長(zhǎng)鏈非編碼RNA MLK7-AS1 在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其 對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響

藍(lán)俊松，李楠，黃志良，沈西凌，劉海鷹

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 胃腸外科，廣東 廣州 510095）

結(jié)腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)全球癌癥最新統(tǒng)計(jì)報(bào)告指出，2018年全球結(jié)腸癌新發(fā)病例數(shù)超過100萬例，在惡性腫瘤發(fā)病率中排第3位， 位于肺癌、乳腺癌、前列腺癌之后。死亡例數(shù)約為55萬例，在惡性腫瘤死亡率中排第5位，僅次于肺癌、肝癌、胃癌以及乳腺癌，發(fā)病例數(shù)及死亡人數(shù)較往年均有明顯的增長(zhǎng)且發(fā)病人群出現(xiàn)了明顯的年輕化[1-3]。目前結(jié)腸癌的治療手段主要以手術(shù)切除為主再輔以術(shù)前或術(shù)后的化療。該治療方式已十分成熟，對(duì)提高患者生存率起到了關(guān)鍵性的作用，但是由于結(jié)腸癌起病隱秘，發(fā)現(xiàn)較晚，很多患者未能得到及時(shí)有效的治療，因此可供早期診斷的分子靶標(biāo)的發(fā)現(xiàn)對(duì)結(jié)腸癌的診療工作有著非常重要及積極的意義[4-6]。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一類長(zhǎng)度＞200 bp且沒有蛋白編碼功能的RNA。近年來研究[7-10]表明，lncRNA可以在染色質(zhì)、RNA及蛋白質(zhì)等多個(gè)層面發(fā)揮作用，調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移及凋亡等多種功能。目前已發(fā)現(xiàn)多種lncRNA在結(jié)腸癌中異常表達(dá)，并且介導(dǎo)調(diào)控了結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡及放化療敏感性等各個(gè)方面的功能，有望為結(jié)腸癌的診療提供新的靶點(diǎn)[11-13]。

lncRNA MLK7-AS1是新發(fā)現(xiàn)致癌基因。迄今為止，lncRNA MLK7-AS1已被發(fā)現(xiàn)在胃癌及卵巢癌組織中表達(dá)上調(diào)，參與細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等多種功能的調(diào)控，且其表達(dá)水平與患者預(yù)后負(fù)相關(guān)[14-15]。然而尚未發(fā)現(xiàn)其在結(jié)腸癌中的表達(dá)及作用的相關(guān)報(bào)道。本文旨在研究lnRNA MLK7-AS1在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖能力的影響，并初步探究其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞與主要試劑

實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞均由廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所細(xì)胞庫保存并提供；TRIzol試劑、Lipofectamine 3000購于美國Invitrogen公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（R R 0 4 7 A）及q R T-P C R 試劑盒（RR420）均購自日本Takara公司；DNA含量檢測(cè)試劑盒（細(xì)胞周期）購于北京索萊寶科技有限公司；細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）、細(xì)胞周期蛋白依賴激酶6（CDK6）、β-actin抗體以及鼠二抗均購于美國Abcam公司；RIPA蛋白裂解液購自上海碧云天公司；BCA蛋白定量試劑盒購自美國Bio-Rad公司；PVDF膜和ECL發(fā)光液購自美國Millipore公司；胰酶、RPMI1640培養(yǎng)基、胎牛血清均購于美國Gibcol公司；DMSO試劑購于美國Sigma-Aldrich公司；細(xì)胞培養(yǎng)板、移液管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶以及凍存管等一次性耗材購自潔特公司；引物由廣州天一輝遠(yuǎn)公司合成；無內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒購于美國OMEGA公司；過表達(dá)及空白質(zhì)粒由廣州復(fù)能公司合成。

