潺槁樹根皮中生物堿類化學(xué)成分的研究*

林曉婉，金 燕，孫萬(wàn)瑩，張 璐，唐曉亮

(1 哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，藥物工程技術(shù)研究中心，黑龍江 哈爾濱 150076；2 海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，海南 ?？?570102；3 海南醫(yī)學(xué)院中醫(yī)學(xué)院，海南 ?？?571199)

潺槁樹(Litseaglutinosa)又稱潺槁木姜子，常綠小喬木或喬木，高3～15 m，生長(zhǎng)于海拔500～1900 m的山地林緣、溪旁、疏林或灌木叢中[1]，主要分布于我國(guó)廣東、廣西、福建及云南南部，越南、菲律賓及印度也有分布[2]。將根皮和葉入藥，具有清濕熱、消腫毒、治腹瀉、外服治瘡癰的功用[3]。潺槁樹根皮中具有多種化學(xué)成分，其中生物堿為其特征性成分。研究表明，潺槁樹中的多種生物堿類成分表現(xiàn)出了較好的抗菌、抗氧化、及降糖等藥理活性[4-6]。植物一直是一種很好的藥物來源，從天然植物中提取這些活性成分相比西藥來講來源更為廣泛，也具有治療效果溫和持久、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。因此，對(duì)于潺槁樹根皮中的生物堿類成分進(jìn)行提取、分離和純化具有重要意義。本文對(duì)潺槁木姜子根皮的生物堿成分進(jìn)行研究，分離得到10個(gè)化合物，并分別鑒定為N-methylcoclaurineN-oxide (1)、(Z)-N-formyllaurolitsine (2)、(E)-N-formyllaurolitsine (3)、Thalifoline (4)、Maculosidine (5)、吳茱萸春 (6)、Pteleine (7)、烏藥堿 (8)、波爾定堿(9)、新木姜子堿(10)。其中化合物1～7為首次從該植物中分離得到，其結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～7的結(jié)構(gòu)圖

1 儀器與材料

核磁共振波譜儀，賽默飛世爾科技公司；RE-201D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海保玲儀器設(shè)備有限公司；SHB-Ⅲ型循環(huán)水真空泵，上海霓玥儀器；手提暗箱式紫外分析儀，上海嘉鵬科技有限公司；薄層層析硅膠板，青島海洋化工廠；柱色譜硅膠(100～200目，200～300目)，青島海洋化工廠；Sephadex LH-20，Pharmacia biotech Sweden；LC-10AD二元低壓半制備液相色譜儀，日本島津；半制備色譜柱(Phenyl，2.5 mm×25.0 cm，5 μm)，Agilent；有機(jī)試劑，西隴化工有限公司；氘代試劑，中國(guó)科學(xué)院武漢波譜公司。

潺槁樹根皮采自海南省文昌市銅鼓嶺，并經(jīng)海南醫(yī)學(xué)院曾念開教授鑒定。

2 提取與分離

將潺槁樹根皮(10.0 kg)切碎后，浸泡至95%乙醇溶液中，采用回流提取法，重復(fù)提取3次，每次2 h。使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收溶劑，直至蒸干且乙醇味消失。加入1% 硫酸水溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，調(diào)節(jié)pH值為3～4，用氯仿(6 L)萃取3次，除去脂溶性成分。酸水溶液中加入1% 的NaOH(質(zhì)量分?jǐn)?shù))堿水溶液調(diào)節(jié)pH為9～10，繼而用乙酸乙酯(6 L)萃取3次，減壓濃縮后得到潺槁樹根皮總生物堿25 g。

稱取20 g總生物堿置于燒杯中，加入100 mL乙酸乙酯溶解均勻，采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離，以二氯甲烷-丙酮為溶劑進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測(cè)合并后共得到Fr.A～Fr.E 6個(gè)組分。Fr.A用凝膠柱色譜分離，然后用反相高效液相制備色譜進(jìn)一步分離，得到化合物9(52.0 mg)和10(285.0 mg)。Fr.B采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、反相高效液相制備色譜分離，得到化合物8(20.0 mg)。Fr.C經(jīng)硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、反相高效液相制備色譜分離，得到化合物2(3)(12.0 mg)、5(8.0 mg)、6(10.0 mg)、7(15.0 mg)。由于化合物2和3為同分異構(gòu)體，經(jīng)過多次嘗試，未實(shí)現(xiàn)拆分。Fr.D采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、反相高效液相制備色譜分離，得到化合物1(12.0 mg)。Fr.E采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、反相高效液相制備色譜分離，得到化合物4(12.0 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末，1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 6.99 (2H, d,J=8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.66 (2H, d,J=8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.66 (1H, s, H-5), 6.27 (1H, s, H-8), 4.26 (1H, brd,J=12.8, H-1), 3.57 (1H, m, H-3α), 3.70 (1H, m, H-3β), 3.10 (1H, brd,J=12.0 Hz, H-7′α), 2.67 (1H, dd,J=12.0, 9.0 Hz,H-7′β), 3.04 (2H, m, H-4), 2.98 (3H, s,N-CH3), 3.70 (3H, s, -OCH3)。13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 78.7 (C-1), 62.8 (C-3), 25.8 (C-4), 53.4 (N-CH3), 36.9 (C-7′), 56.0 (-OCH3), 111.9 (C-5), 114.8 (C-8), 130.1 (C-2′, 6′), 121.7 (C-4a), 127.3 (C-8a), 128.7 (C-1′), 146.4 (C-7), 116.8 (C-3′, 5′), 156.7 (C-4′), 147.5 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，故化合物1鑒定為N-methylcoclaurineN-oxide，首次從潺槁樹根皮中分離得到。

