龍血竭黃酮類成分研究

張興鋒，朱功俊，龔韋凡，劉向明,，桂 鵬

(1 中南民族大學藥學院，湖北 武漢 430074；2 共青科技職業(yè)學院，江西 共青城 332020)

百合科劍葉龍血樹Dracaenacochinchinensis(Lour.) S. C. Chen喜高溫濕熱，具有很高的經(jīng)濟價值和藥用價值。龍血竭來源于龍血樹特定部位的樹脂，具有廣泛的藥理作用，如抗炎抗菌，降低血脂血糖，保護心肌細胞等[1]。黃酮在龍血竭中含量很高，為了研究龍血竭的藥效物質(zhì)基礎，使其更好的應用于臨床，我們主要針對黃酮類化合物進行了研究，分離并確定了11個化合物，結(jié)構(gòu)分別為：

圖1 化合物1～3結(jié)構(gòu)式

圖2 化合物4～7結(jié)構(gòu)式

圖3 化合物8結(jié)構(gòu)式

圖4 化合物9～11結(jié)構(gòu)式

1 實 驗

1.1 儀器與材料

DXR-500 MHz核磁共振儀(TMS內(nèi)標)，Bruker；RE 52-98型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；DZF-6020型真空干燥箱，上海恒科儀器有限公司；ZF-IA型三用紫外分析儀，上海和勤分析儀器有限公司；JA2013N型電子天平，上海明橋精密科學儀器有限公司；CP214型電子天平，奧豪斯儀器有限公司；YMC-Pack ODS-A(250×10 mm)色譜柱，深圳凱米斯科技有限公司；Ultimate 3000型高效液相色譜儀(DAD二極管陣列檢測器，VWD紫外檢測器)，Dionex。

聚酰胺和正相硅膠填料，青島海洋化工有限公司；氫氧化鈉和鹽酸，國藥集團化學試劑有限公司；分析級乙醇、石油醚和乙酸乙酯，天津博迪華工有限公司；色譜級甲醇和乙腈，Tedia。

龍血竭購于西雙版納藥業(yè)有限公司，經(jīng)廣西民族醫(yī)藥研究所滕紅麗教授鑒定為百合科劍葉龍血樹樹脂的乙醇提取物，即龍血竭。樣品(No：2012030)存放于中南民族大學藥學院天然產(chǎn)物研究室。

1.2 提取與分離

龍血竭500 g粉碎成粉，0.4%氫氧化鈉溶解，抽濾。加入鹽酸于濾液調(diào)節(jié)pH值至2.1，抽濾，濾渣充分干燥后稱重得308.2 g樣品。提取物(308.2 g)與等質(zhì)量聚酰胺混合拌樣上柱，經(jīng)25%，40%，55%，70%，85%和100%乙醇梯度洗脫后得7個組分，F(xiàn)r.1～Fr.7。Fr. 1(23.2 g)與等質(zhì)量硅膠混合拌樣上柱，經(jīng)石油醚-乙酸乙酯(45:1)、(25:1)、(1:1)梯度洗脫，再經(jīng)多次硅膠柱層析得6組分，F(xiàn)r.1-1～Fr.1-6。Fr.1-1(103.1 mg)經(jīng)高效液相色譜分離得化合物1(10.3 mg)、化合物2(20.5 mg)、化合物3(7.6 mg)、化合物4(15.3 mg)、化合物6(6.1 mg)。Fr. 2(25.3 g)與硅膠等質(zhì)量混合拌樣上柱，經(jīng)石油醚-乙酸乙酯(20:1)、(10:1)、(5:1)、(1:1)梯度洗脫，再經(jīng)多次硅膠柱層析得4組分，F(xiàn)r.3-1～Fr.3-4。Fr.3-1(120.3 mg)經(jīng)高效液相色譜分離得化合物5(3.7 mg)、化合物7(10.6 mg)、化合物8(9.9 mg)、化合物9(20.3 mg)、化合物10(7.7 mg)、化合物11(8.4 mg)。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淺黃色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 8.12 (2H, dd,J=8.1, 1.9 Hz, H-2’, 6’), 7.99 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 7.64 (3H, m, H-3’, 4’, 5’), 7.04 (1H, d,J=1.9 Hz, H-8), 6.95 (1H, dd,J=8.8, 1.9 Hz, H-6), 6.93 (1H, s, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻[2]報道基本一致，故鑒定化合物1為7-羥基黃酮。

