自體血清與小牛血去蛋白眼用凝膠治療兔角膜堿燒傷的比較

王 健，解正高，陳 放，朱 俊，杜 偉

目的：通過建立兔角膜堿燒傷模型，比較自體血清與小牛血去蛋白眼用凝膠在兔角膜堿燒傷治療中的效果。

方法：制作兔右眼角膜堿燒傷模型30眼，造模后堿燒傷分度全部為Ⅲ度燒傷，將其隨機(jī)分為三組，分別采用生理鹽水、小牛血去蛋白眼用凝膠及自體血清滴眼液4次/d，各組滴阿托品眼用凝膠1次/晚，氧氟沙星眼用凝膠1次/晚，連續(xù)2wk。治療7、14d后觀察角膜新生血管形態(tài)并計算面積；第14d處死各組實驗動物后，摘除雙眼角膜，其中左眼為正常對照，右眼為實驗眼，分別進(jìn)行常規(guī)組織病理學(xué)檢查，角膜組織勻漿內(nèi)CD45、IL-10、IFN-γ及VEGF濃度測定。

結(jié)果：治療7、14d后小牛血去蛋白眼用凝膠組角膜新生血管面積(29.48±2.27、34.19±2.67mm2)與自體血清組(34.19±2.67、33.89±2.74mm2)無差異(P>0.05)。治療14d角膜組織勻漿測定：小牛血去蛋白眼用凝膠組(0.56±0.04ng/mL)和自體血清組(0.54±0.05ng/mL)CD45含量均小于生理鹽水組(1.27±0.07ng/mL)(P<0.05)； 自體血清組(452.49±11.40pg/mL)和小牛血去蛋白眼用凝膠組(332.49±13.67pg/mL)IL-10含量均大于生理鹽水組(111.05±6.95pg/mL)(P<0.05)；小牛血去蛋白眼用凝膠組(23.20±2.89pg/mL)和自體血清組(22.61±2.72pg/mL)IFN-γ含量均小于生理鹽水組(41.77±4.26pg/mL)(P<0.05)；小牛血去蛋白眼用凝膠組(151.14±18.21pg/mL)和自體血清組濃度(149.11±14.75pg/mL)VEGF含量均小于生理鹽水組(391.35±28.59pg/mL)(P<0.05)。

結(jié)論：兔角膜堿燒傷后抑制炎癥因子CD45、IFN-γ及VEGF釋放及抑制角膜新生血管形成方面，自體血清與小牛血去蛋白眼用凝膠作用相當(dāng)；在促進(jìn)抗炎因子IL-10釋放、抑制炎癥細(xì)胞浸潤方面，自體血清作用強(qiáng)，小牛血去蛋白眼用凝膠次之。

0 引言

眼化學(xué)傷的發(fā)生約占眼外傷的10%左右，占整個工業(yè)性危害的5%～20%[1]。在各種化學(xué)傷中酸燒傷及堿燒傷占據(jù)主要地位，其中堿燒傷又因其病理機(jī)制復(fù)雜，并發(fā)癥較多，預(yù)后較差，病程較長成為一類較為棘手的眼科疾病。角膜堿燒傷發(fā)生后，嚴(yán)重者留有永久視力損害，更甚者可以發(fā)生角膜潰瘍、角膜穿孔、角膜白斑、干眼、瞼球粘連、并發(fā)性白內(nèi)障、繼發(fā)青光眼、全眼球炎及眼球萎縮等[2],是臨床常見的致盲原因之一。

