• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    QuEChERS/UPLC-MS/MS法同時測定梅花鹿鹿鞭中18種磺胺

    2020-05-20 03:30:34黃勝廣王玉方趙卉
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年9期
    關(guān)鍵詞:梅花鹿磺胺

    黃勝廣 王玉方 趙卉

    摘要 [目的]采用分散固相萃取的前處理技術(shù),建立了一種UPLC-MS/MS(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry)法同時測定梅花鹿鹿鞭中18種磺胺的檢測方法。[方法]鹿鞭樣品以乙腈為提取劑,100 mg PSA、150 mg C18與50 mg中性氧化鋁為凈化劑。液相色譜條件:ACQUITY BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),流動相A為25 mmol/L甲酸乙腈,B為水,柱溫35 ℃;質(zhì)譜條件:正離子模式(ESI+),多反應(yīng)監(jiān)測(multiple reaction monitoring,MRM)模式。鹿鞭中磺胺含量采用外標(biāo)法定量。[結(jié)果]18種磺胺在0.05~50.00 ng/mL線性關(guān)系良好,決定系數(shù)R2均大于0.999,18種磺胺的檢出限(LOD)為0.05 μg/kg,定量限(LOQ)為0.15 μg/kg。18種磺胺的平均加樣回收率為83.5%~97.7%,RSD均小于5%。[結(jié)論]該方法具有操作簡便、凈化效果顯著、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、檢出限低等優(yōu)點(diǎn),可用于梅花鹿鹿鞭中18種磺胺的檢測。

    關(guān)鍵詞 QuEChERS;UPLC-MS/MS;梅花鹿;鹿鞭;磺胺

    Abstract [Objective]A method for the simultaneous determination of 18 sulfonamides in deer whip of Cervus nippon Temminck by UPLCMS/MS was developed by using the pretreatment technology of dispersed solid phase extraction. [Method]Deer whip samples were extracted with acetonitrile and purified with 100 mg PSA, 150 mg C18 and 50 mg neutral alumina. The UPLC analysis was carried out by a 35 ℃ thermostatic Waters Acquity UPLC BEH C18 column(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)with a mobile phase composed of 25 mmol/L formic acid acetonitrilewater for gradient elution at 0.3 mL/min. The detection was carried out on MS/MS with ESI in positive ion in the multiple reaction monitoring mode .The content of sulfonamides in pilose deer whip was quantified by external standard method.[Result] 18 kinds of sulfonamides had a good linear relationship between 0.05-50.00 ng/mL, the determination coefficient R2 were all greater than 0.999, LOD of 18 kinds of sulfonamides was 0.05 μg/kg, LOQ was 0.15 μg/kg. The average recovery of 18 sulfonamides was 83.5%-97.7%,RSD was less than 5%. [Conclusion]The method has the advantages of simple operation, remarkable purification effect, high sensitivity, good accuracy and low detection limit. It can be used for the determination of 18 sulfonamides in deer whip of Cervus nippon Temminck.

    Key words QuEChERS;UPLCMS/MS;Cervus nippon Temminck;Deep whip;Sulfonamides

    鹿鞭(Penis et Testis Cervi),又名鹿腎、鹿沖,系鹿科動物梅花鹿(Cervus nippon Temminck)、馬鹿(Cervuselaphus L.)的干燥帶睪丸的陰莖,其味甘、咸,性溫,具有補(bǔ)腎壯陽、固精益血的功能,可用于治療過度勞累所導(dǎo)致的身體損傷、腰酸腿痛、腎臟精氣陰陽不足、耳鳴、陽疹、宮冷不孕等癥[1]?;前奉愃幬铮╯ulfonamides,SAs)是由化學(xué)合成的一類抗生素,主要用來預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病,具有穩(wěn)定的化學(xué)性質(zhì)、抗菌高效、低毒、價(jià)格便宜和使用方便等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用到畜牧業(yè)上,并越來越受到養(yǎng)殖戶的重視。但磺胺類藥物在動物體內(nèi)代謝時間較長,食用含有磺胺類藥物的動物產(chǎn)品易在人體內(nèi)蓄積, 當(dāng)蓄積濃度超過一定值時會對人體健康產(chǎn)生危害[2]。人長期攝入含磺胺類藥物的動物性食品后,藥物不斷在人體內(nèi)蓄積,損害腎臟、耐菌株大量繁殖、破壞腸胃道微生物平衡等[3]。國際食品法典委員會和歐盟等規(guī)定食品中的磺胺總量不能超過100 μg/kg,我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部235號文件中規(guī)定磺胺類藥物的總殘留量最高為100 μg/kg[4]。

