南昌市圍生期孕婦B族鏈球菌感染情況及耐藥分析

查固長

摘要：目的? 分析南昌市圍生期孕婦B族鏈球（GBS）的菌感染情況及耐藥性。方法? 選取2018年9月～2019年9月江西省婦幼保健院產(chǎn)檢的800例圍生期孕婦為研究對象，采集肛周及陰道分泌物進行GBS檢測，統(tǒng)計其檢出率;應用K-B紙片擴散法與D試驗檢測GBS陽性分離菌株的藥物敏感性，分析耐藥表型;應用PCR法檢測耐藥菌株的耐藥基因，分析耐藥表型與耐藥基因情況。結果? 800例孕婦共檢出GBS陽性43例，檢出率為5.38%（43/800）;GBS對萬古霉素、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢吡肟、青霉素、頭孢曲松及左氧氟沙星的敏感率較高，分別占100.00%、100.00%、100.00%、95.34%、95.34%、93.02%;對四環(huán)素、紅霉素、克林霉素和氯霉素敏感率低，分別占23.26%、25.58%、41.86%、65.12%。D試驗中，耐藥表型以cMLS表型為主，占48.84%（21/43），其次為M型、S型、L型，且未檢出iMLS型;耐藥基因以erm為主，其中ermB 18株，ermTR 8株，其次為mef和linB。結論? 圍生期孕婦GBS檢出率較高，臨床應重視圍生期孕婦GBS感染的篩查。GBS分離菌株對紅霉素、克林霉素的敏感性較低，對萬古霉素、頭孢哌酮/舒巴坦的敏感性相對較高。臨床應根據(jù)藥敏實驗結果及D試驗結果，合理選用抗菌藥物，提高治療的有效性和安全性，有效改善孕婦妊娠結局。

關鍵詞：圍生期孕婦;B族鏈球菌;耐藥表型;耐藥基因

Abstract：Objective? To analyze the bacterial infection and drug resistance analysis of pregnant women with group B streptococcus （GBS） in perinatal period in Nanchang.Methods? From September 2018 to September 2019， 800 perinatal pregnant women were examined in the Jiangxi Maternal and Child Health Hospital.The perianal and vaginal secretions were collected for GBS testing， and the detection rate was counted. K-B paper was used for diffusion method D test were used to detect the drug sensitivity of GBS-positive isolates and analyze the drug-resistant phenotype; PCR method was used to detect the drug-resistant genes of drug-resistant strains， and the drug-resistant phenotype and drug-resistant genes were analyzed.Results? A total of 43 pregnant women were positive for GBS in 800 cases， the detection rate was 5.38% （43/800）; GBS was sensitive to vancomycin， cefoperazone/ sulbactam， cefepime， penicillin， ceftriaxone and levofloxacin The rate is higher， accounting for 100.00%， 100.00%， 100.00%， 95.34%， 95.34%， 93.02% respectively; the sensitivity to tetracycline， erythromycin， clindamycin and chloramphenicol is low， accounting for 23.26%， 25.58%， 41.86%， 65.12%. In the D test， the resistance phenotype was mainly cMLS phenotype， accounting for 48.84% （21/43）， followed by M type， S type， L type， and iMLS type was not detected; drug resistance genes were mainly erm among them， 18 ermB strains and 8 ermTR strains， followed by mef and linB.Conclusion? The detection rate of GBS in perinatal pregnant women is relatively high， and clinical attention should be paid to the screening of GBS infection in perinatal pregnant women. GBS isolates have low sensitivity to erythromycin and clindamycin， and relatively good sensitivity to vancomycin and cefoperazone/ sulbactam. According to the results of the drug sensitivity test and the D test， the clinical selection of rational antibacterial drugs should improve the effectiveness and safety of treatment and effectively improve the pregnancy outcome of pregnant women.

