喹諾酮類藥物印跡仿生抗體的研制及應(yīng)用進(jìn)展

杜曉芳，李兆周，陳秀金，王耀，高紅麗，李道敏，任國(guó)艷，呂璞

（河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，食品加工與安全國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心/河南省食品原料工程技術(shù)研究中心，河南洛陽(yáng)471000）

喹諾酮類藥物是一類重要的人工合成抗菌藥物，具有抗菌譜廣、活性強(qiáng)、組織穿透力強(qiáng)、價(jià)格低廉和交叉耐藥性低等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于抗感染治療中[1-3]。過(guò)去的幾十年，喹諾酮類藥物在畜禽及水產(chǎn)品養(yǎng)殖中的不合理使用，導(dǎo)致其在動(dòng)物性食品及環(huán)境中的殘留量超標(biāo)，嚴(yán)重威脅人類健康，常見的不良反應(yīng)包括骨髓發(fā)育不全、過(guò)敏反應(yīng)和腸道微生態(tài)的改變等[4-9]，該類藥物的殘留檢測(cè)已成為亟待解決的問(wèn)題之一。目前常見的喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)方法有微生物法[10]、免疫分析法[11-13]、色譜法[14]、電化學(xué)分析法[15-16]、光譜法[17]和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[18-19]等。但由于樣品基質(zhì)復(fù)雜多樣，常規(guī)單一方法對(duì)于該類藥物的檢測(cè)存在一定的局限性，如微生物法難以定量；免疫分析法易出現(xiàn)假陽(yáng)性且不穩(wěn)定；高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)成本昂貴等。因此，建立一種準(zhǔn)確、快速、靈敏且高效的方法用于樣品中喹諾酮類藥物殘留的檢測(cè)迫在眉睫。

分子印跡技術(shù)是一種具有特定選擇性和親和能力的新興聚合技術(shù)。通過(guò)分子印跡技術(shù)制備的具有類似抗體或酶專一性的仿生識(shí)別材料稱為分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymer，MIPs），也稱為印跡仿生抗體[20]。分子印跡仿生抗體因具有結(jié)構(gòu)預(yù)定性、實(shí)用性、穩(wěn)定性好及制備簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，能特異性識(shí)別靶物質(zhì)，對(duì)極端環(huán)境具有很強(qiáng)的耐受能力，可代替生物源識(shí)別元件用于復(fù)雜基質(zhì)中目標(biāo)化合物的定性和定量分析[21]。目前，該仿生識(shí)別材料已廣泛應(yīng)用于色譜、固相萃?。╯olid phase extraction，SPE）[22-23]、模 擬 酶[24-25]、仿 生 傳 感器[26-27]、膜分離[28-29]和臨床藥物分析等領(lǐng)域，同時(shí)也在食品、環(huán)境和生物樣品的分離、純化和富集分析中展示出廣闊的應(yīng)用前景。

仿生免疫分析是利用分子印跡仿生抗體的特異性識(shí)別能力而建立的一種親和分析方法，是近幾年研究的熱點(diǎn)之一，如Chen 等[30]報(bào)道了一種以分子印跡仿生抗體作為抗體替代物的仿生酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法，其檢測(cè)范圍為5～1000μg/mL，加標(biāo)牛血清樣品回收率達(dá)89.00%～102.30%；Yao 等[31]報(bào)道了一種新型仿生納米酶用于檢測(cè)過(guò)氧化氫，具有10μmol/L～4mmol/L 的寬線性范圍，檢測(cè)限達(dá)5μmol/L。本文主要介紹喹諾酮類藥物印跡仿生抗體的制備方法，總結(jié)其在食品與環(huán)境檢測(cè)中的應(yīng)用；結(jié)合分子印跡技術(shù)的最新研究進(jìn)展，討論了該類藥物仿生抗體在制備及識(shí)別過(guò)程中面臨的問(wèn)題，提出了可能的解決途徑與方案，為新型印跡仿生抗體的研制及應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)途徑。

