污泥細(xì)菌總數(shù)檢測方法的研究

習(xí)蘇蕓 黃河笑 李顯芳 蔣利莎

（國家城市供水水質(zhì)監(jiān)測網(wǎng)重慶監(jiān)測站，重慶 400074）

一、前言

目前污水處理的方法主要包括物理法、化學(xué)法及生物法。生物法主要是利用微生物的新陳代謝活動(dòng)，分解污水中的有機(jī)物質(zhì)，從而達(dá)到污水凈化的目的。污水中的微生物[2]多數(shù)為腐生型細(xì)菌和原生動(dòng)物。測定污泥中能夠細(xì)菌總數(shù)，對污泥污染程度的判斷及污水處理廠污泥排放是否符合標(biāo)準(zhǔn)，具有非常重要的意義。2005 年，中華人民共和國建設(shè)部頒布的《城市污水處理廠污泥檢驗(yàn)方法》（CJ/T 221-2005）[]，為檢測污水處理廠的污泥提供了技術(shù)方法。

二、實(shí)驗(yàn)部分

（一）實(shí)驗(yàn)原理

一定量的污泥樣品經(jīng)稀釋處理以后，接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，在37℃培養(yǎng)24h 后，所生長的細(xì)菌菌落的總數(shù)即為樣品的細(xì)菌總數(shù)[1]。

（二）藥品試劑

氫氧化鈉溶液：c(NaOH)=1mol/L；鹽酸溶液：c(HCl)=1mol/L；生理鹽水：ω(NaCl)=0.8%；無菌稀釋水：根據(jù)污泥樣品的數(shù)量配制稀釋用的生理鹽水，分裝于三角瓶及試管中。每個(gè)污泥樣品需準(zhǔn)備一個(gè)內(nèi)裝有9mL 生理鹽水的試管，同時(shí)準(zhǔn)備8 個(gè)至9 個(gè)（具體數(shù)量根據(jù)污泥樣品的稀釋倍數(shù)確定）內(nèi)裝有90mL 生理鹽水的三角瓶，其中放入數(shù)玻璃珠），經(jīng)115℃高壓蒸汽滅菌20 min，備用。

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分：蛋白胨（10g），牛肉浸膏（3g），氯化鈉（5g），瓊脂（15～20g），蒸餾水（1000mL）。將成分混合后，用氫氧化鈉（1mol/L）溶液或鹽酸溶液（1mol/L）調(diào)節(jié)pH 值為7.4～7.6，過濾除去沉淀，分裝于玻璃容器中，經(jīng)115℃高壓蒸汽滅菌20 min，貯存于冷暗處備用。

（三）儀器及設(shè)備

高壓蒸汽滅菌器：115℃、121℃可調(diào)；隔水式培養(yǎng)箱：允許溫度偏差37℃±1℃；恒溫水浴鍋：46℃±1℃；電子分析天平；菌落計(jì)數(shù)器；振蕩器；可調(diào)式電爐。

（四）實(shí)驗(yàn)步驟

稱取1g 的污泥樣品，轉(zhuǎn)至9mL 滅菌的生理鹽水，制成1:10 的稀釋液。振蕩搖勻，全部轉(zhuǎn)移至90mL 的滅菌生理鹽水，制成1:100 的稀釋液。吸取10mL1:100 的稀釋液于90mL 的滅菌生理鹽水，制成1:1000 的稀釋液。重復(fù)上述步驟，根據(jù)對污泥樣品含菌量的估計(jì)，選擇2 個(gè)至3 個(gè)適宜濃度的稀釋菌液用作平板培養(yǎng)。污泥的稀釋倍數(shù)一般選擇（1×105）至（1×107）之間，培養(yǎng)后平皿上的菌落數(shù)在30～300 之間。

在無菌條件下，用1 mL 滅菌的移液管移取所選擇的適宜濃度的稀釋菌液1 mL 轉(zhuǎn)入滅菌平皿中，邊倒入15 mL 左右已融化并冷卻到45℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，邊不斷轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使稀釋菌液和培養(yǎng)基混合均勻。每個(gè)稀釋倍數(shù)應(yīng)做兩個(gè)對照培養(yǎng)結(jié)果。每次實(shí)驗(yàn)，應(yīng)另用一個(gè)滅菌的平皿只傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基加1mL 滅菌生理鹽水做空白對照。待營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置于37℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h±1h，取出計(jì)數(shù)。計(jì)算和報(bào)告計(jì)數(shù)結(jié)果見表1[1]。

表1 稀釋倍數(shù)選擇及菌落總數(shù)測定值[1]

三、結(jié)果與討論

（一）精密度

對同一污泥樣品，1 人平行檢測6 次，檢測結(jié)果見表2 所示。

表2 同一污泥樣品中細(xì)菌總數(shù)含量檢測結(jié)果

由上表2 可知，精密度相對偏差為0.55%，本次精密度檢測結(jié)果符合技術(shù)要求，結(jié)果滿意。

（二）重現(xiàn)性

對同一污泥樣品，3 人各自檢測結(jié)果見表3 所示。

表3 同一污泥樣品中細(xì)菌總數(shù)檢測結(jié)果

由上表3 可知，重現(xiàn)性相對偏差為0.43%，本次重現(xiàn)性檢測結(jié)果符合技術(shù)要求，結(jié)果滿意。

（三）樣品的檢測

按照本方法對污泥中細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行測定，測定的結(jié)果見表4。

表4 不同污泥樣品中細(xì)菌總數(shù)檢測結(jié)果

四、結(jié)論

綜上所述，從檢測結(jié)果可以看出：在該檢測條件下，用平皿計(jì)數(shù)法對污泥中細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行測定，方法的精密度RSD 為0.55%，重現(xiàn)性RSD 為0.43%。檢測取得了較好結(jié)果，滿足《城市污水處理廠污泥檢驗(yàn)方法》CJ/T 221-2005（13）[1]的要求。