玉山黑豬冷凍精液制作初探

易松強(qiáng)，姜樹林，余華陽，陳國良，林春斌，鄭小明，林克團(tuán)，李瑞麗，嚴(yán) 寒，寧 財(cái)*

（1.江西省畜牧技術(shù)推廣站，江西南昌330046；2.江西省玉山黑豬原種場；3.煙臺市農(nóng)業(yè)科學(xué)院；4.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院）

1 品種介紹

玉山黑豬，又稱贛東北黑豬[1]，主產(chǎn)于江西省玉山縣，曾廣泛分布于上饒市的鉛山、橫峰、廣豐、上饒縣等地，已有2 000余年飼養(yǎng)歷史。1995年，江西省種畜種禽鑒定委員會將贛東北黑豬命名為玉山黑豬。2006年玉山黑豬被農(nóng)業(yè)部列入第一批《國家級畜禽遺傳資源保護(hù)名錄》；2011年出版的《中國畜禽遺傳資源志·豬志》將江浙一帶黑豬合稱玉江豬，在江西省稱玉山黑豬；2013年，“玉山黑豬”獲批農(nóng)產(chǎn)品地理標(biāo)志登記保護(hù)。玉山黑豬為江西省優(yōu)良地方豬種，是該省第一個國家級地方豬保護(hù)品種。主要特性：毛色全黑，頭型分獅頭（占25%）和馬臉型（占75%）兩種。獅頭型頭大，額寬，且有較深的皺紋，嘴筒短、略翹，耳中等大，下垂；軀干背腰不平、腹下垂，體短，體型較小，體質(zhì)較疏松；四肢關(guān)節(jié)結(jié)實(shí)。馬臉型頭中等大，軀干背腰平直，體長。玉山黑豬具有適應(yīng)性強(qiáng)、耐粗飼、發(fā)情特征明顯、繁殖能力強(qiáng)、肉質(zhì)鮮嫩多汁等特點(diǎn)。主要缺點(diǎn)是生長速度較慢，胴體瘦肉率偏低。

20世紀(jì)80年代后期我國大量引進(jìn)外國瘦肉型豬后，為追求高產(chǎn)肉量和短期經(jīng)濟(jì)效益，養(yǎng)豬戶紛紛轉(zhuǎn)向養(yǎng)殖外來品種豬，玉山黑豬的飼養(yǎng)數(shù)量急劇下降。除保種場外，社會上已無玉山黑豬種公豬，母豬飼養(yǎng)量也已不足1 000頭（1981年調(diào)查時有生產(chǎn)公豬52頭，生產(chǎn)母豬9 700頭），2016年玉山黑豬被農(nóng)業(yè)部列為瀕危保護(hù)品種。

2 種公豬飼養(yǎng)管理

2.1 采精年齡

通常玉山黑豬種公豬在8月齡以上，體重在55kg左右，可以開始調(diào)教采精。

2.2 采精訓(xùn)練

人工采精前，應(yīng)反復(fù)訓(xùn)練種公豬在發(fā)情母豬或假臺畜上進(jìn)行采精。

2.3 飼養(yǎng)管理

一是提供充足的營養(yǎng)飼料，特別是采精期間補(bǔ)飼適量的新鮮胡蘿卜和優(yōu)質(zhì)飼料（蛋白質(zhì)含量不低于17%），每天飼喂1～2個鮮雞蛋；二是加強(qiáng)運(yùn)動，增強(qiáng)體質(zhì)，提高性欲和精子活力，降低畸形率；三是加強(qiáng)欄舍管理，單欄飼養(yǎng)，保證欄舍干凈衛(wèi)生，為種公豬提供舒適環(huán)境[2]。

2.4 采精時間

通常每周采集一次，在炎熱夏季和寒冷冬季停止采精。

2.5 采精方式

戴干凈一次性手套，用手握法采精。采集富含精子的射精部分（中間射精部分大約50～250mL；前、后射精部分丟棄）。

2.6 鮮精預(yù)稀釋

因采精地（玉山）與制作地（南昌）相隔較遠(yuǎn)（距離260km），所以應(yīng)對精液進(jìn)行預(yù)稀釋。采集好后，在實(shí)驗(yàn)室對原精進(jìn)行質(zhì)量檢測，活力60%以上的精液進(jìn)行預(yù)稀釋處理，通常加1倍量稀釋液。用An-Plusa營養(yǎng)稀釋液稀釋后，后用雙層保鮮袋裝好，扎緊袋口，防止溢出，袋上用記號筆標(biāo)識豬號、采精日期、采精量等相關(guān)信息。

3 運(yùn)輸

3.1 運(yùn)輸方式

汽車、火車（高鐵）。

3.2 運(yùn)輸中溫控

使用泡沫箱包裝，箱底墊放毛巾或紗布，減少運(yùn)輸途中的震動，然后將袋裝精液依次碼放好。箱內(nèi)放置溫度計(jì)，如果溫度較高，放置冰袋（外用棉布或毛巾包?。┰谂菽淅?，保證箱內(nèi)溫度在17℃左右。如條件許可，在汽車運(yùn)輸途中可使用17℃車載恒溫箱。