化合物2：白色粉末，1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 8.20 (1H, s, -CHO), 7.95 (1H, s, H-11′), 6.70 (1H, s, H-8), 6.60 (1H, s, H-3), 4.68 (1H, dd,J=12.0, 4.2 Hz, H-6α), 3.88 (1H,J=12.0, 4.2 Hz, H-7α), 3.28 (1H, td,J=12.0, 2.4 Hz, H-7β), 2.71 (2H, t,J=7.2 Hz, H-5), 2.60 (2H, t,J=7.2 Hz, H-4)。13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 162.8 (-CHO), 150.1 (C-2), 149.7 (C-9), 149.6 (C-10), 143.7 (C-1), 129.9 (C-1a), 129.7 (C-7a), 127.4 (C-3a), 122.9 (C-3b), 122.8 (C-11a), 116.8 (C-11), 116.1 (C-8), 112.6 (C-3), 59.7 (10-OCH3), 56.1 (1-OCH3), 49.9 (C-6a), 41.7 (C-5), 33.5 (C-7), 30.4 (C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故化合物2鑒定為(Z)-N-formyllaurolitsine，為首次從潺槁樹中分離得到。

化合物3：分子式為C21H24NO5，1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 8.33 (1H, s, -CHO), 7.94 (1H, s, H-11′), 6.73 (1H, s, H-8), 6.60 (1H, s, H-3), 4.45 (1H, dd,J=12.0, 4.2 Hz, H-6α)。13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 162.8 (-CHO), 150.1 (C-2), 149.7 (C-9), 149.6 (C-10), 143.6 (C-1), 131.0 (C-1a), 129.6 (C-7a), 127.4 (C-3a), 123.0 (C-3b), 122.9 (C-11a), 116.9 (C-11), 116.1 (C-8), 112.6 (C-3), 59.7 (10-OCH3), 56.1 (1-OCH3), 53.0 (C-6a), 37.0 (C-5), 35.6 (C-7), 29.3 (C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故化合物3鑒定為(E)-N-formyllaurolitsine，為首次從潺槁樹中分離得到。

化合物4：1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 2.90 (2H, t,J=7.2 Hz, H-4), 3.06 (3H, s, N-CH3), 3.54 (2H, t,J=7.2 Hz, H-3), 6.76 (1H, s, H-5), 7.34 (1H, s, H-8)。13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 26.8 (C-4), 33.8 (N-CH3), 48.2 (C-3), 55.0 (-OCH3), 109.4 (C-5), 113.6 (C-8), 121.2 (C-8a), 131.2 (C-4a), 145.0 (C-7), 150.0 (C-6), 165.7 (C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故化合物4鑒定為Thalifoline，為首次從該植物中分離得到。

化合物5：白色粉末，1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 7.74 (1H, d,J=3.6 Hz, H-2), 7.62 (1H, brd, H-5), 7.31 (1H, d,J=3.6 Hz, H-3), 7.21 (1H, brd, H-7), 4.50 (3H, s, 4-OCH3), 3.99 (3H, s, 6-OCH3), 3.96 (3H, s, 8-OCH3)。13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 163.0 (C-8b), 105.3 (C-7), 142.5 (C-2), 148.0 (C-8), 153.2 (C-4), 156.3 (C-6), 141.5 (C-8a), 100.3 (C-5), 112.7 (C-4a), 104.8 (C-3), 102.1 (C-3a), 61.7 (8-OCH3), 59.0 (6-OCH3), 56.8 (4-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道的一致，故化合物5鑒定為Maculosidine，為首次從潺槁樹中分離得到。