堿性物質(zhì)具有強(qiáng)烈的刺激性和腐蝕性，其對角膜組織的損傷機(jī)制為：(1)堿性物質(zhì)與組織接觸后形成可溶于水的堿-變性蛋白復(fù)合物，皂化脂肪組織，從而發(fā)生組織液化性壞死，使堿性物質(zhì)迅速向四周及深部組織擴(kuò)散，腐蝕眼內(nèi)其他組織，嚴(yán)重者可以損傷眼底等深部組織[3-4]。(2)堿燒傷后發(fā)生的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致大量多核白細(xì)胞向創(chuàng)口移行浸潤，而后釋放大量膠原酶及蛋白酶，進(jìn)而使得膠原組織溶解，導(dǎo)致角膜潰瘍，嚴(yán)重者形成角膜穿孔[5]。(3)中性粒細(xì)胞的組織內(nèi)的浸潤使得自由基產(chǎn)生增加，導(dǎo)致細(xì)胞膜的通透性增強(qiáng)，從而使得組織損害進(jìn)一步加重。此三種機(jī)制相互聯(lián)系，相互促進(jìn)，從而導(dǎo)致角膜損壞的惡性循環(huán)[6-7]，輕者形成角膜云翳，嚴(yán)重者發(fā)生角膜白斑、無菌性角膜潰瘍、穿孔、瞼球粘連及繼發(fā)青光眼等，留有永久性視力損害，嚴(yán)重者甚至無法保全眼球，導(dǎo)致失明。

目前角膜堿燒傷的藥物治療主要有[2]：局部使用抗生素、散瞳、降眼壓、肝素、膠原酶抑制劑、維生素C，枸櫞酸鈉、免疫抑制劑、表皮生長因子、纖維連接蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、轉(zhuǎn)化因子-β、皮質(zhì)類固醇激素、自體血清等。自體血清自1984年，F(xiàn)ox等[8]首先報道將自體血清用于治療眼表疾病，其后廣泛應(yīng)用。小牛血去蛋白眼用凝膠其主要成分為20%小牛血去蛋白提取物，基質(zhì)為卡波姆，含有多種游離氨基酸，低分子肽和寡糖，可以改善線粒體的呼吸功能[9]，增強(qiáng)細(xì)胞對葡萄糖及氧的利用，改善微循環(huán)及組織營養(yǎng)，促進(jìn)ATP合成。小牛血去蛋白提取物眼用凝膠還能阻止堿燒傷組織的繼發(fā)損害，防止損傷范圍擴(kuò)大與加深，促進(jìn)角膜損傷的修復(fù)[10]。此外，其基質(zhì)主要為卡波姆，有黏附性，能在局部形成保護(hù)膜，對受損角膜起保護(hù)作用，同時可以使得藥效更持久[11]。二者在各類原因所致的角膜上皮缺損的治療中應(yīng)用廣泛，已有大量臨床文獻(xiàn)報道，但二者在角膜堿燒傷中的療效比較鮮有報道，尤其是在動物實驗方面。

本實驗以兔角膜堿燒傷為實驗?zāi)Ｐ?，分別觀察局部使用自體血清、小牛血清去蛋白眼用凝膠及生理鹽水等滴眼后兔角膜堿燒傷的角膜組織病理學(xué)改變、角膜新生血管情況及炎癥因子濃度，分析不同組別在角膜堿燒傷治療過程中療效的差異。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1 實驗動物 健康大耳白兔30只(由揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供)，體質(zhì)量2.0～2.5kg，雄雌不限，眼部檢查無異常。實驗方案獲院倫理委員會審批通過。30只兔角膜堿燒傷造模并進(jìn)行燒傷分度全部為Ⅲ度后通過隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，生理鹽水組，小牛血去蛋白眼用凝膠組、自體血清組。每組各10只，每組各只兔分別編號(組號-個號)。

1.1.2主要試劑及儀器 小牛血去蛋白眼用凝膠、阿托品凝膠、氧氟沙星眼膏(沈陽興齊制藥有限公司)，兔自體血清滴眼液(自制)，兔白細(xì)胞共同抗原(CD45)、兔γ干擾素(IFN-γ)、兔白細(xì)胞介素-10(IL-10)、兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(上海瑤韻生物科技股份有限公司)。眼前節(jié)照相機(jī)(科林公司)，Image-Pro PLUS 6.0圖像處理軟件(Media Cybernetics 公司)，掃描電鏡(美國FEI公司,XL-30)，酶標(biāo)儀(瑞士TETCAN公司，TECAN SUNRISE)。

