測試片方法快速檢測活性乳酸菌飲料中的乳酸菌總數(shù)

作者簡介：霍建偉（1983-），男，工程師，從事食品微生物檢測及食品安全質(zhì)量控制工作。

摘要： 國標(biāo)乳酸菌檢測方法中，對于僅含乳桿菌類的檢測，需要3天的時間，且需要在厭氧環(huán)境中培養(yǎng)，3M乳酸菌測試片方法，測試片自帶厭氧環(huán)境，可在正常有氧環(huán)境下培養(yǎng)，檢測時間2天，提高檢測效率，本文針對活性乳酸菌飲料（僅含乳桿菌類）在乳酸菌檢測時，對2種方法進(jìn)行了一致性比較，為企業(yè)更好的應(yīng)用該產(chǎn)品提供有效數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞：測試片方法，乳酸菌檢測，提高效率

0引言

活性乳酸菌飲料（僅包含乳桿菌類）含有大量的乳酸菌，一般出廠時乳酸菌含量大于107 CFU/ml， 目前國標(biāo)的檢測方法是GB 4789.35-2016乳酸菌檢測， 對于乳桿菌類的檢測，需要厭氧培養(yǎng)，72小時出具結(jié)果，企業(yè)多數(shù)采用的是厭氧罐加厭氧袋加厭氧指示劑的方式，為厭氧培養(yǎng)提供條件。

3M 乳酸菌測試片是一種即用型培養(yǎng)基系統(tǒng)，測試片含有氧氣清除的成分，使其能夠自帶厭氧環(huán)境，可直接在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，無需厭氧罐等輔助設(shè)備，且可以在48小時出具結(jié)果。

本文對2種方法進(jìn)行比較，通過大量實驗數(shù)據(jù)表明2種方法的一致性，并且3M 乳酸菌測試片方法能提高效率和快速出具檢測結(jié)果。

1 實驗

1.1材料、試劑和儀器

活性乳酸菌飲料（僅包含乳桿菌類），市場購買。

恒溫培養(yǎng)箱：36 ℃±1 ℃;天平：感量為0.1 g;均質(zhì)器;無菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭;無菌錐形瓶：容量250 mL、500 mL;無菌培養(yǎng)皿：直徑90 mm; 3MTM PetrifilmTM乳酸菌測試片;厭氧罐;厭氧劑;厭氧指示劑，MRS瓊脂培養(yǎng)基。

1.2方法：

1.2.1 樣品的處理

樣品應(yīng)先將其充分搖勻后，以無菌吸管吸取樣品25 mL 放入裝有225 mL生理鹽水（提前滅菌）的無菌錐形瓶中，充分振搖，制成1：10 的樣品勻液。用1 mL微量移液器吸取1：10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于裝有9 mL 生理鹽水的無菌試管中，制成1：100 的樣品勻液。 按上述操作順序，依次稀釋至10-6，10-7，10-8。

1.2.2? GB 4789.35-2016乳酸菌檢驗方法

GB 4789.35-2016乳酸菌檢驗中6.2.3.4 乳桿菌計數(shù)要求，根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計，選10-7，10-8適宜稀釋度，每個稀釋度吸取1mL樣液到平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。稀釋液移入平皿后，將冷卻至48 ℃的MRS瓊脂培養(yǎng)基，傾注入平皿約15mL，轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。36℃±1℃厭氧培養(yǎng)72h±2h。從樣品稀釋到平板傾注要求在15min內(nèi)完成。

1.2.3? 3M乳酸菌測試片方法

將上述對應(yīng)稀釋度的樣品，吸取1mL，揭開測試片上層膜，垂直加到測試片中央，將上層膜緩慢蓋下，避免氣泡產(chǎn)生，切勿使上層膜直接落下，將壓板放置在上層膜中央處，輕輕地壓下，使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上，切勿扭轉(zhuǎn)或滑動壓板，拿起壓板，靜置至少1min以使培養(yǎng)基凝固，每個稀釋度做兩個測試片。將測試片的透明面朝上置于培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過20片，36℃±1℃下需氧培養(yǎng)48h±2h。

2實驗結(jié)果與分析

2.1實驗結(jié)果見表1

2.2結(jié)果分析

2.2.1? Log差值分析方法：

統(tǒng)計2種檢測結(jié)果Log值差值的平均值，經(jīng)計算兩種方法的log差值平均值的絕對值為0.08，小于0.50，表明本次實驗中3M乳酸菌測試片方法和GB4789.35-2016方法有很好的一致性。（見表2）

2.2.2 配對t檢驗分析方法

以上檢測結(jié)果的配對t檢驗，P值是0.075，P值大于0.05，表明本次實驗中3M乳酸菌測試片方法和GB4789.35-2016方法的結(jié)果沒有統(tǒng)計學(xué)上的差異。

2.2.3結(jié)論

本次實驗表明，針對活性乳酸菌飲料（僅含乳桿菌類）的乳酸菌檢測，3M乳酸菌測試片方法和GB4789.35-2016乳酸菌檢測方法，無顯著性差異，一致性很好。

測試片方法操作簡單，自帶厭氧環(huán)境，無需厭氧罐和厭氧試劑等設(shè)備及耗材，提高了檢測效率，檢測時間為48h，相比傳統(tǒng)GB方法，能在更短時間內(nèi)獲得樣品的檢測結(jié)果。

參考文獻(xiàn)：

[1] GB 4789.35-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗 乳酸菌檢驗》

[2]SN/T 2775-2011 《商品化食品檢測試劑盒評價方法》

[3]ISO 16140-2：2016 Microbiology of the food chain – Method validation –Part 2： Protocol for the validation of alternative（proprietary） methods against a reference method

[4]AOAC 041701 3MTM PetrifilmTM Lactic Acid Bacteria Count Plate

霍建偉

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