廣州市2018年輸入性登革病毒4型全基因組序列特征分析

蘇文哲,曾 慶,蔣力云,曹毅敏,李意蘭,陳宗遒,朱娉婷,景欽隆,狄 飚,胡玉山,張周斌

登革病毒(Dengue virus, DENV)是一種經(jīng)伊蚊傳播的蟲(chóng)媒病毒，感染人體后可導(dǎo)致登革熱，目前已有超過(guò)100個(gè)國(guó)家和地區(qū)報(bào)道過(guò)登革熱病例[1]。DENV目前已發(fā)現(xiàn)有4個(gè)血清型(DENV-1～4)，每個(gè)血清型之間存在一定的交叉反應(yīng)；異型DENV的二次感染常可引發(fā)宿主的嚴(yán)重免疫反應(yīng)，即所謂的抗體依賴性感染增強(qiáng)現(xiàn)象(antibody dependent enhancement，ADE)，進(jìn)展為重癥病例(包括登革出血熱和登革休克綜合征)[2]。DENV基因組為單股負(fù)鏈RNA，全長(zhǎng)約11 000 bps，包含1個(gè)開(kāi)放讀碼框架，共編碼3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(capsid/membrane/envelop, C/M/E)和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1/NS2A/NS2B/NS3/NS4A/NS4B/NS5)[2]。全球每年約有3.9億人感染DENV，其中9 600萬(wàn)感染者具有明顯的臨床癥狀，絕大多數(shù)的感染者均可自愈，但該疾病所帶來(lái)的社會(huì)負(fù)擔(dān)仍然不可忽視，登革熱已經(jīng)成為全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題[3]。目前已有針對(duì)4種血清型DENV的疫苗Dengvaxia問(wèn)世，并已在國(guó)外獲批投入使用，但由于存在安全問(wèn)題，未感染過(guò)DENV的人群在接種疫苗后感染可能加重臨床癥狀，因此尚未在我國(guó)投入使用[4]。

我國(guó)建國(guó)后首次有記錄的登革熱暴發(fā)疫情始于1978年，波及的省份包括廣東、廣西、云南、福建和浙江[5]。登革熱的主要傳播媒介白紋伊蚊和埃及伊蚊均在廣東省本地被發(fā)現(xiàn)過(guò)，在過(guò)去30年間，常有輸入性的登革熱病例引起的本地暴發(fā)疫情的報(bào)道；最近一次大規(guī)模的暴發(fā)疫情發(fā)生在2014年，由DENV-1型病毒引起，全省報(bào)告病例共計(jì)45 236例，其中廣州市報(bào)告病例37 340例，為近10年來(lái)最高[6]。東南亞各國(guó)氣候炎熱，衛(wèi)生條件較差，登革熱疫情常年不斷，毗鄰廣東省，是廣東省登革熱的主要輸入地[3]。近年來(lái)隨著對(duì)外貿(mào)易和外出旅游頻率的不斷提高，廣州市每年均有輸入性登革熱病例的報(bào)道，但近5年尚未有DENV-4型本地病例的報(bào)道。因此，本研究擬通過(guò)對(duì)廣州市2018年報(bào)告的輸入性DENV-4型登革熱病例血清標(biāo)本進(jìn)行分離培養(yǎng)，并進(jìn)一步分析DENV-4其生物學(xué)來(lái)源，從而為本地登革熱的防控提供科學(xué)依據(jù)并累積基線數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1病例及標(biāo)本來(lái)源 本研究所涉及的輸入性登革熱病例標(biāo)本均來(lái)自2018年廣州市各醫(yī)院和區(qū)疾控中心送檢/復(fù)核的輸入性登革熱排查病例血清標(biāo)本，每份標(biāo)本均有獨(dú)立的編號(hào)，并有完整的標(biāo)本信息；標(biāo)本的使用征得患者知情同意并通過(guò)廣州市疾病預(yù)防控制中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)；同時(shí)通過(guò)國(guó)家疾控中心傳染病監(jiān)測(cè)信息報(bào)告系統(tǒng)和廣州市疾控中心實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)收集病例信息。