1.2 臨床標(biāo)本

所用21對(duì)結(jié)腸癌組織及癌旁組織均取自廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胃腸外科冷凍組織庫，標(biāo)本離體后30 min內(nèi)即被收集置入液氮中保存，所有標(biāo)本均經(jīng)術(shù)后病理確認(rèn)為結(jié)腸癌，所有標(biāo)本收集前均已經(jīng)患者同意并簽署了知情同意書。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) 結(jié)腸癌細(xì)胞（DLD1、SW620、SW480、HCT116、HT29 與LOVO）和人結(jié)腸上皮細(xì)胞NCM460 用含10% 胎牛血清的1640 培養(yǎng)于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中，每3 天換液1 次，在細(xì)胞生長(zhǎng)到約80% 匯合度時(shí)進(jìn)行傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的結(jié)腸癌細(xì)胞接種于6 孔板（5×105/ 孔）中，待生長(zhǎng)至匯合度為70%～80% 時(shí)，將細(xì)胞分為兩組：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，轉(zhuǎn)入lncRNA MLK7-AS1 過表達(dá)質(zhì)粒為實(shí)驗(yàn)組，轉(zhuǎn)入空白對(duì)照質(zhì)粒為對(duì)照組。遵照Lipofectamine3000 說明書要求分別轉(zhuǎn)染lncRNA MLK7-AS1 過表達(dá)質(zhì)粒與空白對(duì)照質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染后24 h 后采用qRT-PCR 方法檢測(cè)lncRNA MLK7-AS1 表達(dá)以確定轉(zhuǎn)染效率。

1.3.3 總RNA 提取 取對(duì)數(shù)期細(xì)胞加入1 mL TRIzol 試 劑 充 分 消 化10 min； 加200 μL 氯 仿劇 烈 震 蕩15 s， 室 溫 靜 置10 min，4 ℃離 心 （12 000 r/min，15 min）； 取 上 清 并 按 等 體積加入異丙醇，顛倒混勻，4 ℃離心后收集沉淀，加1 mL 75% 乙醇洗滌后晾干；加DEPC 水溶解至適宜濃度后采用分光光度計(jì)測(cè)量總RNA濃 度，A260/280 在1.8～2.0 之 間 為 合 格 樣 品。按Takara 公司逆轉(zhuǎn)錄試劑盒RR036A 說明書所 述 加 入 試 劑， 使 用SureCycler8800 PCR 儀（Agilent Technologie）行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄成的cDNA，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.4 總RNA 提取與實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRTPCR） 檢 測(cè) 按Takara 公 司qRT-PCR 試 劑 盒（RR420）說明書所述加入試劑，配置反應(yīng)體系，在熒光定量PCR 儀（BioRad）上檢測(cè)，程序如下：50 ℃ 2 min。95 ℃ 2 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s（40 個(gè)循環(huán)）。根據(jù)2-ΔΔct計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。MLK7-AS1 上游序列：TTA CCA GAC ACA ACC AAC CCC，MLK7-AS1 下游序列：ATC AGT CAG GCC CAT TGG TTT；cyclin D1 上 游 序 列：AAC TAC CTG GAC CGC TTC CT，cyclin D1 下游序列：CCA CTT GAG CTT GTT CAC CA；CDK6 上游序列：TGT CTG TTC GTG ACA CTG TGC，CDK6 下游 序 列：ATG CCG CTC TCC ACC AT；GAPDH上游序列：ATT CCA TGG CAC CGT CAA GGC TGA，GAPDH 下 游 序 列：TTC TCC ATG GTG GTG AAG ACG CCA。

1.3.5 細(xì)胞增殖能力檢測(cè)（MTS） 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞種于96 孔板中，每孔1 000 個(gè)細(xì)胞，各 5 個(gè)副孔，于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。分別于1、2、3、4、5 d 加入20 μL MTS/ 孔，于培養(yǎng)箱中孵育3 h 后，在多功能酶標(biāo)儀上檢測(cè)各孔OD490。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，均一化OD490 值為縱坐標(biāo)繪制曲線。

1.3.6 平板單克隆實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)期細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后，接種于6 孔板中，每種細(xì)胞分別設(shè)置250、500、1 000 個(gè)/孔，3 個(gè)接種濃度，細(xì)胞放入37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔2 天換液1 次，8 d 后去培養(yǎng)基，利用PBS 洗3 遍，每孔加入1 mL福爾馬林液固定，放入-20 ℃冰箱靜置30 min，固定細(xì)胞，再吸除福爾馬林，每孔加入1 mL 1%結(jié)晶紫染色液，室溫下染色10 min，吸去染色液，在水中漂洗。計(jì)算克隆形成數(shù)，并繪制圖表。

