TSP-1和TGF-β1在妊娠期糖尿病胎盤組織中的意義及與胎兒缺氧的關(guān)系

李小敏 李娜

【摘要】 目的：探討血小板反應(yīng)蛋白1（TSP-1）和轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）在妊娠期糖尿?。╣estational diabetes mellitus，GDM）胎盤組織中的意義及與胎兒缺氧的關(guān)系。方法：選取本院2019年1-8月的40例GDM孕婦作為觀察組，并選取同期40例正常孕婦作為對照組。所有孕婦分娩時留取胎盤組織。比較兩組TSP-1和TGF-β1表達陽性率;比較觀察組TSP-1、TGF-β1表達陽性與陰性者的血糖指標;分析TSP-1和TGF-β1表達與GDM孕婦血糖指標的相關(guān)性，比較觀察組TSP-1和TGF-β1表達陽性與陰性者的胎兒缺氧發(fā)生率。結(jié)果：觀察組TSP-1與TGF-β1表達陽性率均高于對照組（P<0.05）。觀察組TSP-1與TGF-β1陽性者的空腹血糖、糖化血紅蛋白及胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）均高于陰性者（P<0.05）。TSP-1與TGF-β1表達與空腹血糖、糖化血紅蛋白、HOMA-IR均呈正相關(guān)（P<0.05）。觀察組TSP-1與TGF-β1表達陽性者的胎兒缺氧發(fā)生率均高于陰性者（P<0.05）。結(jié)論：GDM孕婦胎盤組織中TSP-1和TGF-β1表達陽性率較高，TSP-1和TGF-β1表達與空腹血糖、糖化血紅蛋白及HOMA-IR均呈正相關(guān)，TSP-1和TGF-β1表達陽性會增加胎兒缺氧風(fēng)險。

【關(guān)鍵詞】 妊娠期糖尿病 血小板反應(yīng)蛋白1 轉(zhuǎn)化生長因子β1

[Abstract] Objective： To investigate the significance of thrombospondins-1 （TSP-1） and transforming growth factor β1 （TGF-β1） in the placental tissues of gestational diabetes mellitus （GDM） and their relationship with fetal hypoxia. Method： A total of 40 pregnant women with GDM in our hospital from January to August 2019 were selected as the observation group， and 40 normal pregnant women in the same period were selected as the control group. Placental tissue was collected from all pregnant women at the time of delivery. The positive expression rates of TSP-1 and TGF-β1 in the two groups were compared. The blood glucose indexes of the patients with positive and negative expression of TSP-1 and TGF-β1 in the observation group were compared. To analyze the correlation between the expression of TSP-1 and TGF-β1 and the blood glucose index in pregnant women with GDM， and the incidence of fetal hypoxia in the patients with positive and negative expression of TSP-1 and TGF-β1 in the observation group were compared. Result： The positive rate of expression of TSP-1 and TGF-β1 in the observation group were higher than those in the control group （P<0.05）. Fasting glucose， glycosylated hemoglobin and insulin resistance index （HOMA-IR） of patients with positive expression of TSP-1 and TGF-β1 in the observation group were higher than those with negative （P<0.05）. The expression of TSP-1 and TGF-β1 was positively correlated with fasting blood glucose， glycosylated hemoglobin and HOMA-IR （P<0.05）. The incidence of fetal hypoxia in the patients with positive expression of TSP-1 and TGF-β1 in the observation group was higher than negative （P<0.05）. Conclusion： The positive rate of expression of TSP-1 and TGF-β1 in the placental tissues of pregnant women with GDM was higher， the expression of TSP-1 and TGF-β1 was positively correlated with fasting blood glucose， glycosylated hemoglobin and HOMA-IR， and positive expression of TSP-1 and TGF-β1 increased the risk of fetal hypoxia.[Key words] Gestational diabetes mellitus TSP-1 TGF-β1