1.2標(biāo)本初篩和病毒分離 核酸檢測(cè)和病毒分離過(guò)程參考《登革熱診斷標(biāo)準(zhǔn)》(WS 216-2018)，使用QIAamp Viral RNA Mini Kit(QIAGEN)試劑盒對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行核酸提取，進(jìn)而采用DENV通用型和DENV-1～4型核酸檢測(cè)試劑盒(江蘇碩世生物有限公司)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。對(duì)DENV-4核酸陽(yáng)性標(biāo)本在C6/36細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)，傳代3次無(wú)病變者方判定為病毒分離陰性。

1.3病毒基因組測(cè)定 使用QIAamp Viral RNA Mini Kit核酸提取試劑盒(QIAGEN)對(duì)分離株進(jìn)行核酸提取，提取完畢馬上進(jìn)行基因擴(kuò)增。全序列測(cè)定所用到的引物詳見(jiàn)表1[7]。使用SuperScriptTMIII One-Step RT-PCR System with PlatinumTMTaq DNA Polymerase試劑盒(Invitrogen)進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)體系參考說(shuō)明書(shū)，反應(yīng)體系總體積為50 μL。反應(yīng)條件為：55 ℃ 30 min, 94 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s, 58 ℃ 30 s, 68 ℃ 2 min, 40個(gè)循環(huán)；68 ℃ 10 min, 4 ℃ ∞。使用ABI 9700基因擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增，在完成基因擴(kuò)增后，用QIAxcel全自動(dòng)分析系統(tǒng)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析，得到目的片段后進(jìn)行測(cè)序。序列的測(cè)定委托天一輝遠(yuǎn)基因科技公司完成。

1.5序列比對(duì)分析、進(jìn)化樹(shù)重建和重組分析 參考序列均來(lái)自NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov)，一共下載了84條DENV-4型病毒的基因組序列，所選取的參考序列均是DENV-4型病毒在不同年代和不同地區(qū)的代表株，均有明確的分離時(shí)間和地點(diǎn)，并涵蓋了DENV-4型病毒的4個(gè)基因型。用Smart Model Selection(SMS，http://www.atgc-montpellier.fr/sms/)在線工具和貝葉斯信息準(zhǔn)則(Bayesian Information Criterion，BIC)尋找最優(yōu)核酸替換模型和參數(shù)，用PhyML 3.1在線工具(http://www.atgc-montpellier.fr/phyml/)重建進(jìn)化樹(shù)，進(jìn)化樹(shù)的支長(zhǎng)計(jì)算采用貝葉斯檢驗(yàn)(aBayes)的方法[8]。核苷酸和氨基酸序列的差異分析通過(guò)MEGA 6.0軟件(Molecular Evolutionary Genetics Analysis)完成。