化合物2：淺黃色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 12.66 (1H, s, 5-OH), 7.79 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2’, 6’), 6.81 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3’, 5’), 6.60 (1H, s, H-3), 6.13 (1H, s, H-6), 2.07 (3H, s, 8-CH3);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻[2]報道基本一致，故鑒定化合物2為5,7,4’-三羥基-8-甲基黃酮。

化合物3：淺黃色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 12.81 (1H, s, 5-OH), 7.79 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.77 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.57 (1H, s, H-3), 6.28 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 5.95 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻[2]報道基本一致，故鑒定化合物3為5,7,4’-三羥基黃酮。

表 1 化合物1～3 13C-NMR (DMSO, 125 MHz) 數(shù)據(jù)

化合物4：淺黃色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 7.66 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.84 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 5.89 (1H, d,J=2.5 Hz, H-5), 5.83 (1H, d,J=2.5 Hz, H-3), 3.51 (3H, s, 4-OCH3), 3.48 (3H, s, 6-OCH3), 2.73 (2H, t,J=8.4 Hz, H-α), 2.51 (2H, t,J=8.4 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見表2。以上數(shù)據(jù)與文獻[3]報道基本一致，故鑒定化合物4為2,4’-二羥基-4,6-二甲氧基二氫查爾酮。

化合物5：淺黃色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 7.65 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2’, 6’), 6.83 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3’, 5’), 5.87 (1H, d,J=2.0 Hz, H-5), 5.86 (1H, d,J=2.0 Hz, H-3), 3.56 (3H, s, 6-OCH3), 2.87 (2H, t,J=8.0 Hz, H-α), 2.67 (2H, t,J=8.0 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見表2。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]報道基本一致，故鑒定化合物5為2,4,4’-三羥基-6-甲氧基二氫查爾酮。

化合物6：無色晶體。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 7.62 (2H, d,J=9.0 Hz, H-2’, 6’), 6.94 (1H, d,J=8.0 Hz, H-6), 6.81 (2H, d,J=9.0 Hz, H-3’, 5’), 5.83 (1H, d,J=2.0 Hz, H-3), 5.81 (1H, dd,J=8.0, 2.0 Hz, H-5), 3.67 (3H, s, 2-OCH3), 3.01 (2H, t,J=8.0 Hz, H-α), 2.69 (2H, t,J=8.0 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見表2。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]報道基本一致，故鑒定化合物6為4,4’-二羥基-2-甲氧基二氫查爾酮。

化合物7：白色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 9.24 (1H, s, 4-OH), 7.69 (2H, d,J=9.0 Hz, H-2’, 6’), 6.94 (2H, d,J=9.0 Hz, H-3’, 5’), 6.92 (1H, d,J=8.5 Hz, H-6), 5.89 (1H, d,J=2.5 Hz, H-3), 5.87 (1H, dd,J=8.5, 2.5 Hz, H-5), 3.80 (3H, s, 4’-OCH3), 3.74 (3H, s, 2-OCH3), 3.09 (2H, t,J=7.8 Hz, H-α), 2.73 (2H, t,J=7.8 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見表2。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道基本一致，故鑒定化合物7為4-羥基-2,4’-二甲氧基二氫查爾酮。

表2 化合物4～7 13C-NMR (DMSO, 125 MHz) 數(shù)據(jù)