    目前,磺胺類藥物殘留的檢測方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[5-6] 、高效液相色譜法(HPLC)[7-10] 、毛細(xì)管電泳法[11-13]、酶聯(lián)免疫分析法[14-16]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS)[17-20]等。HPLC法靈敏度低,抗干擾能力差;GC-MS法樣品需經(jīng)衍生化處理,操作復(fù)雜;毛細(xì)管電泳法由于進(jìn)樣量少,因而制備能力差,靈敏度較低;酶聯(lián)免疫分析法重復(fù)性較低、穩(wěn)定性較差以及存在交叉反應(yīng)等;UPLC-MS法具有選擇性強(qiáng)、靈敏度高、檢測限低等優(yōu)點(diǎn),是目前最常采用的獸藥殘留的檢測方法。

    QuEChERS(quick easy cheap effective rugged safe),是近年來國際上最新發(fā)展起來的一種快速檢測的樣品前處理技術(shù),具有快速、準(zhǔn)確、高效的特點(diǎn)[21-23]。目前,QuEChERS結(jié)合UPLC-MS法測定鹿鞭中磺胺類藥物的檢測方法鮮見報(bào)道。該研究采用QuEChERS法提取鹿鞭中的磺胺類藥物,以PSA、C18和中性氧化鋁為凈化劑,優(yōu)化了最優(yōu)提取和凈化條件,并通過UPLC-MS/MS以外標(biāo)法對市售鹿鞭中的18種磺胺進(jìn)行了含量測定,以期為鹿茸的質(zhì)量評價(jià)研究提供了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 儀器。

    超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(XEVO TQ-MS質(zhì)譜儀,美國Waters公司);多樣平行蒸發(fā)儀(Syncore101,瑞士步琪公司);超純水器(美國Milli-Q Advantage A10);電子天平(XS205DU,梅特勒-托利多公司);高速冷凍離心機(jī)(Sigma3-30k,德國);渦旋振蕩器(Multi-Tube Vortexer);超聲波清洗儀(上海易凈超聲波儀器有限公司)。

    1.1.2 試劑。

    甲醇、乙腈、正己烷、乙酸乙酯,均購于賽默飛世爾科技公司,純度均大于99.99%;PSA(乙二胺基-N-丙基)粉末、C18粉末、中性氧化鋁粉末,40~63 μm,分析純,上海安譜科技股份有限公司;無水硫酸鈉、氯化鈉,分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;磺胺醋酰(sulfacetamide)、磺胺吡啶(sulfapyridine)、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、磺胺甲惡唑(sulfamethoxazole)、磺胺噻唑(sulfathiazole)、磺胺甲基嘧啶(sulfamerazine)、磺胺二甲惡唑(sulfamoxol)、磺胺異惡唑(sulfisoxazole)、磺胺甲噻二唑(sulfamethizole)、磺胺苯酰(sulfabenzamide)、磺胺二甲嘧啶(sulfamethazine)、磺胺甲氧噠嗪(sulfamethoxypyridazine)、磺胺間甲氧嘧啶(sulfamonomethoxine)、磺胺氯噠嗪(sulfachloropyridazine)、磺胺喹惡啉(sulfachinoxalin)、磺胺鄰二甲氧嘧啶(sulfadoxine)、磺胺間二甲氧嘧啶(sulfadimethoxypyrimidine)、磺胺苯吡唑(sulfaphenazole),純度均98%以上,德國Dr.Ehrensorfer公司;超純水由超純水機(jī)制備,電阻率≥18.25 MΩ。

    1.1.3 試材。梅花鹿鹿鞭樣品采集自吉林省,共計(jì)60根,將鹿鞭樣品進(jìn)行編號,切片,置于100 ℃烘箱中烘24 h,粉碎,保存于4 ℃的冰箱中待測。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。

    精密稱取各磺胺標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg(精確到0.1 mg)置于50 mL容量瓶中,用甲醇定容,配制成200 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液,于4 ℃保存。