表1 DENV-4病毒基因組全序列測(cè)定引物
Tab.1 Primers for DENV-4 full-length sequencing

引物名稱引物序列(5′-3′)方向退火溫度/℃D4-F1TTAGTCTGTGTGGACCGACAAGGACAG正向68D4-R806AATCCTGGGTTTCTGAGTATCCAACTCTC反向66D4-F683AGTGGGGAACGGAGACGAGAGAAG正向68D4-R1406GGGTTATCGTAGCTGTCACTCCGTG反向68D4-F1088GAAGTGGCTCTGTTAAGAACCTATTGCATCGAAGC正向67D4-R1928CATCTCTTATCTCTATGGGAACTTTGCATGG反向66D4-F1642AATGGTGACGTTTAAGGTCCCTCATGC正向66D4-R2370AGAAACAAAGTAATCCCTCCAACAGCTATGC反向66D4-F2195GATTTTGGCTCTGTTGGTGGACTGCTC正向68D4-R3084ATGTGTGGGTCTTGGGCCATAGACATG反向68D4-F2696GTGAAAGGGGTGTTATCCAAAGGCAAGAG正向67D4-R3571GCACAAAGGGTGGTCACCACAACCAATATC反向69D4-F3264GAACAACAGTCACCATTCAAGAGGATTGTGACC正向68D4-R4177CATTCTTTAGAAGGGCGCTTCCCAAG反向66D4-F3917GCCCTTTCCTTGACTTTCATAAAATCAACAATGC正向66D4-R4785GCTAGAACTTGAACGTCTTCTTCTTTATCCC反向66D4-F4464TGGCAATTCCAGTCACAATGACCCTATGG正向67D4-R5314GAACTCTGGTTGATGATAAAAGTCTTGTTGTG反向65D4-F5028GAATTGGCGAACCAGATTATGAAGTGGATG正向66D4-R5852TTGCTGGAGTCACTGGAATAGGACC反向66D4-F5498CAGAGCAATAGCCCAATAGAAGATATCGAGAG正向67D4-R6554GAAGATGCCTGCTGTCATAGCTCCTAG反向68D4-F6400AATTGCCAGTTTGCCAACGTACCTTTCCTC正向67D4-R7458ATGTTAGCTGTGGACACGGCTATAGTCG反向68D4-F7079CTTGGTGTGCCGCTATTAGCAATGGGATGC正向70D4-R7877CATAGGAATCGGTTCTTCATGTCCTGGACC反向69D4-F7700GGATCTAAAATCAAGTATGCAGTGTCCAGAG正向66D4-R8708ACAGTCTGGGATTTTTCTTCTTCCCGAGGAG反向69D4-F8486TCCTTCGACAGGCTCGGCATCCTC正向70D4-R9206AGGGGCCATCTGTTCTGTGATCAGCTCTTC反向70D4-F9105GATACATCCTGGAGGACATAGATAAGAAAGATG正向66D4-R9863AGGCTAAGCGCAGGTCCCTTCTATG反向68D4-F9482GAAAGAGTTGAGAAATGGCTGAAAGAGTGTG正向66D4-R10353GCCTCCCTGGGATTTTTACGCCTCCCG反向68D4-F10247GAAGGAGTTCTGTAATTACCAACAACAAACACC正向66D4-R10716CACGAGGAAGCTGTACTCCTGGTG反向68

2 結(jié) 果

2.1毒株分離情況 對(duì)2018年廣州市輸入性登革熱病例的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)、鑒定，最后分離培養(yǎng)得到DENV-4型毒株5株，毒株編號(hào)和信息如表2所示：

2.2核苷酸與氨基酸同源性比較 將本研究分離到的5株DENV-4型毒株與6株參考株的全基因組序列進(jìn)行核苷酸和氨基酸的同源性分析。結(jié)果顯示，4株由泰國(guó)和柬埔寨輸入的分離株(18XN11706/18XN13312/18XN16107/18XN17096)的核苷酸(氨基酸)同源性為99.2%～99.8%(99.7%～99.9%)，與DENV-4型病毒Sylvatic基因型 (EF457906.1)的核苷酸(氨基酸)同源性為85.9%～86.0%(95.4%～95.5%)；菲律賓輸入的病例分離株(18XN20946)與中南半島來(lái)源的4株分離株核苷酸(氨基酸)同源性為90.8%(96.7%～96.9%)，與菲律賓2014年分離株(KU523871.1)的核苷酸(氨基酸)同源性為98.6%(99.1%)與DENV-4型病毒Sylvatic基因型(EF457906.1)的核苷酸(氨基酸)同源性為86.1%(95.1%)。具體結(jié)果詳見(jiàn)表3。

表2 廣州市2018年輸入型DENV-4毒株信息
Tab.2 Information of imported DENV-4 strains in Guangzhou, 2018

毒株編號(hào)輸入時(shí)間輸入地點(diǎn)基因型GenBank編號(hào)18XN117062018.05泰國(guó)ⅠMK61409318XN133122018.05柬埔寨ⅠMK61409218XN161072018.06柬埔寨ⅠMK61409118XN170962018.06柬埔寨ⅠMK61409018XN209462018.08菲律賓ⅡaMK640208

表3 廣州市2018年輸入型DENV-4毒株與參考株全序列核苷酸和氨基酸同源性比較
Tab.3 Homology comparisons of full-length genomes among reference DENV-4 strains and imported strains in Guangzhou, 2018

