花生和土壤中噻蟲胺超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測及分析方法

李清華，任立瑞，尹明明，陳福良，李文明

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，鄭州 450000）

噻蟲胺（clothianidin），分子式為C6H8ClN5O2S，是高效、安全、高選擇性的一類新煙堿類農(nóng)藥，具有卓越的內(nèi)吸、觸殺和胃毒作用。2012年，噻蟲胺在我國取得登記，已登記的噻蟲胺劑型以顆粒劑和懸浮劑為主，此外還有水分散粒劑、懸浮種衣劑和可濕性粉劑等。噻蟲胺已被廣泛用于水稻、番茄和茶樹等作物，用以防治稻飛虱、蚜蟲等害蟲[1]。近年來，已報(bào)道關(guān)于噻蟲胺的殘留檢測方法有：液相色譜法（LC）[2-3]，高效液相色譜法（HPLC）[4-6]，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）[7-9]，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）[10-12]。前處理方法有：基質(zhì)分散萃取法（MDE）[13]，固相萃取法（SPE）[14]，分散固相萃?。―SPE）[15]，液液微萃取法（LLM）[16]。檢測作物有：韭菜[17]、草莓[18]、綠豆[19]等。目前，關(guān)于噻蟲胺在花生上的殘留及分布情況尚未見報(bào)道，我國也尚未制定噻蟲胺在花生中的MRL值[20]。因此，本文建立了同時(shí)檢測花生及土壤中噻蟲胺殘留的QuEChERS方法及超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）檢測方法，為噻蟲胺在花生中的殘留檢測提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

XevoTM TQ-S超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜儀（UPLCMS/MS），美國沃特世公司；BSA224S-CW電子天平，德國Sartorius公司；Vottex QL-861渦旋儀，海門市其林貝爾儀器制造有限公司。

99.0%噻蟲胺標(biāo)樣，德國Ehrenstorfer公司；18%噻蟲胺包埋顆粒劑，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所；乙腈（色譜純），美國Fisher Scientific公司；乙腈（分析純），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；NaCl（分析純）、無水MgSO4（分析純），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；PSA、C18，美國安捷倫公司；純凈水，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 儀器條件

色譜條件：Acquity UPLC BEH C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），美國沃特世公司；柱溫：35℃；流動相：乙腈＋0.2%甲酸水溶液（體積比90∶10）；流速：0.28 mL/min；進(jìn)樣量：3 μL。

質(zhì)譜條件：ESI正離子源模式電離；多反應(yīng)檢測（MRM）；毛細(xì)管電壓：3.0 kV；錐孔電壓：52 V；離子源溫度：150℃；脫溶劑溫度：300℃；脫溶劑氣流量：500 L/h；錐孔氣流量：50 L/h；定量離子對：168.80/249.90。

圖1為0.1 mg/L噻蟲胺乙腈溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，在上述液相色譜條件下，噻蟲胺的相對保留時(shí)間為1.33 min。

1.2.2 樣品前處理

分別稱取花生仁、花生殼、土壤各10.0 g，花生葉片5.0 g，置于50 mL離心管中，加入5 mL超純水（花生葉片不加水），加入10 mL乙腈，振蕩10 min；再加1 g NaCl和4 g無水MgSO4，振蕩5 min，4 000 r/min離心5 min。取1.5 mL上清液至裝有50 mg PSA和150 mg無水MgSO4的2 mL離心管中（花生仁、葉片凈化劑為50 mg PSA和50 mg C18），渦旋2 min，以5 000 r/min速度離心5 min，將上清液過0.22 μm濾膜至2 mL進(jìn)樣瓶，待測。

圖1 0.1 mg/L 噻蟲胺乙腈溶劑標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

稱取噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)品0.010 1 g于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，制備200 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置于4℃冰箱保存。分別用乙腈將噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液梯度稀釋至0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500、1.000、2.000 mg/L，作為噻蟲胺溶劑標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。用空白基質(zhì)提取液配制相同濃度梯度的噻蟲胺溶液，作為噻蟲胺基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性相關(guān)性和基質(zhì)效應(yīng)

將噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液在上述儀器條件下測定，以噻蟲胺濃度與對應(yīng)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)。結(jié)果表明，在0.005～2.000 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，y=294 824x＋8 145.6，R2=0.999 3，線性關(guān)系良好。以方法的最低檢測濃度0.005 mg/kg為定量限。基質(zhì)效應(yīng)（ME值）為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率/溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，當(dāng)ME值大于1.1時(shí)，表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；ME值小于0.9時(shí)，表現(xiàn)為基質(zhì)減弱效應(yīng)；當(dāng)ME值介于0.9～1.1時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)可以忽略[21]。由表1可知，花生葉片和花生殼均存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，故需引入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線校正。

2.2 添加回收率與精密度

分別在空白花生葉片、花生仁、花生殼及土壤樣品中添加3個(gè)水平的噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，使得噻蟲胺添加濃度分別為0.01、0.10、1.00 mg/kg，每個(gè)添加水平重復(fù)5次。將添加樣品密封，靜置2 h后，按照1.2.2操作，得到的添加回收樣品，采用1.2.1分析方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。當(dāng)添加濃度為0.01～1.00 mg/kg時(shí)，噻蟲胺在3種花生基質(zhì)中平均添加回收率為93.8%～110.6%，變異系數(shù)為1.38%～8.13%；在土壤中的添加回收率為93.2%～104.0%，變異系數(shù)為1.21%～1.41%。結(jié)果表明，本方法具有較高的回收率與精確度，滿足農(nóng)藥殘留檢測要求[22]。

表1 噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)

表2 添加回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.3 方法應(yīng)用

采用本文建立的方法，播種時(shí)，花生經(jīng)18%噻蟲胺包埋顆粒劑混土穴施且僅施藥1次，收獲期檢測花生及土壤樣品中噻蟲胺殘留量，河南和山東兩地樣品中，噻蟲胺在花生葉片、花生殼、花生仁及土壤中均能檢測到，并且其殘留量由高到低的順序依次為花生葉片、花生殼、土壤、花生仁，且花生葉片中殘留量明顯高于花生樣品其他組織部位。檢測結(jié)果見表3。

表3 噻蟲胺在花生各部位及土壤中平均殘留量

噻蟲胺在河南新鄉(xiāng)地區(qū)花生葉片中平均殘留量為0.730 mg/kg，花生仁中為0.017 mg/kg，花生殼中為0.260 mg/kg，土壤中為0.031 mg/kg；山東日照地區(qū)噻蟲胺在花生葉片中平均殘留量為0.300 mg/kg，花生仁中為0.007 mg/kg，花生殼中為0.12 mg/kg，土壤中為0.010 mg/kg。中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2016）中規(guī)定，噻蟲胺每日最大允許攝入量為0.1 mg/kg。而國內(nèi)外對花生中噻蟲胺最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)尚未做明確規(guī)定。

3 結(jié)論與討論

采用超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測花生及土壤中噻蟲胺殘留，結(jié)果表明，噻蟲胺在花生及土壤中添加回收率為93.2%～110.6%，變異系數(shù)為1.21%～8.13%，定量限為0.005 mg/kg，符合農(nóng)藥殘留檢測要求。本文前處理方法簡單可行，選用試劑經(jīng)濟(jì)易得，檢測方法精確度及靈敏度高，能保證檢測結(jié)果的精確度和可靠性，可為噻蟲胺在花生中的殘留檢測提供參考依據(jù)。