1 喹諾酮類藥物印跡仿生抗體的制備方法

目前喹諾酮類藥物印跡仿生抗體的制備方法主要有本體聚合法、分散聚合法、懸浮聚合法、原位聚合法和表面分子印跡法等。不同制備方法所得印跡仿生抗體的性能參數(shù)比較見表1。

由表1可看出，制備出的喹諾酮類藥物印跡仿生抗體的形態(tài)主要有塊狀、球狀和薄膜等幾種，不同制備方法的印跡效率不同。表中本體聚合法的印跡因子較高，但其檢測(cè)回收率卻不如其他制備方法，可能是合成印跡仿生抗體時(shí)的研磨過(guò)程破壞了部分識(shí)別位點(diǎn)的空間排列；模板分子的包埋現(xiàn)象使模板分子洗脫不徹底，在吸附過(guò)程中仍然占據(jù)部分孔穴，致使其吸附選擇性降低。因此，如何完善和創(chuàng)新現(xiàn)有制備技術(shù)來(lái)提高印跡效率和檢測(cè)回收率是分子印跡領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題。下面就每種制備方法的特點(diǎn)進(jìn)行詳細(xì)介紹。

1.1 本體聚合法

本體聚合法是最傳統(tǒng)和常用的制備方法，通常是在熱引發(fā)或紫外光照射的條件下，合成高度交聯(lián)的塊狀MIPs。孫慧等[32]以氧氟沙星（ofloxacin，OFL）作為模板分子，MAA 為功能單體，PETRA為交聯(lián)劑和2, 2- 偶氮二異丁腈 （2, 2-azobisisobutyronitrile，AIBN）為引發(fā)劑，在紫外光照射條件下合成MIPs，而且該MIPs 能夠?qū)Ｒ恍杂行?識(shí) 別OFL。 Benito-Pe?a 等[33]以 恩 諾 沙 星（enrofloxacin，ENR）為模板，通過(guò)熱引發(fā)制備了一種新型水相容性MIPs，用于在水中選擇性提取氟喹諾酮類藥物（fluoroquinolone drugs，F(xiàn)Qs）。但傳統(tǒng)的本體聚合法需要經(jīng)過(guò)研磨篩分得到所需大小的粒子，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，產(chǎn)率一般低于50%，后處理過(guò)程易破壞識(shí)別位點(diǎn)結(jié)構(gòu)，且形成的微粒形態(tài)不規(guī)則，多呈分散性。

表1 喹諾酮類藥物印跡仿生抗體的制備方法及性能參數(shù)

1.2 懸浮聚合法

懸浮聚合法是指將溶有引發(fā)劑的功能單體以液滴狀懸浮于水中進(jìn)行自由基聚合的方法。此種方法的制備工藝簡(jiǎn)單，所得MIPs 的形態(tài)規(guī)則、比表面積大、吸附和識(shí)別性能較強(qiáng)，是制備聚合物微球最簡(jiǎn)便和最常用的方法之一。陳令濤等[34]以環(huán)丙沙星（ciprofloxacin，CIP）為模板分子，使用懸浮聚合法制備MIPs，結(jié)果表明在最優(yōu)條件下飽和吸附量可達(dá)210.6mg/g，經(jīng)5 次再生后吸附量仍能達(dá)到初始吸附量的92.3%。懸浮聚合法所得聚合物微球粒徑較大，是親和SPE的理想填料，但該方法易造成模板分子包埋過(guò)深，難于洗脫，以致模板分子泄漏，影響分析方法的精確性。

1.3 原位聚合法

原位聚合法是將預(yù)聚合溶液注入到色譜柱或毛細(xì)管柱等反應(yīng)容器中直接聚合得到連續(xù)棒狀MIPs，該方法制備簡(jiǎn)便，避免了傳統(tǒng)制備方法中磨碎等步驟，在線洗脫后可直接應(yīng)用，重復(fù)性得到顯著提高。李兆敏等[35]用原位聚合法合成了CIP 分子印跡整體柱，該法簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)，得到的MIPs直徑在0.2～0.5μm之間，具有良好的均一性和連續(xù)性。