序列編號(hào)18XN1170618XN1331218XN1610718XN1709618XN20946AY618988.1AY762085.1EF457906.1JN638572.1KP792537.2KU523871.118XN11706—99.499.299.490.890.091.385.995.898.590.8 18XN1331299.8—99.699.890.890.091.486.095.898.690.8 18XN1610799.799.8—99.790.990.091.386.095.898.590.8 18XN1709699.899.999.9—90.890.091.485.995.898.690.8 18XN2094696.996.896.796.8—90.292.686.191.491.298.6 AY618988.197.197.096.997.097.0—90.786.090.190.290.3 AY762085.197.597.597.397.497.897.3—86.491.791.792.8 EF457906.195.695.595.495.595.195.595.7—86.086.186.0 JN638572.198.498.498.398.396.896.897.295.2—96.291.5 KP792537.299.699.699.499.596.997.297.595.598.5—91.1 KU523871.196.996.896.796.899.197.098.095.096.897.0—

注：表格右上部分為核苷酸同源性比較結(jié)果，左下部分為氨基酸同源性比較結(jié)果。

2.3DENV-4型病毒基因組全序列進(jìn)化樹(shù)重建結(jié)果 通過(guò)SMS模型選擇工具計(jì)算得出最優(yōu)的核酸替換模型為GTR(G+I)模型(General Time Reversible Model)，參數(shù)選擇為G=2.069，I=0.535。進(jìn)化樹(shù)重建結(jié)果如圖1所示。從圖1中可見(jiàn)，4株由泰國(guó)和柬埔寨輸入的分離株(18XN11706/ 18XN13312/ 18XN16107/ 18XN17096)在進(jìn)化上較為接近，屬于DENV-4基因Ⅰ型，在GenBank上同源性最高的序列是KP792537.2(新加坡2011年分離株)；菲律賓輸入的病例分離株(18XN20946)與其他4株親緣性較遠(yuǎn)，屬于DENV-4基因Ⅱa型，在GenBank上同源性最高的序列是KU523871.1(菲律賓2014年分離株)和KC333651.1(廣州市2012年輸入病例分離株)。進(jìn)化樹(shù)的重建結(jié)果詳見(jiàn)圖1。

2.4氨基酸位點(diǎn)差異分析 經(jīng)過(guò)比對(duì)，5株分離株和6株參考株的E蛋白區(qū)域有9個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)差異，NS1蛋白區(qū)域有14個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)差異，NS5蛋白區(qū)域有25個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)差異；4株由泰國(guó)和柬埔寨輸入的分離株(18XN11706/18XN13312/18XN16107/18XN17096)和菲律賓輸入病例的分離株(18XN20946)序列差異較大。具體結(jié)果詳見(jiàn)表4、表5和表6。

注：紅色序列為廣州市2018年分離株，黑框內(nèi)標(biāo)注為輸入地和輸入時(shí)間。圖1 廣州市2018年DENV-4分離株基因組全序列進(jìn)化樹(shù)重建結(jié)果Fig.1 Phylogenetic tree based on full-length genomes of 5 imported DENV-4 strains isolated in Guangzhou, 2018

表4 廣州市2018年輸入型DENV-4毒株與參考株E蛋白氨基酸差異位點(diǎn)比較
Tab.4 Amino acid substitutions in E gene region among reference DENV-4 strains and 5 imported strains in Guangzhou, 2018

序列編號(hào)位點(diǎn)468112016032938442947849418XN11706IYSETDLSH18XN13312IYSETDLSH18XN16107IYSETDLSH18XN17096IYSETDLSH18XN20946TFLVAEFTQAY618988.1IYSVTDFTQAY762085.1TYSVANFTQEF457906.1IYSVTDFSQJN638572.1IYSVTDLSHKP792537.2IYSETDLSRKU523871.1TYSVAEFTQ

表5 廣州市2018年輸入型DENV-4毒株與參考株NS1蛋白氨基酸差異位點(diǎn)比較
Tab.5 Amino acid substitutions in NS1 gene region among reference DENV-4 strains and 5 imported strains in Guangzhou, 2018

序列編號(hào)位點(diǎn)5?9?229098105128135153246251286288351?18XN11706ASIASATVLAITQS18XN13312ASIASATVLAITQS18XN16107ASITSATVLAITQS18XN17096ASIASATVLAITQS18XN20946VNVATTAIFSFARTAY618988.1VTTAVTAILAFTQSAY762085.1VSAATTAILSFTQTEF457906.1VSITTAAILTSTQAJN638572.1VSIASATVLAITQSKP792537.2ASIASATVLAITQSKU523871.1VSVATTAIFSFART