化合物8：白色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 9.36 (1H, s, 4’-OH), 7.14 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.81 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.65 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.34 (1H, dd,J=8.4, 2.5 Hz, H-6), 6.25 (1H, d,J=2.5 Hz, H-8), 4.79 (1H, dd,J=10.2, 2.2 Hz, H-2), 3.56 (3H, s, 7-OCH3), 2.86～2.55 (2H, m, H-4), 2.03～1.86 (2H, m, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO) δ: 159.1 (C-7), 157.2 (C-4’), 155.5 (C-8a), 131.6 (C-1’), 130.2 (C-5), 127.6 (C-2’, C-6’), 114.3 (C-3’, C-5’), 113.5 (C-4a),106.6 (C-6), 101.0 (C-8), 76.6 (C-2), 55.3 (7-OCH3), 28.6 (C-3), 23.8 (C-4)。根據(jù)HMBC譜，δH7.24和δH6.91與C (157.2)存在信號關聯(lián)，OH質(zhì)子信號與C (157.2)存在信號關聯(lián)，因此可推斷羥基位于C-4’上。δH6.91, δH6.44, δH6.35與C (159.1)存在信號關聯(lián)，OCH3質(zhì)子與C (159.1)存在信號關聯(lián)，因此可推斷甲氧基位于C-7上。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道基本一致，故鑒定化合物8為7-羥基-4’-甲氧基黃烷。

化合物9：無定型粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 6.78 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.47 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 5.71 (1H, d,J=2.1 Hz, H-6), 5.56 (1H, d,J=2.1 Hz, H-8), 3.86 (1H, m, H-2), 3.46 (3H, s, 5-OCH3), 3.39 (1H, m, H-2), 2.21 (2H, m, H-9), 2.28 (1H, m, H-4), 2.03 (1H, m, H-4);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見表3。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，故鑒定化合物9為7,4’-二羥基-5-甲氧基高異黃烷。

化合物10：無色柱狀結(jié)晶。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 6.76 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.46 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.28 (1H, s, H-5), 6.11 (1H, s, H-8), 3.83 (1H, m, H-2), 3.39 (1H, m, H-2), 3.28 (3H, s, 6-OCH3), 2.29 (1H, m, H-9), 2.26 (1H, m, H-9), 2.18 (1H, m, H-4), 2.01 (1H, m, H-4), 1.83 (1H, m, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO)數(shù)據(jù)見表3。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，故鑒定化合物10為7,4’-二羥基-6-甲氧基高異黃烷。

化合物11：白色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 6.74 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.54 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.41 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.01 (1H, dd,J=8.4, 2.5 Hz, H-6), 5.91 (1H, d,J=2.5 Hz, H-8), 3.84 (1H, m, H-2), 3.49 (1H, m, H-2), 2.45 (1H, m, H-4), 2.29 (1H, m, H-4), 2.18 (1H, m, H-9), 2.01 (1H, m, H-9), 1.81 (1H, m, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO) 數(shù)據(jù)見表3。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，故鑒定化合物11為7,4’-二羥基高異黃烷。

表3 化合物9～11 13C-NMR (DMSO, 125 MHz) 數(shù)據(jù)

續(xù)表3

7156.2156.6155.5895.3101.0101.3937.936.936.64a99.4117.2109.58a155.0148.8154.91128.3128.4129.82129.3129.6128.63114.0116.3114.74155.1144.5153.65114.0116.3114.76129.3129.6128.65-OCH355.7--6-OCH3-57.7-

3 結(jié) 論

本文利用堿提酸沉、聚酰胺和硅膠柱色譜以及高效液相色譜從龍血竭黃酮類成分中分離出3個黃酮類，4個查爾酮類，1個黃烷類和3個高異黃烷類成分。這為龍血竭所具備的抗炎抗菌，降低血脂血糖，保護心肌細胞等藥理活性研究提供了化學成分上的研究對象。后續(xù)我們將對龍血竭的其他成分進行分離，通過較為完整的化學成分分析為其藥效物質(zhì)基礎研究提供更多理論依據(jù)。