妊娠期糖尿?。╣estational diabetes mellitus，GDM）為孕期常見并發(fā)癥，發(fā)病率7%～10%，此病不僅增加孕婦產(chǎn)后糖尿病風(fēng)險，還會影響妊娠結(jié)局。GDM發(fā)病機制雖仍不明確，但有研究發(fā)現(xiàn)，多功能糖蛋白血小板反應(yīng)蛋白1（TSP-1）參與機體免疫、炎癥反應(yīng)等，可通過對炎癥因子水平的影響增加糖尿病風(fēng)險[1]。轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）為多功能細胞因子，參與糖尿病、代謝綜合征等疾病的發(fā)生。由于GDM與糖尿病發(fā)病機制存在相似性，故有專家推測TSP-1和TGF-β1表達與GDM之間也存在相關(guān)性，但相關(guān)研究目前較為缺乏。本研究以40例GDM孕婦為例，分析GDM產(chǎn)婦胎盤組織中TSP-1和TGF-β1表達及與胎兒缺氧的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2019年1-8月GDM孕婦40例作為觀察組，并選取同期本院40例正常孕婦作為對照組。納入標準：符合GDM診斷標準;年齡>18歲;孕周24～28周;單胎妊娠;臨床資料完善。排除標準：有煙酒嗜好者;伴妊娠期高血壓等其他妊娠期并發(fā)癥者;伴全身急慢性感染、多囊卵巢綜合征者;伴心血管、腎臟、免疫與血液系統(tǒng)疾病者;不明原因的陰道流血者;前置胎盤、胎盤早剝及先兆早產(chǎn)者;妊娠期服用過除維生素與鈣劑外的其他治療藥物者。所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書，本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法 所有患者分娩時均采取剖宮產(chǎn)，留取母體面近臍根部處胎盤組織（約1 cm3大?。?，4%甲醛溶液中室溫固定、脫水、石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，常溫保存。采用免疫組織化學(xué)SP法檢檢測胎盤組織中TSP-1與TGF-β1表達情況。載玻片用多聚賴氨酸進行附膜，將胎盤組織切片附于載玻片上，60 ℃下烘烤過夜。脫蠟：將組織切片依序浸入二甲苯、濃度100%、95%、90%、85%、75%的乙醇溶液中各5 min分別2遍，磷酸鹽緩沖（PBS）液沖洗2遍。用1%甲醇雙氧水洗10 min，蒸餾水洗1遍，PBS液沖洗3遍，每遍5 min。將組織切片放入檸檬酸鹽緩沖液中，微波輻射10 min，待降至室溫后用PBS液沖洗3遍，每遍5 min。切片上滴加正常山羊血清封閉液，室溫下孵育20 min，甩去多余液體。滴加一抗（Thrombospondin-1、兔原TGF-β1多克隆抗體），4 ℃下過夜，PBS液沖洗3遍，每遍5 min。滴加生物素化二抗，37℃靜放20 min， PBS液沖洗3遍，每遍5 min。在400倍視野下隨機觀察5個視野（每個視野計數(shù)100個細胞），依據(jù)細胞染色強度和陽性細胞占比進行判定。細胞染色強度評分：0分：無著色，1分：淺黃色;2分：棕黃色;3分：棕褐色。陽性細胞占比：0分：無陽性細胞，1分：陽性細胞占比;2分：陽性細胞占比25%～50%;3分：陽性細胞占比50%～75%;4分：陽性細胞占比>75%。免疫組織化學(xué)判定標準：計算細胞染色強度評分與陽性細胞占比評分的乘積，10～12分：強陽性（+++）;6～9分：陽性（++）;3～5分：弱陽性（+）;0～2分：陰性（-）。

1.3 觀察指標與判定標準 （1）比較兩組TSP-1和TGF-β1表達陽性率。表達陽性=強陽性+陽性+弱陽性。（2）比較觀察組中TSP-1、TGF-β1表達陽性與陰性者的血糖指標。包括空腹血糖、糖化血紅蛋白及胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）及空腹胰島素。采集兩組空腹靜脈血約3 mL，置于抗凝管中，用膠體金法檢測空腹血糖與糖化血紅蛋白，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測空腹胰島素。HOMA-IR=空腹血糖×空腹胰島素/22.5。（3）分析TSP-1和TGF-β1表達與GDM孕婦血糖指標的相關(guān)性。（4）觀察組妊娠結(jié)局。觀察組早產(chǎn)與新生兒窒息情況，比較觀察組中TSP-1、TGF-β1表達陽性與陰性者的胎兒缺氧發(fā)生率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，等級資料比較采用秩和檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)系數(shù)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 觀察組年齡23～38歲，平均（29.04±3.19）歲;孕周24～28周，平均（25.97±1.57）周;孕期增重7～20 kg，平均（12.79±2.38）kg。對照組年齡23～38歲，平均（28.85±3.25）歲;孕周24～28周，平均（26.21±1.65）周;孕期增重6～21 kg，平均（13.22±2.51）kg。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組TSP-1表達陽性率比較 觀察組TSP-1表達陽性率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.3 兩組TGF-β1表達陽性率比較 觀察組TGF-β1表達陽性率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.4 觀察組TSP-1、TGF-β1表達陽性與陰性者血糖指標比較 TSP-1與TGF-β1表達陽性者的空腹血糖、糖化血紅蛋白及HOMA-IR均高于陰性者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3、4。

2.5 TSP-1和TGF-β1表達與GDM孕婦血糖指標的相關(guān)性 TSP-1表達與空腹血糖、糖化血紅蛋白及HOMA-IR均呈明顯正相關(guān)（r=0.388、0.473、0.450，P=0.013、0.002、0.003）。TGF-β1表達與空腹血糖、糖化血紅蛋白及HOMA-IR均呈明顯正相關(guān)（r=0.436、0.428、0.451，P=0.005、0.006、0.004）。

2.6 觀察組中不良妊娠結(jié)局比較 觀察組中共出現(xiàn)4例新生兒窒息與8例早產(chǎn)。TSP-1表達陽性者胎兒缺氧發(fā)生率為44.00%（11/25）高于陰性者的6.67%（1/15），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=6.222，P=0.013）。TGF-β1表達陽性者胎兒缺氧發(fā)生率為50.00%（10/20）高于陰性者的10.00%（2/20），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=7.619，P=0.006）。