注：*該差異位點(diǎn)位于抗原表位區(qū)域

3 討 論

廣州市地處亞熱帶地區(qū)，人口超過(guò)1 000萬(wàn)，白紋伊蚊分布廣泛；每年的4月份至9月份是廣州的雨季，平均氣溫在20 ℃以上，濕熱多雨的氣候條件為伊蚊的繁殖生長(zhǎng)提供了良好的場(chǎng)所，為登革熱的傳播創(chuàng)造了理想的條件，因此每年的8月份至10月份通常是廣州地區(qū)登革熱流行的高峰期。衛(wèi)生死角難以清理，蚊媒密度居高不下，越冬蚊蟲(chóng)無(wú)法追蹤，是廣州市登革熱防控的難題[6]。

DENV的4個(gè)血清型在東南亞地區(qū)常年流行，四季不斷，交替循環(huán)[9-10]；近年來(lái)，隨著旅游業(yè)的發(fā)展和國(guó)際貿(mào)易的日益頻繁，廣州市與周邊地區(qū)特別是東南亞地區(qū)的往來(lái)日益密切，口岸檢疫部門(mén)每年都有在歸國(guó)人員和外國(guó)入境者中檢出DENV陽(yáng)性者[11]。稍有不慎，輸入型病例攜帶的DENV極易在本地引起暴發(fā)甚至流行。以2014年為例，東南亞地區(qū)來(lái)源的DENV-1型病毒的基因Ⅴ型輸入病例在廣州市引發(fā)了本地大流行，建國(guó)以來(lái)規(guī)模最大的一次城市登革熱暴發(fā)疫情，病例數(shù)達(dá)到37 340例[6]，DENV-1病毒在廣州逐漸呈現(xiàn)本地化的趨勢(shì)；此外，2016年之后，DENV-2型病毒本地感染病例的比例逐漸升高；此外，近5年來(lái)廣州市尚未有DENV-3/4引起本地病例的報(bào)道。部分暴發(fā)街區(qū)同時(shí)出現(xiàn)了DENV-1和DENV-2型病毒的流行，由于ADE效應(yīng)的存在，這些街區(qū)如果發(fā)生2種以上血清型的暴發(fā)流行，有極高的概率出現(xiàn)重癥登革熱病例，使得原本非常嚴(yán)峻的登革熱防控變得更加復(fù)雜[12]。

表6 廣州市2018年輸入型DENV-4毒株與參考株NS5蛋白氨基酸差異位點(diǎn)比較
Tab.6 Amino acid substitutions in NS5 gene region among reference DENV-4 strains and 5 imported strains in Guangzhou, 2018

序列編號(hào)位點(diǎn)535920122423525626727629633433537237318XN11706YTHVTATIHMVVV18XN13312YTHVTATIHMVVV18XN16107YTHVTATIHMVVV18XN17096YTHVTATIHMVVV18XN20946HSYAIVIVQVIMIAY618988.1HSHATVTIQVIVVAY762085.1HSHATVTIQVIMVEF457906.1HSYAVVTVQVIVVJN638572.1HSYVTATIHVVVVKP792537.2YTHVTATIHVVVVKU523871.1HSHAIVTIQVVMI序列編號(hào)位點(diǎn)52552656358663163263564264382689389418XN11706KDIRREHEKIHF18XN13312KDIRREHEKIHF18XN16107KDIRREHGKIHF18XN17096KDIRREHEKIHF18XN20946QETKQDQERTPSAY618988.1KDIKQDQERTLSAY762085.1KDIRQDQERTPSEF457906.1KEIKQDQEKTPLJN638572.1KDVKRDHERTPSKP792537.2KDIKRDHERIHFKU523871.1KDTKQDQERTPS

DENV-4型病毒根據(jù)演化路徑的不同，可分為Sylvatic、Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ一共4個(gè)基因型，其中Ⅱ型又可繼續(xù)分為Ⅱa和Ⅱb 2個(gè)分支。在全球范圍內(nèi)，該型別報(bào)道較多的2個(gè)地區(qū)是東南亞地區(qū)和南美洲，這2個(gè)地區(qū)地處熱帶，都是登革熱流行最為嚴(yán)重的地區(qū)，4種血清型的DENV常年交替流行[13]。在我國(guó)，DENV-4型病毒僅在云南邊境有過(guò)本地流行的報(bào)道，輸入來(lái)源均是緬甸[14]；此外，在2010年，DENV-4輸入病例曾經(jīng)在廣州地區(qū)引起過(guò)暴發(fā)疫情，輸入來(lái)源是泰國(guó)[15]。