B族鏈球菌（group B streptococcus，GBS）也稱無乳鏈球菌，常定植于人類下消化道和生殖道等部位[1]，其是一種條件致病菌，當機體內(nèi)壞境發(fā)生紊亂時，可導致感染進而引起多種疾病[2]，且常通過羊水、產(chǎn)道傳播給新生兒，導致新生兒誘發(fā)肺炎、敗血癥、腦膜炎等，嚴重威脅母嬰生命安全[3]。因此，臨床應重視對圍生期孕婦進行GBS感染的檢測與治療，以改善分娩結局，確保母嬰安全[4]。本研究結合2018年9月～2019年9月江西省婦幼保健院產(chǎn)檢的800例圍生期孕婦的GBS檢測結果，分析圍生期孕婦GBS耐藥表型與相關耐藥基因的關系，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 選取2018年9月～2019年9月江西省婦幼保健院產(chǎn)檢的800例圍生期孕婦為研究對象，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，研究對象知情同意并簽署知情同意書。納入標準：①年齡21～37歲;②經(jīng)末次月經(jīng)、B超檢查等證實為宮內(nèi)妊娠;③單活胎;④妊娠期≥35周;排除標準：①伴有嚴重心、肝、腎、腦、呼吸、血液系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾病;②合并感染性疾病;③宮內(nèi)環(huán)境異常;④胎兒發(fā)育異常;⑤近1個月內(nèi)使用抗菌藥物治療;⑥伴有精神疾病者。孕婦年齡21～37歲，平均年齡（28.11±2.98）歲;妊娠期35～40周，平均孕周（37.32±0.92）周;初產(chǎn)婦453例，經(jīng)產(chǎn)婦347例。

1.2方法

1.2.1取材方法? 參照美國疾病控制與預防中心（CDC）推薦的方法[5]：由臨床醫(yī)生擦去外陰分泌物，用一支無菌棉拭子插入陰道內(nèi)1/3處，旋轉一周采集陰道分泌物;再取另一支無菌棉拭子插入肛門括約肌上2～3 cm處，旋轉一周采集直腸分泌物。采集后將兩支無菌棉拭子置于無菌管中并送檢。運用鏈球菌B族快速檢測卡對標本進行檢測。

1.2.2藥敏試驗? 所有菌株均行細菌培養(yǎng)、CAMP試驗以及觸酶試驗予以鑒定。應用K-B紙片擴散法與D試驗檢測GBS陽性分離菌株對青霉素、頭孢吡肟、頭孢曲松、左氧氟沙星、萬古霉素、頭孢哌酮/舒巴坦、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、克林霉素的藥物敏感性。D試驗：于涂布菌液的M-H平板上貼好紅霉素、克林霉素藥敏紙片，兩紙片邊距15 mm，35℃下孵育24 h，操作步驟嚴格按照2013美國臨床及實驗室標準協(xié)會說明進行[6]。

1.2.3耐藥基因檢測? 應用PCR法檢測。由上海生工生物工程有限公司合成引物，以配制的B族鏈球菌菌液為模板，添加PCR反應液，提取DNA;PCR反應總體系是20 μl，包含10×PCR Mix 10 μl，DNA模板1 μl，上下游引物均為0.5 μl，加入ddH2O 20 μl，進行30個循環(huán)，目的基因PCR擴增引物序列及擴增條件為：①ermB基因：引物ermB-F，序列GAAAAGGTACTCAACCAAATA，退火溫度57℃;引物ermB-R，序列AGTAACGGTACTTAAATTGTTTAC，退火溫度57 ℃;產(chǎn)物大小610 bp;②ermTR基因：引物ermTR-F，序列GAAGTTTAGCTTTCCTAA，退火溫度57 ℃;引物ermTR-R，序列GCTTCAGCACCTGTCTTAATGAT，退火溫度57 ℃;產(chǎn)物大小388 bp;③linB基因：引物linB-F，序列CCTACCTATTGTTTGTGGAA，退火溫度57 ℃;引物linB-R，序列ATAACGTTACTCTCCTATTC，退火溫度57 ℃;產(chǎn)物大小920 bp;④mef基因：引物mef-F，序列AGTATCATTAATCACTAGTGC，退火溫度50℃;引物mef-R，序列TTCTTCTGGTACTAAAAGTGG，退火溫度50 ℃;產(chǎn)物大小920 bp。擴增產(chǎn)物的測序與分析：取5 μl PCR擴增產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠上（含1×TAE與EB），電泳為120 V/cm，于凝膠成像儀下觀察、拍照，選擇部分陽性PCR擴增產(chǎn)物進行雙向測序，結果在Genebank數(shù)據(jù)庫中進行同源性比對，>98%視為GBS具有目標基因。