3 討論

專家認為，積極探索GDM發(fā)病機制，并對GDM進行早期干預(yù)是減少并發(fā)癥、改善妊娠結(jié)局的關(guān)鍵[2]。本研究發(fā)現(xiàn)，與健康孕婦相比，GDM孕婦的胎盤組織TSP-1與TGF-β1表達陽性率均相對更高，GDM孕婦的TSP-1與TGF-β1表達陽性與空腹血糖、糖化血紅蛋白、HOMA-IR均呈明顯正相關(guān)，提示胎盤組織TSP-1與TGF-β1表達與GDM之間存在密切關(guān)系。

TSP-1為多功能糖蛋白，是機體的生理激活物之一，由內(nèi)皮與血小板衍生，在腎臟、心臟中均可表達，具有促血栓形成與抗血管生成作用，參與激活血管內(nèi)皮細胞，造成氧代謝產(chǎn)物與血管活性物質(zhì)增加，纖維蛋白原沉積等[3-4]。動物實驗發(fā)現(xiàn)，TSP-1可從血小板α顆粒中被分離，并在激活后釋放出來，介導(dǎo)血小板活化與黏附富集，誘導(dǎo)血小板性血栓形成，并加重局部氧化應(yīng)激損傷，通過加重胰島β細胞缺血再灌注損傷的途徑影響GDM的血糖指標進一步異常[5-6]。有研究發(fā)現(xiàn)，TSP-1可促進單核細胞或巨噬細胞對胰島β細胞的浸潤，從而增加機體內(nèi)分泌功能紊亂的風(fēng)險，這是TSP-1表達陽性孕婦的空腹血糖與糖化血紅蛋白高于陰性孕婦的另一個主要原因[7]。另外，TSP-1還可誘導(dǎo)下游炎性細胞因子富集，加劇糖耐量異常。王云楓等[8]研究則認為，TSP-1還可通過對血管內(nèi)皮生長因子的影響干預(yù)機體血糖代謝與肝臟糖原輸出而造成血糖指標的進一步異常。

TGF-β1為多肽信號分子，可被高糖水平激活，通過對胰島素基因轉(zhuǎn)錄與胰島β細胞功能的調(diào)控作用參與血糖水平調(diào)控，故胎盤組織的TGF-β1表達會造成GDM孕婦血糖指標的異常[9]。另外，GDM的發(fā)生與慢性炎癥有一定關(guān)聯(lián)，TGF-β1可通過對NF-κB的調(diào)節(jié)，上調(diào)炎性細胞因子水平，影響胰島素敏感細胞的胰島素受體底物磷酸化，加重胰島素抵抗發(fā)生[10-12]。故TGF-β1的高表達會造成體內(nèi)胰島素受體敏感性下降，加重胰島素抵抗，造成血糖指標的進一步改變，故GDM孕婦中TGF-β1陽性表達的空腹血糖、糖化血紅蛋白與HOMA-IR均高于TGF-β1陰性（P<0.05）。專家發(fā)現(xiàn)，高糖狀態(tài)會誘導(dǎo)系膜細胞TGF-β1的激活，增加系膜細胞合成TSP-1，促使TGF-β1的自分泌活化，故兩者之間具有互相影響的作用，這一結(jié)果提示，GDM孕婦中TGF-β1表達可受到TSP-1的影響，而造成血糖指標的差異[13]。

有研究認為，TSP-1的激活可在一定程度上對成肌纖維細胞與炎性細胞活性造成間接影響，改變多形核細胞的激活和趨化作用，從而對血管內(nèi)皮細胞造成影響，故胎盤組織中TSP-1的高表達會增加新生血管形成受到的抑制作用，造成胎盤組織缺血與缺氧，這是TSP-1陽性孕婦早產(chǎn)與新生兒窒息率高于TSP-1陰性孕婦的主要原因[14-16]。動物實驗發(fā)現(xiàn)，TGF-β1可通過受體信號傳遞參與細胞增殖和分化的調(diào)節(jié)、炎性反應(yīng)與組織修復(fù)及胚胎發(fā)育等過程，TGF-β1高表達是造成胎兒缺氧的主要影響因素之一[17-18]。TGF-β1在胎盤組織的高表達可通過對滋養(yǎng)細胞功能的影響加重胎盤血管內(nèi)皮損傷，造成胎盤缺血、缺氧，誘發(fā)胎盤功能障礙，這是TGF-β1表達陽性孕婦的胎兒缺氧發(fā)生率高于陰性孕婦的主要原因。陳海霞等[19]研究認為，TSP-1與TGF-β1還可通過對內(nèi)皮細胞的作用對胎盤灌注造成影響，從而增加胎兒缺氧風(fēng)險。

綜上所述，GDM孕婦胎盤組織中TSP-1和TGF-β1表達可對血糖指標造成明顯影響，并通過對血管內(nèi)皮細胞與的影響增加胎兒缺氧風(fēng)險，不利于妊娠結(jié)局。胎盤組織中TSP-1和TGF-β1表達可為GDM治療提供新靶點，應(yīng)引起重視。

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（收稿日期：2019-09-20） （本文編輯：田婧）