化合物6：無色無定形粉末，1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 3.93 (3H, s, 7-OCH3), 4.50 (3H, s, 4-OCH3), 8.18 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 7.76 (1H, d,J=3.6 Hz, H-2), 7.35 (1H, d,J=3.6 Hz, H-3), 7.23 (1H, d,J=2.4 Hz, H-8), 7.12 (1H, dd,J=8.4, 2.4 Hz, H-6)。13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 54.6 (7-OCH3), 58.6 (4-OCH3), 101.8 (C-3a), 104.5 (C-3), 106.1 (C-8), 113.1 (C-4a), 116.3 (C-6), 123.6 (C-5), 142.6 (C-2), 147.0 (C-8a), 157.8 (C-4), 161.6 (C-7), 164.7 (C-8b)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]一致，故鑒定化合物6為吳茱萸春，為首次從潺槁樹中分離得到。

化合物7：白色粉末，1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 7.80 (1H, d,J=3.6 Hz, H-2), 7.78 (1H, d,J=8.4 Hz, H-8), 7.56 (1H, d,J=2.4 Hz, H-5), 7.35 (1H, d,J=3.6 Hz, H-3), 7.38 (1H, dd,J=8.4, 2.4 Hz, H-7), 4.50 (3H, s, 4-OCH3), 3.90 (3H, s, 6-OCH3)。13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 54.6 (6-OCH3), 58.6 (4-OCH3), 100.0 (C-5), 103.5 (C-3a), 104.7 (C-3), 118.9 (C-4a), 122.3 (C-7), 127.6 (C-8), 140.4 (C-8a), 143.7 (C-2), 156.2 (C-6), 156.3 (C-4), 162.7 (C-8b)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道的一致，故化合物7鑒定為Pteleine，為首次從潺槁樹中分離得到。

化合物8：白色粉末，1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 3.81 (3H, s, -OCH3), 6.62 (1H, s, H-5), 6.73 (1H, s, H-8), 6.77 (2H, d,J=8.4 Hz, H-3′, 5′), 7.10 (2H, d,J=8.4 Hz, H-2′, 6′)。13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 24.6 (C-4), 39.0 (C-3), 39.4 (C-7′), 55.0 (-OCH3), 56.3 (C-1), 111.2 (C-5), 112.8 (C-8), 116.5 (C-3′, 5′), 122.4 (C-4a), 123.9 (C-8a), 125.7 (C-1′), 130.2 (C-2′, 6′), 146.2 (C-7), 147.7 (C-6), 156.7 (C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，故化合物8鑒定為烏藥堿。

化合物9：無定形粉末，碘化鉍鉀陽(yáng)性。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 7.96 (1H, s, H-11), 6.73 (1H, s, H-8), 6.53 (1H, s, H-3), 3.86 (3H, s, 10-OCH3), 3.56 (3H, s, 1-OCH3), 3.00 (2H, m, H-7a, 4b), 2.90 (1H, m, H-5a), 2.64 (1H, m, H-6a), 2.51 (3H, s,N-CH3), 2.47 (1H, m, H-5b), 2.43 (1H, m, H-7b)。13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 151.2 (C-2), 148.3 (C-10), 147.7 (C-9), 144.9 (C-1), 131.2 (C-7a), 130.5 (C-3a), 128.0 (C-1a), 127.1 (C-1b), 125.3 (C-11a), 116.4 (C-8), 115.5 (C-3), 113.3 (C-11), 64.5 (C-6a), 54.8 (C-5), 60.8 (1-OCH3), 57.1 (10-OCH3), 44.4 (N-CH3), 35.4 (C-7), 29.8 (C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道一致，故化合物9鑒定為波爾定堿。

化合物10：結(jié)晶性粉末，碘化鉍鉀陽(yáng)性。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 7.98 (1H, s, H-11), 6.70 (1H, s, H-8), 6.50 (1H, s, H-3), 3.76 (1H, dd,J=13.2, 3.6 Hz, H-6a), 3.86 (3H, s, 10-OCH3), 3.57 (3H, s, 1-OCH3)。13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 151.5 (C-2), 148.4 (C-9), 147.7 (C-1), 145.0 (C-10), 130.6 (C-7a), 130.3 (C-3a), 128.2 (C-1b), 126.6 (C-1a), 125.2 (C-11a), 116.3 (C-8), 116.0 (C-11), 113.4 (C-3), 60.8 (C-6a), 57.1 (1-OCH3), 56.3 (10-OCH3), 44.1 (C-5), 37.0 (C-7), 29.0 (C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致，故化合物10鑒定為新木姜子堿。

4 結(jié) 論

本文利用采用溶劑提取法和色譜法對(duì)潺槁樹根皮部位中的生物堿類成分進(jìn)行分離純化，得到了10個(gè)生物堿類化合物，為潺槁樹根皮中的主要化學(xué)成分。文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)潺槁樹根皮中總生物堿藥理活性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其表現(xiàn)出了較好的降糖活性。本課題組將繼續(xù)對(duì)潺槁樹根皮中的生物堿類化學(xué)成分進(jìn)行全面的研究，為潺槁樹的進(jìn)一步開發(fā)利用及藥理活性的探索提供科學(xué)依據(jù)。