1.2方法

1.2.1建立兔角膜堿燒傷模型 將眼部檢查無異常的大耳白兔30只，每只右眼用0.5%鹽酸丙美卡因滴眼液表面麻醉3次，每次間隔2min。開瞼器開瞼，無菌生理鹽水沖洗結(jié)膜囊，以滅菌棉簽擦干結(jié)膜囊，將直徑為8mm的滅菌濾紙片浸入1.0mol/L的NaOH溶液中飽和后吸去多余堿液，后將濾紙片置于兔右眼中央角膜表面1min后取出，立即用滅菌生理鹽水連續(xù)沖洗5min，形成邊界清晰的圓形白色燒傷區(qū)域，制作成兔角膜堿燒傷動物模型。依據(jù)Hughes分度法為中度堿燒傷[12]。依據(jù)我國1982年眼外傷與職業(yè)性眼病協(xié)作小組通過的分度標(biāo)準(zhǔn)[1]為Ⅲ度燒傷。

1.2.2制作兔自體血清滴眼液 于角膜堿燒傷造模分組后將自體血清組各只實驗兔，用離心管分別采集各兔兩耳耳緣靜脈血約10mL，置清潔無菌離心試管中，室溫下靜置2h后以3000r/min離心10min，取上清血清液分別注入有各只實驗兔對應(yīng)標(biāo)號的2只無菌滴眼液空瓶中，置于4℃冰箱內(nèi)避光保存?zhèn)溆谩?wk后棄去先使用的第1支殘液，使用第2支自體血清。

1.2.3給藥方式 各組實驗兔右眼造模后分別以無菌生理鹽水滴眼液、小牛血去蛋白眼用凝膠、自體血清滴眼液滴右眼，每次2滴，每次停留30s以上，4次/d；同時所有實驗兔右眼每晚使用阿托品凝膠及氧氟沙星眼膏涂眼1次，連續(xù)14d。

1.2.4測定角膜新生血管面積 將所有實驗白兔按組及編號分別于造模后7、14d裂隙燈下觀察角膜4個象限最長一支新生血管長度、累及角膜緣鐘點數(shù)等情況，按文獻(xiàn)公式進(jìn)行計算各象限新生血管面積(CRNV)。公式：A=C/12×3.1416[r2-(r-l)2]。C為CRNV累及角膜圓周鐘點數(shù)，l為所取血管長度，r為兔角膜半徑6.75mm，總面積等于4個象限之和。

1.2.5測定角膜組織勻漿CD45、IL-10、IFN-γ及VEGF含量 第14d用空氣栓塞法處死各組實驗動物，摘取雙眼，每組左眼作為健眼對照。按編號分別取部分角膜組織，用預(yù)冷的0.01mol/L，pH7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)沖凈殘留其上的血液，稱量后將組織剪碎。將剪碎的角膜組織與PBS按 m(角膜組織)∶V(PBS)=1∶9 的比例加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。對勻漿液進(jìn)行超聲破碎。將勻漿液于5000×g離心10min，取上清使用IL-10、CD45、IFN-γ及VEGF的ELISA試劑盒按步驟進(jìn)行檢測。

1.2.6角膜組織病理學(xué)檢查 將摘除的各組及隨機(jī)摘取的健眼部分角膜，常規(guī)甲醛固定，石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅染色，100倍顯微鏡下進(jìn)行組織學(xué)觀察。

2 結(jié)果

2.1治療7d和14d后三組兔角膜新生血管面積比較 治療7、14d后三組兔角膜新生血管面積比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。治療7、14d后小牛血去蛋白眼用凝膠組、自體血清組新生血管面積均小于生理鹽水組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；小牛血去蛋白眼用凝膠組與自體血清組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1、2。

2.2治療14d后三組兔角膜組織勻漿CD45、IL-10、IFN-γ及VEGF含量比較 治療14d后三組兔角膜組織勻漿CD45、IL-10、IFN-γ及VEGF含量比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。CD45含量小牛血去蛋白眼用凝膠組、自體血清組小于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；IL-10含量自體血清組大于小牛血去蛋白眼用凝膠組和生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；IFN-γ含量小牛血去蛋白眼用凝膠組、自體血清組小于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；VEGF含量小牛血去蛋白眼用凝膠組、自體血清組小于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，表3、4。