    1.2.2 供試品溶液的制備。

    1.2.2.1 提取。

    準(zhǔn)確稱取鹿鞭樣品1.0 g(精確到0.01 g),置于50 mL玻璃試管中,加入10 mL乙腈,漩渦2 min,使其充分混勻,置于超聲儀中超聲提取20 min后,靜止3 min后,將提取液倒入50 mL聚丙烯離心管中,殘?jiān)屑尤?0 mL乙腈重復(fù)上述步驟提取2次,合并提取液,置于離心機(jī)中,10 000 r/min離心10 min,取上清液,于蒸發(fā)儀中蒸發(fā)近干,待復(fù)溶凈化。

    1.2.2.2 凈化。

    加5 mL的甲醇-水(1∶1,V/V)復(fù)溶,加10 mL正己烷除脂,渦旋混勻,靜置待分層后取下清液轉(zhuǎn)移到裝有100 mg的C18、100 mg PSA和50 mg中性氧化鋁的10 mL離心管中,渦旋5 min充分混勻,置于4 ℃的離心機(jī)中,以15 000 r/min離心15 min,取上清液經(jīng)0.22 μm水系濾膜超濾后上機(jī)測定。

    1.2.3 色譜條件。

    色譜柱為ACQUITYBEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm);柱溫為35 ℃;流速為0.3 mL/min;進(jìn)樣量3 μL;流動相A為25 mmol/L甲酸乙腈,B為水。梯度洗脫程序見表1。

    1.2.4 質(zhì)譜條件。

    電離方式:正離子模式(ESI+);掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);毛細(xì)管電壓:3 kV;離子源溫度:150 ℃;脫溶劑溫度:450 ℃;碰撞氣流量:0.19 mL/min;脫溶劑氣流量:1 000 L/h。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 提取劑的選擇與優(yōu)化

    試驗(yàn)對乙腈、乙酸乙酯、甲醇、正己烷4種提取溶劑進(jìn)行考察,結(jié)果表明(圖1),以強(qiáng)極性的甲醇為提取溶劑時,濃縮后瓶上附著有大量蛋白質(zhì)變性產(chǎn)物,形成較大的顆粒狀物質(zhì),復(fù)溶時無法除盡,說明顆粒狀物質(zhì)包裹了目標(biāo)物,致使回收率下降;用正己烷、乙酸乙酯提取時,凈化后有較多絮狀脂肪難于分離沉淀,不利于過膜超濾;乙腈為提取溶劑時,能很好地分離沉淀蛋白質(zhì)和脂肪,18種磺胺的回收率均高于甲醇、正己烷、乙酸乙酯。因此試驗(yàn)以乙腈作為提取劑。

    2.2 提取條件的選擇與優(yōu)化

    黃勝廣等[24]研究發(fā)現(xiàn)以玻璃試管為容器對目標(biāo)物的提取有利,試驗(yàn)對超聲時間(5、10、15、20 min)進(jìn)行考察,結(jié)果發(fā)現(xiàn)(圖2),以20 min提取效果最好。

    2.3 凈化劑的選擇與優(yōu)化

    常用的凈化劑有PSA、C18、中性氧化鋁、石墨碳化黑和無水硫酸鎂等。無水硫酸鎂常用于吸附水分,石墨碳化黑可以有效地去除色素,對鹿鞭中的脂類無凈化作用;PSA和C18都能除去基質(zhì)中的脂肪、蛋白質(zhì),中性氧化鋁可以除去一部分的脂肪。該試驗(yàn)采用分散固相萃取技術(shù)進(jìn)行凈化,根據(jù)鹿鞭的主要成分及目標(biāo)物的性質(zhì),以PSA(100、150、200 mg)與C18(100、150、200 mg)、中性氧化鋁(50 mg)組合,通過加樣回收率考察最優(yōu)凈化條件。結(jié)果表明(圖3),以100 mg PSA、150 mg C18、50 mg中性氧化鋁凈化時為最優(yōu)凈化條件,18種磺胺的回收率為86.4%~106.5%,均能滿足試驗(yàn)需求。隨著PSA用量的增加、C18超過150 mg,18種磺胺的回收率反而降低,這可能是過量的PSA、C18會吸附一部分的磺胺,致使回收率降低。

    2.4 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

    根據(jù)磺胺類藥物的結(jié)構(gòu),通過正離子、負(fù)離子掃描模式對比發(fā)現(xiàn),[M+H]+產(chǎn)生的子離子豐度相對穩(wěn)定,響應(yīng)值比較高,保證了定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用針泵連續(xù)直接進(jìn)樣,選擇[M+H]+為母離子進(jìn)行調(diào)諧,分別對碰撞電壓、錐孔電壓等條件進(jìn)行了優(yōu)化,具體參數(shù)見表2。