1.3.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)期細(xì)胞，計(jì)數(shù)1×106個(gè)細(xì)胞。1 000 r/min 離心 5 min，PBS 洗2 次，加3 mL 預(yù)冷的70%乙醇，混勻，置4 ℃冰箱過夜。次日，取固定過夜的單細(xì)胞懸液，PBS 洗2 次，離心棄上清，在細(xì)胞沉淀中加入50 μL RNAse A，37 ℃水浴30 min，加入450 μL PI 染色液，4 ℃孵育30 min，流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。

1.3.8 Western blot 檢測(cè) 使用RIPA 裂解液裂解對(duì)數(shù)期細(xì)胞并提取總蛋白質(zhì)，BCA 法定量蛋白濃度，取總蛋白與等量的2× 上樣緩沖液混勻后 100 ℃煮沸5 min。將蛋白質(zhì)在10%SDS 聚丙烯酰胺凝膠上完全電泳，并轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上。將膜用5%脫脂牛奶封閉2 h，后將膜與一抗（cyclin D1， 1:1 000；CDK6，1:5 000；β-actin，1:5 000）在4 ℃溫育過夜，然后將膜與鼠二抗（1:1 000）室溫孵育1～2 h，ECL 發(fā)光液顯影，置于暗室發(fā)光，膠片晾干掃描。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次以上，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1 lncRNA MLK7-AS1 在結(jié)腸癌中高表達(dá)

q R T-P C R 結(jié)果顯示，在2 1 對(duì)組織標(biāo)本中，lncRNA MLK7-AS1在結(jié)腸癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁正常組織（P＜0.05）（圖1A）；lncRNA MLK7-AS1在結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT116、SW480、DLD1、HT29、SW620、LOVO中的相對(duì)表達(dá)量分別為4.00±0.62、5.02±0.17、7.47±0.71、8.71±0.28、9.48±0.34、13.93±0.74，均高于人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞系細(xì)胞NCM460（均P＜0.05）（圖1B）。

圖1 lncRNA MLK7-AS1 表達(dá)量檢測(cè) A：lncRNA MLK7-AS1 在結(jié)腸癌組織與癌旁正常組織中的表達(dá)；B：lncRNA MLK7-AS1 在正常結(jié)腸上皮細(xì)胞及不同結(jié)腸癌細(xì)胞系中的相對(duì)表達(dá)量Figure 1 Determination of the expression levels of lncRNA MLK7-AS1 A: The expressions of lncRNA MLK7-AS1 in colon cancer tissues and adjacent normal tissues; B: The relative expression levels of lncRNA MLK7-AS1 in normal colonic epithelial cells and different colon cancer cell lines

2.2 轉(zhuǎn)染效率測(cè)定

選取lncRNA MLK7-AS1表達(dá)相對(duì)較低的結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480及HCT116，將過表達(dá)質(zhì)粒及空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)入這2對(duì)細(xì)胞系后利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果顯示在SW480中，轉(zhuǎn)入空載質(zhì)粒后相對(duì)表達(dá)量為1.00±0.13，轉(zhuǎn)入過表達(dá)質(zhì)粒后lncRNA MLK7-AS1相對(duì)表達(dá)量為2.40±0.19；同時(shí)在HCT116中，轉(zhuǎn)入空載質(zhì)粒后相對(duì)表達(dá)量為1.00±0.19，轉(zhuǎn)入過表達(dá)質(zhì)粒后lncRNA MLK7-AS1相對(duì)表達(dá)量為3.37±0.28。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）（圖2）。

圖2 轉(zhuǎn)染效率測(cè)定結(jié)果Figure 2 Results of transfection efficiency

2.3 過表達(dá)lncRNA MLK7-AS1 對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力的影響