本研究中分離到的5株DENV-4型病毒均來(lái)自輸入病例，通過(guò)同源性分析和進(jìn)化樹(shù)重建可見(jiàn)4株中南半島輸入的分離株屬于DENV-4基因Ⅰ型，菲律賓輸入的病例分離株屬于DENV-4基因Ⅱa型，在進(jìn)化上分屬于不同的種群，這一結(jié)論與上述病例的流行病學(xué)資料是相吻合的。

DENV包膜蛋白(Envelop, E)基因共編碼495個(gè)氨基酸殘基，該蛋白包含3個(gè)結(jié)構(gòu)域(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ)，與病毒的受體結(jié)合、免疫應(yīng)答、親嗜性和相關(guān)病理?yè)p傷高度相關(guān)[16]。本研究分離到的5株DENV-4型毒株在E蛋白結(jié)構(gòu)上共發(fā)現(xiàn)了9處氨基酸位點(diǎn)突變，均不涉及3個(gè)結(jié)構(gòu)域，提示DENV-4型毒株的E蛋白結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定。

DENV NS1基因編碼352個(gè)氨基酸殘基，在宿主體內(nèi)有2種存在形式，即二聚體的膜型NS1和六聚體的分泌型NS1[17]。NS1蛋白是DENV感染的標(biāo)志性抗原，在急性期患者的血清中可幾乎全程檢出，對(duì)病例的早期診斷具有重要的指導(dǎo)意義。此外，該蛋白可影響病毒RNA復(fù)制、免疫逃逸、宿主凝血功能和血管內(nèi)皮損傷過(guò)程。本研究分離的5株DENV-4型毒株在NS1蛋白結(jié)構(gòu)上共有14處氨基酸位點(diǎn)突變，有3處位于抗原表位區(qū)域(A5V，S9N，S351T)，其中S9N位于FR-I亞區(qū)，該變異可能影響NS1蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致病毒NS1蛋白無(wú)法形成膜型的二聚體，從而影響宿主保護(hù)性抗體的產(chǎn)生，進(jìn)一步加速病毒的暴發(fā)流行。

DENV NS5基因臨近3′端，是病毒編碼區(qū)最長(zhǎng)和最保守的區(qū)域，其編碼的NS5蛋白是病毒基因組編碼的最大蛋白(約900個(gè)氨基酸殘基)，同時(shí)具有甲基轉(zhuǎn)移酶(methyltransferase, MTase)、核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(terminal nucleotide transferase, TNTase)和RNA依賴性RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase, RdRp)活性，是病毒復(fù)制過(guò)程的關(guān)鍵[18]。本研究分離的5株DENV-4型毒株在NS5蛋白結(jié)構(gòu)上共有25處氨基酸位點(diǎn)突變，其中6處位于該蛋白N端(1-265號(hào)氨基酸殘基)，主要影響MTase活性；18處位于該蛋白C端(272-900號(hào)氨基酸殘基)，主要影響TNTase和RdRp活性。

DENV遍布全球熱帶亞熱帶地區(qū)，每個(gè)地區(qū)的DENV都有其獨(dú)特的演化路徑和基因特征。以往的監(jiān)測(cè)活動(dòng)往往忽略了輸入性毒株，在本地病例發(fā)生的時(shí)候無(wú)法追溯到相應(yīng)的輸入來(lái)源，從而導(dǎo)致流行病學(xué)調(diào)查信息與分子流行病學(xué)溯源不一致的情況。本研究對(duì)廣州地區(qū)輸入性DENV-4型毒株進(jìn)行全基因組測(cè)定，間接掌握周邊國(guó)家地區(qū)DENV-4的基因特征，為本地登革熱的防控提供基線數(shù)據(jù)，具有重要的公共衛(wèi)生意義。

利益沖突：無(wú)