    2.5 色譜條件的優(yōu)化

    試驗(yàn)考察了乙腈-水、25 mmol/L甲酸乙腈-水、乙腈-25 mmol/L甲酸水3種流動相,結(jié)果發(fā)現(xiàn)(圖4),以25 mmol/L甲酸乙腈-水按“1.2.3”條件下洗脫時,18種磺胺的響應(yīng)值高、干擾少、峰形好、檢出限低,因此最終選定25 mmol/L甲酸乙腈-水為流動相。

    2.6 方法學(xué)考察

    2.6.1 線性關(guān)系、檢出限和定量限。

    將混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液用甲醇進(jìn)行梯度稀釋,配成濃度為0.025、0.05、0.075、0.25、0.5、1、2、5、10、25、50 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液,以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)品濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將18種磺胺混合對照品溶液用甲醇逐級稀釋后,以信噪比(S/N)的3倍的溶液濃度為檢出限(LOD),S/N的10倍的溶液濃度為定量限(LOQ)。18種磺胺的回歸方程、線性范圍、 檢出限和定量限見表3。從表3可以看出,18種磺胺在0.05~50.00 ng/mL線性關(guān)系良好,決定系數(shù)R2均大于0.999,18種磺胺的LOD為0.05 μg/kg,LOQ為0.15 μg/kg。

    2.6.2 精密度試驗(yàn)。

    精密吸取10 ng/mL的18種磺胺混合對照品溶液3 μL,按“1.2.4”質(zhì)譜條件和“1.2.3”色譜條件進(jìn)樣分析,連續(xù)進(jìn)樣6次,測定峰面積,計(jì)算18種磺胺的RSD。結(jié)果表明,18種磺胺的峰面積RSD為3.2%~4.8%,表明儀器精密度良好。

    2.6.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)。

    精密稱取1.0 g鹿鞭樣品,按“1.2.2”方法制備供試品溶液,分別在0、2、4、8、16、24、48 h按“1.2.3”色譜條件和“1.2.4”質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析,每次進(jìn)樣3 μL,測定峰面積,計(jì)算18種磺胺的RSD。結(jié)果表明,18種磺胺的峰面積RSD為2.9%~4.5%,表明儀器穩(wěn)定性良好。

    2.6.4 重復(fù)性試驗(yàn)。

    稱取同一鹿鞭樣品6份,按“1.2.2”方法制備供試品溶液,按“1.2.4”質(zhì)譜條件和“1.2.3”色譜條件進(jìn)樣分析,每次進(jìn)樣3 μL,測定峰面積,計(jì)算18種磺胺含量和RSD,結(jié)果發(fā)現(xiàn),18種磺胺的RSD為2.7%~4.3%,表明該試驗(yàn)重復(fù)性良好。

    2.6.5 加樣回收試驗(yàn)。

    精密稱取9份已知18種磺胺的鹿鞭樣品1.0 g,按照低、中、高劑量加入適量的18種磺胺標(biāo)準(zhǔn)品,按“1.2.2”方法制備供試品溶液,按“1.2.4”質(zhì)譜條件和“1.2.3”色譜條件進(jìn)樣分析,每次進(jìn)樣3 μL,測定峰面積,計(jì)算18種磺胺含量和回收率及RSD。結(jié)果如表4,18種磺胺的平均加標(biāo)回收率為81.2%~98.4%,RSD為1.2%~4.8%,表明該試驗(yàn)準(zhǔn)確度較高。

    2.7 實(shí)際樣品檢測

    試驗(yàn)對60根鹿鞭樣品按“1.2.2”進(jìn)行前處理,按“1.2.4”質(zhì)譜條件和“1.2.3”色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),1份檢出磺胺甲惡唑,含量為0.14 μg/kg,其余的均未檢出。

    3 結(jié)論

    該試驗(yàn)以乙腈為提取溶劑、超聲渦旋提取,PSA、C18與中性氧化鋁凈化,建立以UPLC-MS/MS法檢測梅花鹿鹿鞭中18種磺胺的檢測方法。該方法具有操作簡便、凈化效果顯著、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、檢出限低等優(yōu)點(diǎn),可用于梅花鹿鹿鞭中18種磺胺的檢測。該方法的建立為鹿鞭的質(zhì)量評價(jià)研究提供了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 《四川中藥志》協(xié)作編寫組.四川中藥志:第1卷[M].成都:四川人民出版社,1979.