傳統(tǒng)原位聚合方法制得的分子印跡整體柱的裝樣量少、選擇性略差、效率不夠高且易產(chǎn)生壁流。為改善這一缺點(diǎn)，可選擇室溫離子液體做溶劑及致孔劑應(yīng)用于MIPs 的制備。室溫離子液體不僅具有優(yōu)異的溶劑化質(zhì)量、可變的黏度范圍、較低的蒸汽壓和優(yōu)異的化學(xué)熱穩(wěn)定性等特性，并可加速聚合物合成速率、提高聚合物特異性識(shí)別和結(jié)合能力。Sun等[36]在室溫離子液體[BMIm]BF4中采用室溫離子液體介導(dǎo)原位聚合技術(shù)，以諾氟沙星（norfloxacin，NFX）為模板，制備出一種新型MIPs。利用該MIPs 作為SPE 填料，建立了分子印跡固相萃取偶聯(lián)高效液相色譜法（molecularly imprinted solidphase extraction coupling with high performance liquid chromatography，MISPE-HPLC），用于檢測(cè)動(dòng)物組織樣品中痕量的FQs，回收率可達(dá)78.16%～93.50%。

通過(guò)原位聚合法也可以制備仿生傳感器的識(shí)別元件，實(shí)現(xiàn)靶物質(zhì)的特異檢測(cè)。Luo 等[37]以CIP 為模板分子，采用原位光引發(fā)聚合法制備了納米級(jí)仿生印跡膜，作為表面等離子體共振（surface plasmon resonance，SPR）傳感器的識(shí)別元件，用于CIP 的檢測(cè)（制備流程見圖1）。在10-11～10-7mol/L濃度范圍內(nèi)，該傳感器的線性相關(guān)系數(shù)為0.96，檢測(cè)限為0.08μg/L，具有靈敏度高、檢測(cè)限低、重復(fù)性和穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。

圖1 原位光引發(fā)聚合法制備等表面等離子共振傳感識(shí)別元件［37］

1.4 沉淀聚合法

沉淀聚合法是一種操作簡(jiǎn)便、成本低、產(chǎn)率高且印跡效果較好的方法，得到的微球顆粒較小、比表面積大且吸附性能優(yōu)異。張莉等[38]采用沉淀聚合法，以四環(huán)素和NFX 為模板分子，制備仿生識(shí)別材料，作為SPE吸附劑檢測(cè)蜂蜜和奶制品中的藥物殘留，加標(biāo)回收率為82.12%～96.51%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5.0%，檢測(cè)限為0.2ng/g。Benito-Pe?a等[39]以ENR 為模板分子，MAA 為功能單體，2-甲基丙烯酸羥甲基酯為親水性共聚單體，應(yīng)用沉淀聚合法制備出具選擇性識(shí)別能力的單分散MIPs微球，尺寸可控制在2～3μm范圍內(nèi)。Wu等[40]以異硫氰酸熒光素為發(fā)光材料，采用沉淀聚合法合成熒光分子印跡納米粒子，檢測(cè)水樣中的CIP。結(jié)果顯示，方法檢測(cè)線性范圍較寬，為4.04～250nmol/L，熒光特性檢測(cè)限為4.04nmol/L，在一定程度上發(fā)揮了分子印跡技術(shù)的應(yīng)用潛力，見圖2。