4 凍精制作

4.1 鮮精檢測及離心

4.1.1 鮮精檢測。預(yù)稀釋精液到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，記錄好豬號、采精日期、精液數(shù)量，通過電子顯微鏡檢測活力，活率需在60%以上。

4.1.2 鮮精離心。計(jì)算出總精子數(shù)A（體積乘密度）后，把預(yù)稀釋精液放進(jìn)17℃恒溫箱，同溫到17℃后，進(jìn)行離心操作。把預(yù)稀釋精液裝入50～500mL的離心瓶里，在17℃和重力800g的條件下離心15min。離心好后，將上清液小心倒出。

4.2 鮮精稀釋和平衡

4.2.1 鮮精稀釋。按凍后4億精子/mL的濃度，算出最需要添加的稀釋液體積。把17℃的Androhep CryoGuard冷卻營養(yǎng)稀釋液緩慢地加到沉淀精液中，以吸吐方式充分混合均勻，合并。再用剩余部分冷卻營養(yǎng)稀釋液洗滌瓶底，合并?；旌虾鬄樽罱K稀釋液總量的1/2。

4.2.2 平衡。把精液瓶置于17℃的水浴杯里，一同放進(jìn)4℃平衡柜，平衡2～4h。

4.3 二次稀釋和分裝

4.3.1 分裝前稀釋。按計(jì)算好的量，把4℃的Androhep CryoGuard冷凍稀釋劑緩慢地加到平衡后的精液中，輕輕晃動混合均勻。

4.3.2 細(xì)管分裝。在4℃的操作箱里，用冷凍精液分裝機(jī)把精液裝入0.25mL細(xì)管里，封口。細(xì)管印公豬信息，包括品種、生產(chǎn)日期、公豬號等。

表1 玉山黑豬冷凍精液生產(chǎn)記錄表

4.4 冷凍包裝

將分裝好的細(xì)管精液，鋪放在冷凍支架上，放入程控冷凍儀（IceCube）的冷凍室里，設(shè)置好預(yù)定的溫度控制曲線，充入液氮進(jìn)行冷凍制作。冷凍好的細(xì)管精液，應(yīng)及時裝入紗布袋內(nèi)，并標(biāo)識好豬號、生產(chǎn)日期、支數(shù)等信息，放放液氮罐中保存。

4.5 成品檢測

凍后1周進(jìn)行精液質(zhì)量檢測，冷凍好的細(xì)管精液要求活力在35%以上、畸形率在15%以下，否則應(yīng)廢棄。

5 結(jié)果與分析

玉山黑豬冷凍精液制作從2018年3月28日開始到2019年5月28日結(jié)束，共采集12次（見表1），采精種公豬138頭次，采精時間集中在每年的4、5、6月份為主，原則上每周采精1次。共采集到9個家系17頭公豬，采精公豬年齡在8個月到4歲間，原精總量16 363mL，制作數(shù)量為24 995支，經(jīng)檢測合格后，送國家家畜遺傳基因庫保存數(shù)量為22 715支。

根據(jù)表1，采精期間，共采集種公豬138頭次，其中精液活力在0.6以上的種公豬81頭次，有效比重為58.7%；共采集精液總量為16 363mL，活力在0.6以上的精液總量為9 890mL，有效比重為60.4%。平均每次采集精液量為118.6mL。

6 討論

玉山黑豬鮮精數(shù)量及合格率低于外來品種種豬，具體原因：一是鮮精數(shù)量。玉山黑豬屬于地方品種豬，每次采精量低于外來品種豬，與郭文華[3]“一般來說豬的一次射精量，我國地方品種豬為150～300mL,外國引入品種豬為250～400mL”的結(jié)論一致；二是種公豬營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。玉山黑豬飼料營養(yǎng)是參考外來公豬進(jìn)行配比平衡的，對采精玉山黑豬營養(yǎng)需要缺乏系統(tǒng)地分析與測算；三是運(yùn)輸溫控。17℃是理想值，運(yùn)輸途中多次轉(zhuǎn)接，會受到諸多因素影響很難控制在17℃范圍內(nèi)；四是冷凍曲線。針對豬精液冷凍制精目前還沒有專門研究，參考牛凍精的溫控曲線進(jìn)行制作。

本試驗(yàn)成功制作了玉山黑豬冷凍精液，可以長期保存好玉山黑豬種公豬資源。雖然豬冷凍精液制作目前處于探索階段，仍有很多需要去完善和改進(jìn)的地方，比如如何提高玉山黑豬種公豬性欲、單次采精量、精子活力、密度等，但制作玉山黑豬冷凍精液無疑為玉山黑豬地方豬種資源保護(hù)提供了一種有效的方式，為深入挖掘和利用玉山黑豬優(yōu)質(zhì)地方品種資源奠定基礎(chǔ)。