    [2] 孫亞奇,郭京超,潘源虎,等.磺胺類藥物代謝與殘留消除以及檢測方法研究進(jìn)展[J].中國獸藥雜志,2019,53(2):66-75.

    [3] 于淼.養(yǎng)殖業(yè)中磺胺類藥物殘留的危害及現(xiàn)狀[J].現(xiàn)代畜牧科技,2015(2):133.

    [4] 動物性食品中獸藥最高殘留限量(農(nóng)業(yè)部2002年235號公告)[J].中國豬業(yè),2010(8):10-12.

    [5] 趙曉鳳,楊中.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬肉組織中的磺胺二甲嘧啶殘留量[J].飼料工業(yè),2007(2):54-57.

    [6] 廖春蓉,郭雅蓉.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測葡萄中苯氟磺胺和甲苯氟磺胺殘留量[J].醫(yī)學(xué)動物防制,2017,33(2):236-238.

    [7] 李儀,張炎,張雅婷,等.微萃取超高效液相色譜檢測磺胺類藥物的研究[J].華東師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2019(2):156-163.

    [8] 楊舒婷,林偉銳,梁建華,等.固相萃取-高效液相色譜法測定水中磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基異噁唑的方法探究[J].肇慶學(xué)院學(xué)報(bào),2019,40(2):40-44.

    [9] 段羚.高效液相色譜法測定飲料中乙?;前匪徕浐康牟淮_定度分析[J].現(xiàn)代食品,2018(20):91-95.

    [10] 馮濤,劉道中,章安源,等.高效液相色譜法測定恩諾沙星注射液中的磺胺類藥物[J].山東畜牧獸醫(yī),2019,40(1):3-5.

    [11] 周靖雯,吳友誼,殷斌.中空纖維膜液相微萃取-毛細(xì)管電泳法測定環(huán)境水樣中的4種磺胺類藥物[J].理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊),2018,54(6):627-633.

    [12] 陳建,楊靈芝,張金金,等.毛細(xì)管電泳法分離9種磺胺類藥物[J].分析儀器,2018(3):51-56.

    [13] 韓燕禎,朱懷嬌,石紅梅,等.高效毛細(xì)管電泳法測定泳池中尿液指示物乙?;前匪徕沎J].分析測試學(xué)報(bào),2018,37(7):854-857.

    [14] 黃學(xué)泓,陳燕勤,林文.酶聯(lián)免疫分析法測定豬腸衣中磺胺二甲基嘧啶殘留量[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊,2011,21(4):21-22.