1.5 溶膠-凝膠法

溶膠-凝膠技術(shù)具有可低溫合成與處理、操作簡(jiǎn)單方便、產(chǎn)品均勻度高、純度高等特點(diǎn)。杜麗麗等[41]以加替沙星為模板分子，采用溶膠-凝膠分子印跡技術(shù)，在水相中合成具有分子識(shí)別作用的新型有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化仿生抗體材料，并以此為固相填料專一性檢測(cè)牛奶中的加替沙星，回收率可達(dá)79.87%，檢測(cè)限為1.12μg/L。Wang 等[42]以ENR 為模板，APTES 為功能單體，TEOS 為交聯(lián)劑制備分子印跡功能化溶膠-凝膠，檢測(cè)魚肉和雞肉中痕量的ENR，回收率可達(dá)70.00%～82.00%。通過(guò)溶膠-凝膠法制備的新型雜化仿生材料兼顧了溶膠-凝膠和分子印跡技術(shù)二者的優(yōu)點(diǎn)，克服了傳統(tǒng)分子印跡仿生材料的剛性與惰性較差的缺點(diǎn)，正逐漸成為分子印跡技術(shù)的一個(gè)重要研究方向。

1.6 表面分子印跡

圖2 熒光分子印跡納米粒子的制備流程［40］

表面分子印跡是指在固體基底表面發(fā)生聚合反應(yīng)，使印跡位點(diǎn)分散在MIPs或有機(jī)化合物的表面，克服了印跡位點(diǎn)包埋過(guò)深、模板分子難于洗脫的缺陷，加快識(shí)別位點(diǎn)與印跡分子的結(jié)合速率，進(jìn)一步加強(qiáng)印跡材料吸附和分離效率。賀永桓等[45]以O(shè)FL為模板分子，F(xiàn)e3O4磁性納米顆粒為載體，采用可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移聚合方法，制備出具有高選擇性、快速識(shí)別和磁操控的核殼型分子印跡納米材料。同樣，Wang 等[43]以CIP 為模板，F(xiàn)e3O4為磁性材料，羧化纖維素納米晶體為載體，共聚合制備MIPs，選擇性吸附容量可達(dá)50mg/g，具有適宜的飽和磁化強(qiáng)度，可同時(shí)應(yīng)用于6種FQs的選擇性識(shí)別。與傳統(tǒng)的制備方法相比，磁性表面MIPs 解決了傳統(tǒng)MIPs 模板分子包埋過(guò)深、洗脫難的問(wèn)題，且結(jié)合位點(diǎn)在磁性載體表面，比表面積大、選擇性高。但可能存在MIPs 對(duì)磁載體的包裹不完全，易發(fā)生磁泄漏問(wèn)題。因此，提高仿生抗體對(duì)磁性微粒的包裹率，減少磁泄漏，是提高磁性表面MIPs 穩(wěn)定性的關(guān)鍵。此外，表面分子印跡法也可以選擇硅膠、有機(jī)聚合物載體及毛細(xì)管等材料作為基質(zhì)進(jìn)行聚合反應(yīng)。Zdunek 等[44]以ENR 為模板在多孔氧化鋁中制備納米絲結(jié)構(gòu)仿生材料，開發(fā)出一種新的光學(xué)傳感器對(duì)ENR 進(jìn)行特異性分析檢測(cè)。該方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，用于水樣中ENR 的檢測(cè)，檢測(cè)限為0.58μmol/L。

1.7 其他合成方法

近幾年研究者們也逐漸探索出一些新型的方法來(lái)合成喹諾酮類藥物印跡仿生抗體。Wang 等[46]開發(fā)出一種MIPs薄膜（模式圖如圖3所示），將其作為仿生抗體，建立一種直接競(jìng)爭(zhēng)仿生酶聯(lián)免疫方法檢測(cè)動(dòng)物食品中的ENR，回收率為74.40%～86.80%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.3%～8.0%范圍內(nèi)。該方法結(jié)合了分子印跡技術(shù)和酶聯(lián)免疫技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，經(jīng)濟(jì)可靠、使用簡(jiǎn)便，具有廣闊的應(yīng)用前景，但該方法的特異性和抗干擾能力仍待優(yōu)化，MIPs 膜的理化特性，特別是識(shí)別能力、柔韌性和穩(wěn)定性仍需深入研究。

2 喹諾酮類藥物印跡仿生抗體在食品及環(huán)境檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展