轉(zhuǎn)染24 h后，取對(duì)數(shù)期細(xì)胞鋪板行MTS實(shí)驗(yàn)以及平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)lncRNA MLK7-AS1對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞活力及克隆形成能力的影響。根據(jù)MTS結(jié)果顯示，過表達(dá)lncRNA MLK7-AS1后，與各自的對(duì)照組比較，兩種細(xì)胞的OD490值在48 h后個(gè)時(shí)間點(diǎn)均明顯升高（均P＜0.05）（圖3）。平板克隆結(jié)果顯示，過表達(dá)lncRNA MLK7-AS1后，兩種結(jié)腸癌細(xì)胞的平板克隆形成數(shù)在250、500、1 000這3個(gè)鋪孔密度下較對(duì)照組均有不同程度的提高（均P＜0.05）（圖4）。

圖3 MTS 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力Figure 3 The cell viabilities detected by MTS assay

圖4 平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)克隆形成能力Figure 4 Colony-forming capacities determined by plate colony experiment

2.4 過表達(dá)lncRNA MLK7-AS1 對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的細(xì)胞周期影響

流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)過表達(dá)lncRNA MLK7-AS1后，G1期細(xì)胞比例明顯減少，S期細(xì)胞比例明顯增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)SW480過表達(dá)lncRNA M L K 7-A S 1 后，G1由（6 5.7 1±1.1 8）%減少至（45.98±0.92）%，S期由（28.06±1.78）%增加至（43.90±0.85）%。HCT116經(jīng)過表達(dá)lncRNA MLK7-AS1后，G1期由（61.03±1.98）%減少至（39.99±0.98）%，S期由（36.21±1.32）%增加至（48.88+±0.57）%，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＜0.05）（圖5）。

圖5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期Figure 5 Cell cycles analyzed by flow cytometry

2.5 過表達(dá)lncRNA MLK7-AS1 對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的作用

Western blot實(shí)驗(yàn)顯示，在SW480及HCT116這兩對(duì)細(xì)胞中，實(shí)驗(yàn)組cyclin D1及CDK6蛋白表達(dá)量均高于對(duì)照組；qRT-PCR檢測(cè)也顯示，兩種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組的cyclin D1及CDK6較各自對(duì)照組相比表達(dá)量均明顯升高（均P＜0.05）（圖6）。

圖6 周期相關(guān)蛋白檢測(cè) A：Western blot 檢測(cè)結(jié)果；B：qRT-PCR 檢測(cè)結(jié)果Figure 6 Measurement of the cell cycle-related proteins A: Results of Western blot analysis; B: Results of qRT-PCR

3 討 論

非編碼R N A 的發(fā)現(xiàn)是一個(gè)非常重大的生物學(xué)突破，其重新定義了真核基因表達(dá)調(diào)控的多樣性。其中l(wèi)ncRNA是非編碼RNA中的一個(gè)重要分類，其特指堿基數(shù)＞200 bp的非編碼RNA。目前有大量研究報(bào)道提示lncRNA對(duì)人體內(nèi)各種生理及病理過程有著非常復(fù)雜的調(diào)控作用，多種疾病的發(fā)生發(fā)展與lncRNA表達(dá)及功能的異常密切相關(guān)，結(jié)腸癌就是其中之一[16-18]。

3.1 lncRNA 在結(jié)腸癌中的研究現(xiàn)狀

據(jù)研究表明單一的l n c R N A 可以對(duì)結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過程中的包括增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及化療耐藥在內(nèi)等多種功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，同時(shí)結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過程中的單一功能也可以受到多種lncRNA的調(diào)控。例如Yang等[19]發(fā)現(xiàn)lncRNA SNHG1與結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲及遷移均密切相關(guān)；Li等[20]發(fā)現(xiàn)lncRNA-ZDHHC8P1可以通過與miR-34a結(jié)合促進(jìn)結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移；Huang等[21]發(fā)現(xiàn)lncRNA PCAT6可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡；Jiang等[22]發(fā)現(xiàn)lncRNA GIHCG 與結(jié)腸癌細(xì)胞化學(xué)耐藥密切相關(guān)。lncRNA的表達(dá)及功能的異常是結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展病理機(jī)制中的重要組成部分，發(fā)現(xiàn)更多的癌癥相關(guān)lncRNA并且深入挖掘這些lncRNA的功能對(duì)完善結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制以及指導(dǎo)后續(xù)的診療均具有十分積極的意義[23-25]。lncRNA MLK7-AS1是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)lncRNA，目前僅在胃癌及卵巢癌中有相關(guān)報(bào)道，其在結(jié)腸癌中發(fā)揮怎樣的作用以及其具體的調(diào)控機(jī)制仍不清楚，需要進(jìn)一步研究。