    猜你喜歡
    梅花鹿磺胺
    梅花鹿
    梅花鹿和棉花
    幼兒100(2021年15期)2021-05-26 06:21:52
    貪玩的小梅花鹿
    貪玩的小梅花鹿
    磺胺嘧啶銀混懸液在二度燒傷創(chuàng)面治療中的應(yīng)用
    驕傲的梅花鹿
    養(yǎng)豬過程中要慎用磺胺藥
    養(yǎng)豬不能濫用磺胺藥
    24%烯·滅·氟磺胺乳油防除大豆田雜草藥效試驗(yàn)
    兩種磺胺嘧啶鋅配合物的合成、晶體結(jié)構(gòu)和熒光性質(zhì)
    国产免费一级a男人的天堂| 一区福利在线观看| 美女大奶头视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 女同久久另类99精品国产91| 精品熟女少妇av免费看| 免费观看在线日韩| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美三级亚洲精品| 边亲边吃奶的免费视频| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲精品自拍成人| 国产一区二区三区av在线 | 日日干狠狠操夜夜爽| 一本一本综合久久| 国产大屁股一区二区在线视频| www.av在线官网国产| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 99热只有精品国产| 六月丁香七月| 天堂影院成人在线观看| 久久精品91蜜桃| 精品一区二区免费观看| 夜夜爽天天搞| 国产乱人偷精品视频| 久久鲁丝午夜福利片| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久久久久国产a免费观看| 一本一本综合久久| 国产在线男女| 国产精品久久久久久久久免| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| or卡值多少钱| 国产精品久久久久久av不卡| 久久国内精品自在自线图片| 热99re8久久精品国产| 人妻久久中文字幕网| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 国产精品一二三区在线看| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲国产精品成人综合色| 国产成人a∨麻豆精品| 久久久色成人| 免费人成视频x8x8入口观看| 在线观看一区二区三区| 日韩精品有码人妻一区| 国产精品,欧美在线| 精品国产三级普通话版| 午夜福利高清视频| 我的老师免费观看完整版| 亚州av有码| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 高清毛片免费看| 网址你懂的国产日韩在线| www日本黄色视频网| 校园人妻丝袜中文字幕| 午夜福利成人在线免费观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 色吧在线观看| 成人av在线播放网站| 国产 一区 欧美 日韩| 女同久久另类99精品国产91| 天堂√8在线中文| 一区二区三区免费毛片| 熟女人妻精品中文字幕| 免费av观看视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲欧美成人精品一区二区| 99视频精品全部免费 在线| 九草在线视频观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 精品久久久久久久久久免费视频| 日韩一区二区三区影片| 亚洲在线观看片| 久久久久久久久久久免费av| 色哟哟哟哟哟哟| 久久精品人妻少妇| 亚洲美女视频黄频| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 少妇熟女欧美另类| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲在久久综合| 免费看a级黄色片| 日韩精品有码人妻一区| 草草在线视频免费看| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 久久6这里有精品| 嫩草影院入口| 晚上一个人看的免费电影| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 少妇的逼好多水| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| or卡值多少钱| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 免费搜索国产男女视频| 午夜免费激情av| 国产麻豆成人av免费视频| 中文字幕制服av| 黄色欧美视频在线观看| 大香蕉久久网| 不卡一级毛片| 亚洲av免费在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| а√天堂www在线а√下载| 久久久久网色| 国产乱人偷精品视频| 国产高清不卡午夜福利| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产亚洲91精品色在线| а√天堂www在线а√下载| 日本欧美国产在线视频| 51国产日韩欧美| 中出人妻视频一区二区| 久久久久国产网址| 身体一侧抽搐| 精品久久久久久久久亚洲| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产黄a三级三级三级人| 中国国产av一级| 欧美激情在线99| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日韩三级伦理在线观看| 热99re8久久精品国产| 搞女人的毛片| 国产精品av视频在线免费观看| 99久久精品国产国产毛片| 精品国内亚洲2022精品成人| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲精品影视一区二区三区av| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 天堂中文最新版在线下载 | 成人av在线播放网站| 在线播放无遮挡| 日韩中字成人| 久久久久九九精品影院| 午夜精品一区二区三区免费看| 欧美精品一区二区大全| 青青草视频在线视频观看| 午夜福利成人在线免费观看| ponron亚洲| 乱人视频在线观看| av黄色大香蕉| 亚洲欧美精品专区久久| 性插视频无遮挡在线免费观看| 天堂影院成人在线观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 男女视频在线观看网站免费| kizo精华| 3wmmmm亚洲av在线观看| 99久国产av精品国产电影| 午夜视频国产福利| 久久99热这里只有精品18| 国产片特级美女逼逼视频| 国产精品人妻久久久久久| 久久国产乱子免费精品| 黄色视频,在线免费观看| 99在线视频只有这里精品首页| 中文字幕久久专区| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲成人中文字幕在线播放| 91麻豆精品激情在线观看国产| 日本免费a在线| 乱系列少妇在线播放| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久久久久久久久免费av| av国产免费在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 少妇的逼水好多| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 中国美女看黄片| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久精品国产自在天天线| 春色校园在线视频观看| 久久鲁丝午夜福利片| 国产精品人妻久久久影院| 韩国av在线不卡| 色综合色国产| 中国国产av一级| 老司机福利观看| 欧美高清成人免费视频www| 中文字幕av成人在线电影| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久久精品大字幕| 不卡一级毛片| 亚洲综合色惰| 亚洲最大成人av| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 中文字幕久久专区| 