,多組比較采用方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 一般資料 2 組患者性別比、年齡、病程、發(fā)熱時(shí)間、咳嗽時(shí)間、并發(fā)癥情況比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性,見(jiàn)表1。

    表1 2 組一般資料比較()

    表1 2 組一般資料比較()

    2.2 肺功能指標(biāo) 治療后,觀察組VC、FVC、FEV1、PEF、MMEF 高于對(duì)照組(P<0.05),見(jiàn)表2。

    表2 2 組肺功能指標(biāo)比較()

    表2 2 組肺功能指標(biāo)比較()

    2.3 血?dú)庵笜?biāo)治療后,觀察組pH、PCO2、PO2、、血氧飽和度、血紅蛋白高于對(duì)照組 (P<0.05),兩組紅細(xì)胞壓積比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表3。

    表3 2 組血?dú)庵笜?biāo)比較(,1 mmHg=0.133 kPa)

    表3 2 組血?dú)庵笜?biāo)比較(,1 mmHg=0.133 kPa)

    2.4 炎癥因子 治療后,觀察組CRP、TNF-α、IL-6、IL-8水平低于對(duì)照組(P<0.05),見(jiàn)表4。

    2.5TLR2、TLR4 mRNA 表達(dá) 治療后,觀察組TLR2、TLR4 mRNA 表達(dá)低于對(duì)照組(P<0.05),見(jiàn)表5、圖1。

    表4 2 組炎癥因子比較()

    表4 2 組炎癥因子比較()

    表5 2 組TLR2、 TLR4 mRNA 表達(dá)比較()

    表5 2 組TLR2、 TLR4 mRNA 表達(dá)比較()

    圖1 2 組TLR2、 TLR4 mRNA 表達(dá)

    2.6 臨床療效 觀察組總有效率高于對(duì)照組(P<0.05),見(jiàn)表6。

    表6 2 組臨床療效比較

    3 討論

    芩白清肺方是參考國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的芩白清肺濃縮丸組方改造而成,由黃芩、百部、桔梗、地龍、麥冬、紫菀6 味藥材組成,全方共奏清肺之熱毒,可保肺之陰津,降肺之逆氣[5]。本研究發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組(單用糖皮質(zhì)激素) 比較,觀察組(芩白清肺方聯(lián)合糖皮質(zhì)激素)肺炎支原體肺炎患者肺功能、氣血指標(biāo)、臨床療效均明顯提高。

    LRs 可參與固有免疫與炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生及相關(guān)的信號(hào)傳遞過(guò)程,其中TLR2、TLR4 是該家族重要成員,可協(xié)同鏈接蛋白髓樣分化因子并識(shí)別MP,進(jìn)而激活促炎細(xì)胞因子,開(kāi)啟適應(yīng)性免疫應(yīng)答。本研究發(fā)現(xiàn),治療前患者外周血單個(gè)核細(xì)胞表面TLR2、TLR4 mRNA 均呈高表達(dá),外周血炎癥因子CRP、TNF-β、IL-6、IL-8 亦然,表明它們是病情發(fā)生發(fā)展的病理學(xué)特點(diǎn)[6-7]。

    本研究發(fā)現(xiàn),觀察組可降低外周血單個(gè)核細(xì)胞表面TLR2、TLR4 mRNA 及炎癥因子表達(dá),與對(duì)照組比較在改善上述免疫紊亂方面效果更顯著,提示芩白清肺方具有調(diào)節(jié)免疫紊亂的作用,可能與其所含的藥材及有效成分相關(guān)。陳文等[8]報(bào)道,黃芩可通過(guò)下調(diào)肝肺組織炎癥信號(hào)通路中TLR4 蛋白表達(dá)來(lái)阻止炎癥信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo),減少反向細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α 表達(dá)來(lái)發(fā)揮對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠肝肺損傷的保護(hù)作用;黃常新等[9]發(fā)現(xiàn),含百部、紫菀的養(yǎng)陰清熱及潤(rùn)肺止咳驗(yàn)方發(fā)揮功效是通過(guò)抑制TLR4 信號(hào)通路、下調(diào)肺部炎癥因子表達(dá)、阻止或延緩放射性肺損傷發(fā)生發(fā)展所致,其作用與激素相當(dāng);單進(jìn)軍等[10]研究顯示,桔梗中皂苷、黃酮類(lèi)化合物可與TLR4 蛋白發(fā)生作用,調(diào)控呼吸道過(guò)度炎癥反應(yīng),改善肺功能,降低咳嗽中樞對(duì)刺激反應(yīng),從而達(dá)到止咳祛痰的作用;曹羽等[11]報(bào)道,含有麥冬的芪冬活血飲對(duì)LPS 導(dǎo)致的大鼠急性肺損傷有保護(hù)作用,其機(jī)制與抑制TLR4 mRNA 表達(dá)、抑制促炎細(xì)胞因子TNF-α 和IL-1β、升高抗炎細(xì)胞因子表達(dá)、糾正炎癥失衡等作用相關(guān);邢清敏等[12]發(fā)現(xiàn),含有麥冬的生脈散治療擴(kuò)張型心肌病大鼠的作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)TLR-4 蛋白水平,從而抑制TLR-4/NF-κB 信號(hào)通路反向炎癥因子相關(guān);文秀華等[13]研究顯示,含有紫菀的補(bǔ)肺湯免煎劑可抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠肺組織中TLR2、TLR4 活性,通過(guò)My D88 依賴(lài)性經(jīng)典途徑來(lái)調(diào)節(jié)反向NF-κB 信號(hào)通路,改善氣道重塑,并呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性關(guān)系。

    盡管大量臨床研究尋找中醫(yī)治療肺炎支原體肺炎的方法,以改善預(yù)后,但主要傾向于其療效及安全性,鮮有對(duì)相關(guān)機(jī)制的深入考察。本研究在臨床經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上分析芩白清肺方的治療機(jī)制,發(fā)現(xiàn)該方有助于降低TLR2、TLR4 mRNA 表達(dá),可為相關(guān)中醫(yī)藥治療提供參考。

    綜上所述,芩白清肺方聯(lián)合糖皮質(zhì)激素可改善肺炎支原體肺炎患者肺功能、氣血指標(biāo)、免疫紊亂,增強(qiáng)抗病能力,促進(jìn)病情恢復(fù),降低并發(fā)癥發(fā)生。但芩白清肺方中含有多種中藥成分,發(fā)揮調(diào)節(jié)TLR2、TLR4 mRNA 表達(dá)的機(jī)制可能是各成分協(xié)同作用的結(jié)果,考慮到臨床研究的局限性,今后仍需通過(guò)動(dòng)物或離體實(shí)驗(yàn)作進(jìn)一步研究。

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