2.3治療14d后角膜組織病理學(xué)檢查 正常角膜組：角膜上皮完整，基質(zhì)纖維排列規(guī)則，無水腫及充血，無炎性細(xì)胞浸潤；生理鹽水組：角膜上皮斷裂，基質(zhì)纖維排列不規(guī)則，基質(zhì)纖維水腫及大量炎性細(xì)胞浸潤；小牛血去蛋白眼用凝膠組：角膜上皮完整，基質(zhì)纖維排列基本規(guī)則，基質(zhì)纖維輕度水腫及中等量炎性細(xì)胞浸潤；自體血清組：角膜上皮完整，基質(zhì)纖維排列基本規(guī)則，基質(zhì)纖維輕度水腫及少量炎性細(xì)胞浸潤，見圖1。

3 討論

角膜化學(xué)燒傷嚴(yán)重危害眼組織，臨床上除早期的急診相關(guān)處理外，多采取抗炎、抑制免疫反應(yīng)[13]、角膜移植術(shù)、基因治療等手段，治療效果各有優(yōu)缺點[14]，而角膜組織修復(fù)也是疾病藥物治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，維持及恢復(fù)角膜表層及內(nèi)皮層的正常細(xì)胞代謝是角膜損傷愈合的先決條件。化學(xué)致傷物的種類、化學(xué)性質(zhì)、物理性質(zhì)、穿透組織的能力、濃度、接觸時間和面積，傷后是否接受合理的急救處理等因素影響化學(xué)性眼表燒傷的程度和預(yù)后。角膜堿燒傷比酸燒傷嚴(yán)重，主要因為其病理機(jī)制復(fù)雜，并發(fā)癥多，預(yù)后最差[15]，不僅是眼科的急癥重癥，也是眼科的疑難病癥，是眼部致殘致盲的常見原因之一。

分組治療7d治療14d生理鹽水組46.18±3.6949.24±3.83小牛血去蛋白眼用凝膠組29.48±2.2734.19±2.67自體血清組34.19±2.6733.89±2.74 F56.63141.519P0.0010.001

小牛血清去蛋白眼用凝膠是小牛血清去蛋白提取物的眼用制劑，主要含有無機(jī)離子(K+、Cl-、Na+、Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+等)及氨基酸、小分子肽、核苷酸、低聚糖、脂類等小分子有機(jī)物，其中的小分子活性物質(zhì)能改善組織細(xì)胞對氧和葡萄糖的攝取及利用，還能促進(jìn)成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的游走和增生，因而能夠促進(jìn)創(chuàng)傷愈合[16-17]。有研究表明在角膜堿燒傷的藥物治療中，其能阻止角膜繼發(fā)性損害，從而防止組織損傷范圍擴(kuò)大及加深，促進(jìn)損傷角膜組織的修復(fù)[10]。同時它不含蛋白，較少引起過敏。此外，其基質(zhì)主要為卡波姆，有黏附性，能在局部形成保護(hù)膜，對受損角膜起保護(hù)作用，同時可以使得藥效更持久[11]。

自體血清即從患者自己的血液中所提取的血清，去除了血液中的細(xì)胞成分和凝血因子，含有氨基酸、維生素、無機(jī)鹽、脂質(zhì)，蛋白質(zhì)以及大量的活性因子。包含了幾乎所有生理淚液的成分，與淚液的生物力學(xué)和生物化學(xué)特性也較為相似[18]，pH值和滲透壓也相近，其中纖維連接蛋白，維生素A以及表皮生長因子含量甚至高于正常淚液[18]。1984年，F(xiàn)ox等[8]首先報道將自體血清用于治療眼表疾病。自體血清為自身來源，無過敏反應(yīng)，機(jī)體耐受性較好，患者使用需要采集自身血液。臨床使用過程中需要注意只能采集堿燒傷后1wk內(nèi)的血清方可使用，因為1wk后機(jī)體產(chǎn)生自身抗體，反而不利于組織修復(fù)。堿燒傷后角膜中蛋白變性而成為抗原，擴(kuò)散進(jìn)入角膜和結(jié)膜組織，由于該區(qū)域具有“局部淋巴結(jié)”作用而產(chǎn)生免疫應(yīng)答，同時抗原通過角結(jié)膜血管進(jìn)入血液循環(huán)或淋巴循環(huán)，進(jìn)而刺激機(jī)體免疫器官產(chǎn)生相應(yīng)抗體[2]。