12—13女人毛片做爰片一| av在线天堂中文字幕| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美激情久久久久久爽电影| 最新中文字幕久久久久| 99久久精品国产国产毛片| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产av不卡久久| 久久草成人影院| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 亚洲第一电影网av| 男的添女的下面高潮视频| 色播亚洲综合网| 日韩视频在线欧美| 免费av毛片视频| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久久久久久久久久免费av| 国产精品女同一区二区软件| 99热精品在线国产| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久精品综合一区二区三区| 真实男女啪啪啪动态图| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产精华一区二区三区| 黄色一级大片看看| 嫩草影院精品99| 久久久久久久久久久丰满| 2022亚洲国产成人精品| 欧美色视频一区免费| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 精品日产1卡2卡| 色哟哟哟哟哟哟| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产色婷婷99| 国产成人91sexporn| 美女cb高潮喷水在线观看| 天堂网av新在线| 日韩人妻高清精品专区| 日韩三级伦理在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲成人久久爱视频| 国产在线男女| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲精品粉嫩美女一区| 美女 人体艺术 gogo| 国产精品不卡视频一区二区| av在线观看视频网站免费| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲美女搞黄在线观看| 中文欧美无线码| 精品欧美国产一区二区三| 日本熟妇午夜| 青春草亚洲视频在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 黄片无遮挡物在线观看| 一级黄片播放器| 全区人妻精品视频| 丝袜美腿在线中文| 亚洲在久久综合| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产日韩欧美在线精品| 日韩制服骚丝袜av| 性欧美人与动物交配| 91久久精品电影网| 一本一本综合久久| 小说图片视频综合网站| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 在线国产一区二区在线| 亚洲18禁久久av| 高清毛片免费看| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲国产色片| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日本av手机在线免费观看| 日韩一区二区视频免费看| www.色视频.com| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲第一区二区三区不卡| 最近中文字幕高清免费大全6| av专区在线播放| 国产私拍福利视频在线观看| 99久久人妻综合| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲国产精品成人久久小说 | 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 天堂网av新在线| 精品一区二区免费观看| 99热这里只有精品一区| 精品久久久久久久久亚洲| 久久人人爽人人片av| 12—13女人毛片做爰片一| 午夜老司机福利剧场| 久久久久国产网址| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美高清成人免费视频www| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品人妻久久久影院| 直男gayav资源| 日本色播在线视频| 免费看av在线观看网站| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久99久视频精品免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产成人a∨麻豆精品| 特级一级黄色大片| 欧美一区二区亚洲| 麻豆一二三区av精品| 亚洲精品日韩av片在线观看| 精品免费久久久久久久清纯| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 最后的刺客免费高清国语| 精品久久久久久久久久免费视频| 此物有八面人人有两片| 69人妻影院| 日本一本二区三区精品| 日日啪夜夜撸| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲无线观看免费| 免费看美女性在线毛片视频| 国产免费男女视频| 亚洲av一区综合| 欧美高清成人免费视频www| 变态另类丝袜制服| 日韩大尺度精品在线看网址| 97超视频在线观看视频| 国产成人a区在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 人妻久久中文字幕网| 精品人妻视频免费看| 国产视频内射| 黄片无遮挡物在线观看| 成人二区视频| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品一区二区三区四区久久| 午夜激情欧美在线| 少妇的逼水好多| 欧美日本亚洲视频在线播放| 一区二区三区四区激情视频 | 蜜臀久久99精品久久宅男| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产欧美日韩精品一区二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 成人综合一区亚洲| 天堂√8在线中文| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲精品色激情综合| 级片在线观看| 国产成年人精品一区二区| 国产高清三级在线| 国产精品人妻久久久影院| 真实男女啪啪啪动态图| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 在线观看一区二区三区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| eeuss影院久久| 午夜激情欧美在线| 欧美三级亚洲精品| 国模一区二区三区四区视频| 免费观看在线日韩| 嫩草影院入口| 特级一级黄色大片| 一个人免费在线观看电影| 欧美人与善性xxx| 观看美女的网站| 免费看光身美女| 成人午夜高清在线视频| 亚洲经典国产精华液单| 欧美成人一区二区免费高清观看| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲国产精品成人久久小说 | 特大巨黑吊av在线直播| 免费观看a级毛片全部| 欧美成人免费av一区二区三区| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲第一电影网av| 日韩三级伦理在线观看| 日韩一区二区视频免费看| 色综合站精品国产| 麻豆成人av视频| 欧美日韩乱码在线| 三级经典国产精品| 亚洲精品国产av成人精品| 熟女电影av网| 一本一本综合久久| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美成人免费av一区二区三区| 26uuu在线亚洲综合色| 中文字幕制服av| 成人国产麻豆网| 国产久久久一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 99热这里只有精品一区| 免费电影在线观看免费观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久久久久久午夜电影| 