3.2 lncRNA MLK7-AS1 對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖能力的影響

細(xì)胞增殖能力的改變是腫瘤細(xì)胞的重要標(biāo)志之一，而細(xì)胞增殖的過程即表現(xiàn)為細(xì)胞在不同細(xì)胞周期的變遷。目前研究表明細(xì)胞周期調(diào)控分子主要包括細(xì)胞周期蛋白（cyclin）、依賴細(xì)胞周期蛋白激酶（cyclin-dependent kinases，CDK）和依賴細(xì)胞周期蛋白激酶抑制劑（cyclin-dependent kinase inhibitors，CKI），其中CDK需要與cyclin結(jié)合才能被激活發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的作用，同時(shí)又由于各個(gè)時(shí)相的cyclin的種類、表達(dá)量及結(jié)合的CDK的種類不同，其在細(xì)胞周期各個(gè)時(shí)相發(fā)揮的作用也不相同，這樣就實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞周期各個(gè)時(shí)相精準(zhǔn)調(diào)控。而CKI可以抑制CDK或cyclin/CDK復(fù)合物的活性，這樣cyclin、CDK與CKI這三者就共同構(gòu)成了細(xì)胞周期復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[26]。為研究lnRNA MLK7-AS1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖能力的影響及其作用機(jī)制，本研究首先通過qRT-PCR實(shí)驗(yàn)證實(shí)了其在結(jié)腸癌組織高表達(dá)，然后利用MTS以及平板克隆實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)過表達(dá)lncRNA MLK7-AS1可以提高結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖和克隆形成能力，同時(shí)利用流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)過表達(dá)lncRNA MLK7-A S 1 可以促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞由G1期進(jìn)入S 期，最后通過Western blot及qRT-PCR實(shí)驗(yàn)提示，過表達(dá)lncRNA MLK7-AS1后cyclin D1及CDK6表達(dá)上升。其中cyclin D1在G1早期表達(dá)，是細(xì)胞周期啟動(dòng)因子，它也是生長(zhǎng)因子感應(yīng)器[27-28]。而CDK6可以與cyclin D1組裝成有激酶活性的復(fù)合物，cyclin D1/CDK6復(fù)合物能使Rb磷酸化，使轉(zhuǎn)錄因子E2F從磷酸化的Rb蛋白上脫落下來，同時(shí)游離的E2F可促使與DNA合成有關(guān)的一系列基因表達(dá)，從而促使DNA合成，加速細(xì)胞從G1到S期轉(zhuǎn)換，推動(dòng)細(xì)胞周期的進(jìn)展[29-31]。cyclin D1與CDK6表達(dá)的升高解釋流式細(xì)胞周期的結(jié)果，同時(shí)也提示了lncRNA MLK7-AS1是通過促進(jìn)cyclin D1與CDK6表達(dá)從而促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)lncRNA MLK7-AS1可以上調(diào)cyclin D1及CDK6表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞由G1進(jìn)入S期，提高結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和克隆形成能力，發(fā)揮促癌基因功能。但是lncRNA MLK7-AS1對(duì)周期相關(guān)蛋白的具體調(diào)控機(jī)制研究仍不夠明了，深入挖掘lncRNA MLK7-AS1對(duì)周期相關(guān)蛋白具體調(diào)控機(jī)制將是下一步研究的重點(diǎn)。同時(shí)lncRNA MLK7-AS1在正常人組織及結(jié)直腸癌患者組織中的表達(dá)是否有差異，且這種差異是否與患者的臨床表現(xiàn)及預(yù)后差異相關(guān)同樣也是今后的研究重點(diǎn)。這提示lncRNA MLK7-AS1可能是結(jié)腸癌診療的潛在靶標(biāo)。