實驗研究表明：(1)角膜新生血管面積形成方面：正常角膜內(nèi)無血管是維持角膜組織透明及免疫赦免的必要條件，缺氧、炎癥、感染及外傷等均可誘發(fā)角膜新生血管。角膜堿燒傷易誘導(dǎo)新生血管形成[19-20]。角膜堿燒傷后新生血管為形成因子與抑制因子平衡失調(diào)的結(jié)果，角膜內(nèi)調(diào)節(jié)因子在角膜新生血管形成中具有重要作用[21],新生血管雖可促進(jìn)組織修復(fù)，但會影響角膜透明度，最終影響視功能[22]。VEGF是目前確定的一種最直接的新生血管形成因子，堿燒傷后角膜組織內(nèi)大量VEGF表達(dá)使血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增生和遷移，毛細(xì)血管基底膜發(fā)生降解，形成新生血管腔。治療7、14d后小牛血去蛋白眼用凝膠組、自體血清組新生血管面積小于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。小牛血去蛋白眼用凝膠組組、自體血清組角膜新生血管面積相當(dāng)，顯著小于生理鹽水組，主要是因為二者都含有來源于血液中的大量有效的活性成分，能夠抑制角膜炎癥及減少新生血管形成。(2)角膜組織勻漿CD45、IL-10、IFN-γ及VEGF濃度：治療14d角膜勻漿測定：CD45濃度小牛血去蛋白眼用凝膠組組、自體血清組小于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；IL-10濃度自體血清組大于小牛血去蛋白眼用凝膠組大于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；IFN-γ濃度小牛血去蛋白眼用凝膠組、自體血清組小于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；VEGF濃度小牛血去蛋白眼用凝膠組、自體血清組小于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。角膜堿燒傷后炎癥反應(yīng)在角膜組織損傷中起著重要的作用，其中各種炎癥因子又在這一過程中發(fā)揮重要的作用。CD45是位于白細(xì)胞表面的白細(xì)胞共同抗原(LCA)，高水平表達(dá)在除紅細(xì)胞和血小板之外的多有造血細(xì)胞上。在B細(xì)胞和T細(xì)胞的不同發(fā)育階段，CD45參與多種免疫功能[23]。IFN-γ具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤特性，同時還能促成自身免疫。堿燒傷后兩組CD45及IFN-γ濃度小于生理鹽水組，表明自體血清與小牛血去蛋白眼用凝膠組在炎癥因子形成釋放過程中有一定抑制作用。IL-10是一種多細(xì)胞源、多功能的細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長與分化，參與炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)，是目前公認(rèn)的炎癥與免疫抑制因子，能夠抑制巨噬細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)。Sotozono等[24]研究發(fā)現(xiàn)，角膜堿燒傷后IL-1,IL-6,IL-10,TNF-α的mRNA表達(dá)增高。IL-10濃度自體血清組最高，小牛血去蛋白眼用凝膠組次之，表明自體血清在抑制炎癥過程中能夠促進(jìn)淋巴細(xì)胞釋放抑制炎癥的因子，其效果優(yōu)于小牛血去蛋白眼用凝膠組。VEGF是一種很強(qiáng)的內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，可增加血管的通透性，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖[25]，是目前確定的一種最直接的新生血管形成因子,其過度表達(dá)和新生血管形成密切相關(guān)[26]。新生血管一方面可以促進(jìn)角膜修復(fù)，但也可以影響角膜透明度。在各組中自體血清組與小牛血去蛋白眼用凝膠組VEGF濃度較低，這與二者角膜新生血管面積有對應(yīng)關(guān)系。有報道提示抑制VEGF的表達(dá)可以抑制角膜新生血管形成[27-28]。(3)角膜組織病理學(xué)方面：治療14d角膜常規(guī)病理檢查：正常角膜組，角膜上皮完整，基質(zhì)纖維排列規(guī)則，無水腫及充血，無炎性細(xì)胞浸潤；堿燒傷后角膜上皮斷裂，基質(zhì)纖維排列紊亂，基質(zhì)纖維水腫及炎性細(xì)胞浸潤。治療14d后自體血清組與小牛血去蛋白眼用凝膠組二者比較，上皮基本修復(fù)，基質(zhì)纖維排列較其規(guī)則，炎癥細(xì)胞浸潤較少，炎癥細(xì)胞較少可使得自由基產(chǎn)生減少，減少膠原溶解，從而減輕組織炎癥反應(yīng)。