1.3觀察指標? 分析GBS檢出率、GBS陽性分離菌株的藥物敏感性及耐藥表型與耐藥基因的相關性。GBS陽性：細菌培養(yǎng)出GBS，視為帶菌者;細菌培養(yǎng)陰性、PCR檢測陽性，則重新采集孕婦肛周分泌物和陰道下1/3分泌物再次進行細菌培養(yǎng)與PCR檢測，有一項檢測結果為陽性則視為帶菌者;細菌培養(yǎng)陽性、PCR檢測陽性，視為GBS陽性[7]。

1.4統(tǒng)計學方法? 采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以（x±s）進行描述，計數(shù)資料以[n（%）]進行描述。

2結果

2.1 GBS檢出率? 800例孕婦中共檢出GBS陽性43例，檢出率為5.38%（43/800）。

2.2藥物敏感性分析? 43株陽性分離菌株藥敏試驗顯示，GBS對萬古霉素、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢吡肟、青霉素、頭孢曲松及左氧氟沙星的敏感率高，對四環(huán)素、紅霉素、克林霉素和氯霉素敏感率低，見表1。

2.3耐藥表型與耐藥基因的關系? 耐藥表型以cMLS表型為主，其次為M型、S型、L型，且未檢出iMLS型。耐藥基因以erm為主，其中ermB 18株，ermTR 8株，其次為mef和linB;同時表達ermB和ermTR基因的GBS菌有7株，同時表達ermB、ermTR和mef或者ermB、ermTR和linB基因的有4株，見表2。

3討論

GBS屬于一種條件致病菌，當妊娠期機體免疫功能下降和內(nèi)壞境紊亂時，可發(fā)生上行性感染，進而引起多種疾病[8]。有研究表明[9]，國內(nèi)圍生期孕婦GBS感染率為5%～30%。本研究的800例圍生期孕婦中，共檢測出GBS陽性43例，檢出率為5.38%，低于東莞的9.10%[10]，但高于西安的1.71%[11]，說明圍生期孕婦GBS感染率存在地區(qū)差異。有研究表明[12]，圍生期孕婦生殖道GBS感染會引起早產(chǎn)、胎膜早破、產(chǎn)褥感染等疾病，且有40%～70%幾率經(jīng)產(chǎn)時垂直傳播或產(chǎn)后水平傳播感染新生兒，嚴重影響母嬰健康，因此加強對圍生期孕婦的GBS檢測尤為重要。

本研究對800株GBS菌株監(jiān)測了10種抗菌藥物的藥敏試驗情況，結果顯示GBS對萬古霉素、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢吡肟、青霉素、頭孢曲松及左氧氟沙星的敏感率高，分別為100.00%、100.00%、100.00%、95.34%、95.34%、93.02%;對四環(huán)素、紅霉素、克林霉素和氯霉素敏感率低，分別為23.26%、25.58%、41.86%、65.12%。因此，對于圍生期孕婦GBS感染者，可根據(jù)藥敏實驗結果結合臨床診療，給予敏感率較高的抗菌藥物。GBS的耐藥機制主要為erm基因介導靶位點修飾及mef基因介導主動外排[13]。本研究中43株陽性分離菌株的D試驗結果顯示，耐藥表型以cMLS表型為主，其次為M型，L型，且未發(fā)現(xiàn)iMLS型，因此臨床上在使用抗生素時，應避免重復選擇大環(huán)內(nèi)脂-克林霉素-鏈陽霉素類（MLSB）抗生素。本研究檢測出19株ermB基因，占比cMLS表型71.43%（15/21），同時表達ermB和ermTR基因的GBS菌有7株，同時表達ermB、ermTR和mef或者ermB、ermTR和linB基因的有4株，說明GBS對大環(huán)內(nèi)脂耐藥的機制主要為erm基因介導靶位點修飾，其中ermB為主要耐藥基因，且同一菌株可檢出多種耐藥基因。