喹諾酮類藥物印跡仿生抗體作為一種基于分子識(shí)別的高聚物，常被用作SPE填料及仿生傳感器的識(shí)別元件，應(yīng)用于食品及環(huán)境樣品中喹諾酮類藥物的殘留檢測(cè)。喹諾酮類藥物印跡仿生抗體用于實(shí)際樣品的檢測(cè)見表2。

由表2可知，喹諾酮類藥物印跡仿生抗體應(yīng)用于實(shí)際樣品的檢測(cè)方法主要有MISPE-HPLC、MIMSPD-HPLC、電化學(xué)傳感器和光學(xué)傳感器等幾種方式；檢測(cè)的樣品包括食品（肉、蛋及奶）和環(huán)境（土壤和水樣）等領(lǐng)域。結(jié)果顯示，上述各種分析檢測(cè)方法的回收率較高，檢測(cè)限最低可達(dá)8.985×10-5μg/kg。

圖3 分子印跡薄膜的制備過(guò)程［46］

表2 喹諾酮類藥物印跡仿生抗體用于實(shí)際樣品的檢測(cè)

2.1 肉品中喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)

將制備的MIPs 作為一種SPE 吸附填料，可以較好地克服樣品復(fù)雜所帶來(lái)的內(nèi)源性干擾問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)對(duì)殘留藥物的特異性分離和富集。蘭翠娟[47]以雙模板MIPs制備SPE柱，結(jié)合HPLC方法檢測(cè)樣品中的FQs，對(duì)7 種FQs 的日間回收率為76.50%～91.80%，日內(nèi)回收率為78.00%～93.10%。與單模板分子的MIPs相比，雙模板MSPE-HPLC 用于FQs的殘留檢測(cè)更加簡(jiǎn)便和準(zhǔn)確。

熒光標(biāo)記技術(shù)也可用于MIPs 的制備。Tang等[48]應(yīng)用局部光聚合法制備多功能MIPs 熒光探針，用于FQs 的檢測(cè)（探針制備如圖4 所示）。該熒光探針不僅具有良好的磁性和優(yōu)異的選擇識(shí)別能力，還具有快速和靈敏的優(yōu)點(diǎn)，用于魚類組織中5 種FQs的檢測(cè)，回收率可達(dá)90.33%～108.43%。

2.2 蛋品中喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)

對(duì)禽蛋中的FQs進(jìn)行分析檢測(cè)比較復(fù)雜，因?yàn)樗幬锟赡芘c蛋類中的脂蛋白結(jié)合、萃取溶劑與蛋基質(zhì)也易形成乳液和泡沫，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。常規(guī)方法包括液-液萃取、固相（微）萃取、超臨界流體萃取等樣品制備方法應(yīng)用于分析禽蛋中的FQs，具有相對(duì)較低的回收率、繁瑣的提取程序且無(wú)法同時(shí)提取多種FQs 等缺點(diǎn)?；|(zhì)固相分散（matrix solid-phase dispersion，MSPD）是可以同時(shí)破碎、提取和凈化固體、半固體或高黏度生物樣品的最有前景的技術(shù)之一，可以解決液-液或固相萃取技術(shù)檢測(cè)分析復(fù)雜生物樣品中的缺點(diǎn)。MIPs 作為選擇性MSPD吸附劑可用于環(huán)境和生物樣品中的痕量FQs分析，具有靈敏度高、特異型強(qiáng)和精密度高等優(yōu)點(diǎn)。Yan 等[49]提出一種高選擇性的分子印跡-基質(zhì)固相分散（molecular imprinting and matrix solid phase dispersion，MI-MSPD）多重分析方法。首次使用制備的仿生抗體材料作為特定的MSPD吸附劑，結(jié)合HPLC方法測(cè)定和分析雞蛋和組織樣品中的5 種FQs，該方法可消除基質(zhì)干擾，顯著提高對(duì)藥物檢測(cè)的選擇性和靈敏度，回收率可達(dá)85.70%～104.60%。

2.3 奶中喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)