亚洲成av人片在线播放无| 18禁在线播放成人免费| 亚洲欧美日韩东京热| 日韩av在线大香蕉| 女同久久另类99精品国产91| 国产真实乱freesex| 男人舔奶头视频| 女人被狂操c到高潮| 免费观看a级毛片全部| 内地一区二区视频在线| 免费电影在线观看免费观看| 99久久精品一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 一个人看的www免费观看视频| 性色avwww在线观看| 精品一区二区三区人妻视频| 久久久久性生活片| 中文欧美无线码| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 免费观看精品视频网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久久久久久久久成人| 久久午夜福利片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 天美传媒精品一区二区| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 精品无人区乱码1区二区| 在线观看66精品国产| 国产精品精品国产色婷婷| 精品久久久久久久久久免费视频| 日韩中字成人| 99热这里只有是精品在线观看| 91久久精品电影网| 男插女下体视频免费在线播放| 白带黄色成豆腐渣| av在线蜜桃| 久久久精品欧美日韩精品| 99热精品在线国产| 精品一区二区免费观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 精品不卡国产一区二区三区| 99热只有精品国产| 99热这里只有精品一区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产美女午夜福利| av.在线天堂| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国内精品一区二区在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品野战在线观看| 亚洲无线在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 男人的好看免费观看在线视频| 国产乱人视频| 91精品国产九色| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产欧美日韩精品一区二区| а√天堂www在线а√下载| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产真实乱freesex| 亚洲自拍偷在线| 亚洲第一电影网av| 国国产精品蜜臀av免费| 国产成人freesex在线| 日韩高清综合在线| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 美女国产视频在线观看| 波多野结衣巨乳人妻| 日日干狠狠操夜夜爽| 全区人妻精品视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久亚洲精品不卡| 成人一区二区视频在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 成人特级黄色片久久久久久久| 午夜激情福利司机影院| 国产高清激情床上av| 欧美最黄视频在线播放免费| 欧美日韩乱码在线| av.在线天堂| a级毛色黄片| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 国产精品乱码一区二三区的特点| 禁无遮挡网站| 久久人人精品亚洲av| 日本在线视频免费播放| 有码 亚洲区| 久久鲁丝午夜福利片| 毛片女人毛片| 人人妻人人澡欧美一区二区| 日韩欧美国产在线观看| 舔av片在线| 白带黄色成豆腐渣| 精品人妻熟女av久视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产女主播在线喷水免费视频网站 | a级毛片免费高清观看在线播放| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲欧美清纯卡通| 国产精品福利在线免费观看| 天堂影院成人在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 成人av在线播放网站| 日本黄大片高清| 国产美女午夜福利| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲成a人片在线一区二区| 中文欧美无线码| 国产一级毛片在线| 久久精品国产清高在天天线| 97超碰精品成人国产| 久久午夜福利片| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲国产精品国产精品| 激情 狠狠 欧美| 小说图片视频综合网站| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久久久久伊人网av| 97超碰精品成人国产| 一边摸一边抽搐一进一小说| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久精品国产亚洲av天美| 婷婷六月久久综合丁香| 精品人妻一区二区三区麻豆| 黑人高潮一二区| 午夜精品一区二区三区免费看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产黄片视频在线免费观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 欧美激情在线99| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲精品456在线播放app| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 美女 人体艺术 gogo| 99久久精品热视频| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品无大码| 日韩视频在线欧美| 欧美在线一区亚洲| 国产三级中文精品| 国产大屁股一区二区在线视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久精品91蜜桃| 嘟嘟电影网在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 18禁在线播放成人免费| 国产极品精品免费视频能看的| 91精品国产九色| 国产成人福利小说| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美色欧美亚洲另类二区| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲,欧美,日韩| 欧美色视频一区免费| 日日啪夜夜撸| 特大巨黑吊av在线直播| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品一区二区三区四区久久| 可以在线观看毛片的网站| 有码 亚洲区| 在线国产一区二区在线| 午夜亚洲福利在线播放| 不卡视频在线观看欧美| 精品久久久久久久末码| 色哟哟哟哟哟哟| 99热全是精品| 少妇丰满av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲人成网站在线播| 国产精品爽爽va在线观看网站| 成人特级黄色片久久久久久久| 中出人妻视频一区二区| 久久久久久久午夜电影| 99视频精品全部免费 在线| 国产一级毛片在线| 男女边吃奶边做爰视频| 插逼视频在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 一级毛片电影观看 | 国产亚洲5aaaaa淫片| 天堂网av新在线| av卡一久久| 国产精品无大码| 美女被艹到高潮喷水动态| 一区二区三区免费毛片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲精品国产av成人精品| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 2021天堂中文幕一二区在线观| 精品久久久久久久久久免费视频| 久久韩国三级中文字幕| 村上凉子中文字幕在线| 久久这里有精品视频免费| 99riav亚洲国产免费| 亚洲精品日韩av片在线观看|