綜上所述，圍生期孕婦GBS檢出率較高，臨床應重視圍生期孕婦GBS感染的篩查。GBS分離菌株對紅霉素、克林霉素的敏感性較低，對萬古霉素、頭孢哌酮/舒巴坦的敏感性相對較高。臨床應根據(jù)藥敏實驗結果及D抑菌圈實驗結果，合理選用抗菌藥物，提高治療的有效性和安全性，有效改善孕婦妊娠結局。

參考文獻：

[1]Creti R，Imperi M，Berardi A，et al.Neonatal Group B Streptococcus Infections：Prevention Strategies，Clinical and Microbiologic Characteristics in 7 Years of Surveillance[J].Pediatr Infect Dis J，2017，36（3）：256-262.

[2]LeD K，F(xiàn)aal A，Jaiteh M，et al.Association between func-tional antibody against Group B Streptococcus and maternaland infant colonization in a Gambian cohort[J].Vaccine，2017，35（22）：2970-2978.

[3]李東，張樹琛，時琰麗，等.北京地區(qū)孕晚期婦女定植B族鏈球菌耐藥狀況與血清型分布情況分析[J].首都醫(yī)科大學學報，2018，39（4）：591-595.

[4]楊潔，陳海迎，鄭建瓊，等.FQ-PCR法與細菌培養(yǎng)法檢測妊娠晚期B族鏈球菌感染的效能比較及細菌耐藥性分析[J].浙江醫(yī)學，2018，40（7）：735-738.

[5]Centers for Disease Control and Prevention （CDC）."Choking game" awareness and participation among 8th graders-Oregon，2008[J].Morb Mortal Wkly Rep，2010，59（1）：1-5.

[6]宇巖，呂榮，鄭莉甥.圍生期孕婦B族鏈球菌感染、耐藥性分析及對妊娠結局的細菌學影響[J].中國實用醫(yī)藥，2018，13（36）：88-90.

[7]張麗華，郭主聲，楊維青，等.2013-2014年圍產(chǎn)期孕婦攜帶B族鏈球菌的血清型與耐藥分析[J].中國感染與化療雜志，2017，17（5）：527-531.

[8]楊愛婷.孕婦妊娠晚期B族鏈球感染對妊娠結局及新生兒的影響[J].中國當代醫(yī)藥雜志，2016，23（15）：146-148.

[9]徐一鳴，韓寧，劉琰，等，孕婦生殖道B族鏈球菌感染對妊娠結局的影響研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2016，26（9）：2128-2130.

[10]張麗華，楊偉青，張麗，等.廣東東莞地區(qū)2009-2014年圍產(chǎn)期孕婦B族鏈球菌的分離與耐藥性分析[J].中國感染與化療雜志，2015，15（6）：575-578.

[11]杜文淵，鄒余糧，李彩霞，等.妊娠晚期B族鏈球菌感染對妊娠結局的影響及耐藥性分析[J].中國計劃生育和婦產(chǎn)科雜志，2019，11（3）：64-67.

[12]廖宗琳，陳麗霞，沈宏志，等.圍生期孕婦生殖道B族鏈球菌感染的影響因素分析及對妊娠結局的影響[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2018，18（2）：247-249.

[13]蘇錦珍，吳偉元，丁璐，等.圍生期孕產(chǎn)婦感染或定植的B族鏈球菌耐藥情況、血清型、毒力基因及基因型分析[J].中華婦幼臨床醫(yī)學雜志（電子版），2016，12（5）：583-589.

收稿日期：2019-10-27;修回日期：2019-11-27

編輯/杜帆