分子印跡仿生抗體也可與HPLC、毛細(xì)管電泳和高效液相色譜-質(zhì)譜等儀器聯(lián)用，應(yīng)用于乳及乳制品中藥物的殘留檢測(cè)。Kaur等[50]建立了一種高效的MISPE-熒光光譜法，可靈敏測(cè)定牛奶中的單諾沙 星，檢 測(cè) 限 達(dá)2.0×10-9mol/L。Wang 等[51]應(yīng) 用MISPE-HPLC方法測(cè)定牛奶中FQs殘留，基于NFX的MIPs 固相萃取柱對(duì)4 種藥物（CIP、NFX、ENR和洛美沙星）顯示出較高的吸附容量（≥4520ng）和回收率（≥96.00%）。此外，該SPE柱與市售SPE柱相比具有更好的凈化效果和重復(fù)性，可以重復(fù)使用50次以上。多模板制備的MIPs 同時(shí)測(cè)定乳及乳制品中多種殘留藥物，更加靈敏、快速。Zhang等[52]以O(shè)FL和17β-雌二醇為模板，改性單分散聚珠為載體，合成一種多模板表面MIPs，作為SPE 吸附劑同時(shí)測(cè)定牛奶樣品中的痕量喹諾酮類和雌激素類物質(zhì)，回收率達(dá)77.60%～98.00%。

Yuphintharakun 等[53]以CIP 為模板分子，通過(guò)溶膠-凝膠法合成仿生抗體。然后將羧酸功能化的多壁碳納米管和嵌入仿生抗體內(nèi)的CdTe 量子點(diǎn)組成納米復(fù)合光傳感器（構(gòu)建原理圖如圖5 所示），用于雞肉和牛奶中CIP的檢測(cè)，具有高靈敏度、特異選擇性和高親和力等特點(diǎn)，檢測(cè)限為0.066μg/L，回收率可達(dá)82.60%～98.40%。

圖4 多功能分子印跡熒光探針的制備流程［48］

2.4 環(huán)境中喹諾酮類藥物蓄積檢測(cè)

土壤及水體中抗生素的殘留和蓄積已成為一個(gè)新出現(xiàn)的環(huán)境問(wèn)題，對(duì)土壤、水體安全以及全球公共衛(wèi)生構(gòu)成的威脅越來(lái)越大，亟需建立新方法進(jìn)行檢測(cè)。

MISPE已用于環(huán)境樣品中殘留藥物的樣品前處理，實(shí)現(xiàn)環(huán)境樣品（水體、土壤和尿液等）中靶物質(zhì)的選擇性萃取。Qu等[54]分別以CIP和ITA為模板分子和功能單體，在金屬離子介導(dǎo)下合成一種新型MIPs，用作SPE 吸附劑檢測(cè)水樣中4 種FQs 和2 種四環(huán)素藥物，回收率可達(dá)78.60%～113.60%。與傳統(tǒng)MIPs相比，該MIPs可顯著增強(qiáng)印跡效應(yīng)并具有更強(qiáng)的特異性吸附能力。Barahona 等[55]提出在聚丙烯中空纖維（polypropylene hollow fibers，HFs）孔中填充MIPs（制備方案如圖6 所示），研制固相微萃取裝置，結(jié)合HPLC-串聯(lián)質(zhì)譜方法檢測(cè)水樣和尿液中的FQs，檢測(cè)限可達(dá)0.1～10g/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于20%。

Turiel 等[56]以CIP 為模板，通過(guò)沉淀聚合制備MIPs，作為選擇性吸附劑檢測(cè)分析土壤樣品中的FQs。在最優(yōu)條件下，成功檢測(cè)土壤樣品中的5 種FQs，回收率可達(dá)87.90%～103.50%。Zhu 等[57]以CIP為模板分子，使用離子液體功能單體，在水中合成了一種新型的仿生材料（合成路線如圖7 所示），已成功應(yīng)用于水、土壤和豬肉樣品中痕量CIP的分離和富集，回收率為87.33%～102.50%。