圖1 各組角膜組織病理學(xué)檢查圖片(HE×100) A:正常角膜組;B:生理鹽水組;C:小牛血去蛋白眼用凝膠組;D:自體血清組。

表2 治療7d和14d后三組兔角膜新生血管面積組間兩兩比較統(tǒng)計值

組間兩兩比較治療7dtP治療14dtP生理鹽水組vs小牛血去蛋白眼用凝膠組16.70330.00115.2130.001生理鹽水組vs自體血清組17.18830.00115.3780.001小牛血去蛋白眼用凝膠組vs自體血清組0.4850.9620.1650.996

分組CD45(ng/mL)IL-10(pg/mL)IFN-γ(pg/mL)VEGF(pg/mL)生理鹽水組1.27±0.07111.05±6.9541.77±4.26391.35±28.59小牛血去蛋白眼用凝膠組0.56±0.04332.49±13.6723.20±2.89151.14±18.21自體血清組0.54±0.05452.49±11.4022.61±2.72149.11±14.75 F402.0941733.607101.638219.863P0.0010.0010.0010.001

表4 治療14d后三組兔角膜組織勻漿CD45、IL-10、IFN-γ及VEGF含量兩兩比較統(tǒng)計值

組間兩兩比較CD45tPIL-10tPIFN-γtPVEGFtP生理鹽水組vs小牛血去蛋白眼用凝膠組0.71<0.001221.43<0.00118.56<0.001240.21<0.001生理鹽水組vs自體血清組0.73<0.001341.44<0.00119.161<0.001242.24<0.001小牛血去蛋白眼用凝膠組vs自體血清組0.010.576120.00<0.0010.590.7532.030.997

根據(jù)文獻(xiàn)報道使用自體血清時應(yīng)注意時機(jī)，應(yīng)使用傷后1wk內(nèi)的血清[2]。劉春明[29]實驗證明堿燒傷7d后自體血中可以檢測出抗體，5～6wk達(dá)高峰，隨后逐漸下降。在抑制炎癥因子釋放、角膜新生血管形成、抑制炎癥細(xì)胞浸潤方面，自體血清與小牛血去蛋白眼用凝膠作用相當(dāng)。因此，在堿燒傷治療的早期，如果能夠采集自體血清用于治療效果較為理想，其富含多種營養(yǎng)物質(zhì)，在角膜上皮及基質(zhì)修復(fù)方面有良好效果，不僅能有效降低淚液中炎癥因子濃度[30]，同時還能降低角膜組織中炎癥因子濃度。自體血清采集時注意無菌，以減少污染可能，根據(jù)Tsubota等[31]研究在4℃避光保存1mo及-20℃保存3mo時其主要有效成分(EGF，維生素A，TGF-β)濃度無顯著改變。關(guān)于自體血清不同濃度的對比研究較少，有報道高濃度可能效果更好[32]。如果沒有條件使用或傷后已逾1wk則優(yōu)先考慮使用小牛血去蛋白眼用凝膠。本研究著重觀察了在角膜堿燒傷后早期自體血清與小牛血去蛋白眼用凝膠二者主要區(qū)別，未能對中晚期療效進(jìn)行全面比較，有待進(jìn)一步研究。