仿生傳感器具有靈敏度高、線性范圍寬和檢測(cè)限低的優(yōu)點(diǎn)，常用于環(huán)境中藥物的殘留檢測(cè)。Liu等[58]采用沉淀聚合法，以NFX為模板分子，合成印跡仿生抗體，進(jìn)一步功能化修飾，制備出快速和超靈敏檢測(cè)NFX的電化學(xué)傳感器（構(gòu)建方法如圖8所示），可用于制劑和生物樣品中靶物質(zhì)的快速檢測(cè)。在最優(yōu)條件下，該傳感器的線性檢測(cè)范圍為0.003～3.125μmol/L，檢 測(cè) 限 為1.58nmol/L。Liu等[59]利用高熒光碳點(diǎn)與CdTe 量子點(diǎn)結(jié)合，構(gòu)建了一種多功能分子印跡比率熒光傳感器，已成功應(yīng)用于人尿樣中CIP 的檢測(cè)，線性范圍為0～60nmol/L，檢測(cè)限為0.0127nmol/L。

圖5 環(huán)丙沙星納米復(fù)合光傳感器的構(gòu)建原理［53］

圖6 制備分子印跡中空纖維束的兩步聚合工藝方案［55］

圖7 環(huán)丙沙星仿生識(shí)別材料合成示意圖［57］

圖8 分子印跡電化學(xué)傳感器的構(gòu)建［58］

3 結(jié)語(yǔ)與展望

分子印跡仿生抗體顯示出良好的選擇性、靈敏度和穩(wěn)定性，已廣泛應(yīng)用于食品和環(huán)境安全領(lǐng)域。然而，目前喹諾酮類藥物印跡仿生抗體在實(shí)際應(yīng)用中仍面臨一些挑戰(zhàn)，尚難以完全替代傳統(tǒng)檢測(cè)方法。首先，合成的印跡仿生抗體過(guò)程中模板分子與聚合物的作用力較弱（主要靠氫鍵、靜電、疏水及范德華力等）,導(dǎo)致印跡容量和效應(yīng)較低，嚴(yán)重限制了其向商業(yè)化規(guī)模發(fā)展；其次，對(duì)分子印跡過(guò)程及識(shí)別過(guò)程的機(jī)理、結(jié)合位點(diǎn)的作用機(jī)理、仿生抗體的結(jié)構(gòu)和傳質(zhì)機(jī)理等方面的研究仍不透徹；此外，大多數(shù)分子印跡的合成和識(shí)別基本上都限制在有機(jī)相中，研究如何能夠用特殊的分子間作用力在水溶液或極性溶劑中進(jìn)行分子印跡和識(shí)別仍是目前難以解決的問(wèn)題。

為解決以上問(wèn)題，今后喹諾酮類藥物印跡仿生抗體的研究應(yīng)主要集中在以下幾方面：尋找一些能夠形成更強(qiáng)作用鍵的功能單體，或者將幾種作用力偶合起來(lái)，增強(qiáng)印跡過(guò)程中的鍵合作用力；從分子水平上更好地理解和研究分子識(shí)別過(guò)程，制備出性質(zhì)與天然抗體相類似的均質(zhì)性結(jié)合位點(diǎn)的新型分子印跡仿生抗體；通過(guò)優(yōu)化分子印跡仿生抗體的合成條件，實(shí)現(xiàn)從有機(jī)相到水相的轉(zhuǎn)變，使分子印跡仿生抗體能夠代替生物抗體，構(gòu)建和開發(fā)高性能識(shí)別模式，建立高保真仿生分析方法。

總之，從成本、生態(tài)和環(huán)境保護(hù)的角度來(lái)看，合成或?qū)ふ腋m宜的功能單體和溶劑，開發(fā)更便捷的合成方法及構(gòu)建高性能仿生識(shí)別模式，是新型喹諾酮類藥物印跡仿生抗體研制及應(yīng)用的重要發(fā)展方向。