針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)腦卒中肢體痙攣大鼠腦組織海馬γ-氨基丁酸a型受體和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)的影響

黃麟荇　王彭漢　郭斌　謝志強(qiáng)　謝莉娜　劉未艾　易麗貞　劉欣　岳增輝

摘要：目的 ?觀察針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)腦卒中肢體痙攣大鼠腦組織海馬γ-氨基丁酸a型受體（GABAa）和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）表達(dá)的影響，探究針?biāo)幗Y(jié)合治療腦卒中后肢體痙攣的作用機(jī)制。方法 ?采用中動(dòng)脈線栓結(jié)合內(nèi)囊注射NMDA受體制作腦卒中肢體痙攣大鼠模型。45只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為模型組、針?biāo)幗Y(jié)合組（針刺陽(yáng)陵泉、曲池+加味芍藥甘草湯水煎劑灌胃）、西藥組（巴氯芬溶液灌胃）、空白組（不做任何處理）和假手術(shù)組（干預(yù)同模型組，只分離不結(jié)扎不插線）。各治療組大鼠成模后第1日開始干預(yù)，連續(xù)5 d。采用RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)大鼠腦組織海馬BDNF、GABAa mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果? 與空白組比較，假手術(shù)組大鼠神經(jīng)功能、肌張力評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），模型組大鼠神經(jīng)功能和肌張力評(píng)分明顯增加（P<0.01）;與模型組比較，西藥組和針?biāo)幗Y(jié)合組大鼠神經(jīng)功能、肌張力評(píng)分明顯降低（P<0.05），BDNF、GABAa mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高（P<0.01）;與西藥組比較，針?biāo)幗Y(jié)合組變化不明顯（P>0.05）。結(jié)論 ?針?biāo)幗Y(jié)合可改善模型大鼠神經(jīng)功能，保護(hù)神經(jīng)損傷，緩解卒中后肢體痙攣，其機(jī)制可能與上調(diào)模型大鼠腦組織海馬中GABAa、BDNF mRNA和蛋白的表達(dá)相關(guān)。

關(guān)鍵詞：針?biāo)幗Y(jié)合;腦卒中肢體痙攣;腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子;γ-氨基丁酸a型受體;大鼠

中圖分類號(hào)：R245;285.5 ???文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A??? 文章編號(hào)：1005-5304（2020）01-0045-06

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.201905020

Effects of Acupuncture Combined with Medicine on Expressions of γ-aminobutyric Acid Type a Receptor and Brain-derived Neurotrophic Factor in Hippocampus of Rats withLimb Spasm Caused by Cerebral Stroke

HUANG Linxing¹， WANG Penghan¹， GUO Bin¹， XIE Zhiqiang¹， XIE Lina¹， LIU Weiai²，YI Lizhen¹， LIU Xin¹， YUE Zenghui¹

1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410208， China;2. The Second Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410005， China

Abstract： Objective To analyze the effects of acupuncture combined with medicine on the expressions of γ-aminobutyric acid type a receptor （GABAa） and brain-derived neurotrophic factor （BDNF） in hippocampus of rats with limb spasm caused by cerebral stroke; To explore the mechanism of acupuncture combined with medicine for limb spasm caused by cerebral stroke. Methods A rat model with limb spasm caused by cerebral stroke was made by injecting NMDA receptor into the middle capsule with a middle artery suture. Totally 45 SD rats were randomly divided into model group， acupuncture-medicine combination group （acupuncture on Yanglingquan and Quchi + modified Shaoyao Gancao Decoction for gavage）， Western medicine group （baclofen solution for gavage）， blank group （without any intervention） and sham-operation group （the same intervention as the model group， only being separated without ligation without plugging）. Each administration group was intervened on the first day after the successful establishment of the model， and continued for 5 days. The expressions of BDNF， GABAa mRNA and protein in hippocampus of rats were detected by Western blot and RT-PCR， respectively. Results Compared with the

blank group， there was no statistical significance in nerve function and muscle tension in the sham-operation group （P>0.05）， but the scores of nerve function and muscle tension in the model group increased significantly （P<0.01）. Compared with the model group， the scores of nerve function and muscle tension in the Western medicine group and acupuncture-medicine combination group decreased significantly （P<0.05）， but the expressions of BDNF， GABAa mRNA and protein increased significantly （P<0.01）. Compared with the Western medicine group， the changes of the acupuncture-medicine combination group were not obvious （P>0.05）. Conclusion Acupuncture combined with medicine can improve neurological function in rats， protect nerve injury and relieve limb spasm caused by cerebral stroke. The mechanism may be related to the up-regulation of expressions of GABAa and BDNF mRNA and protein in hippocampus of model rats.

Keywords： acupuncture-medicine combination; limb spasm caused by cerebral stroke; brain-derived neurotrophic factor; γ-aminobutyric acid type a receptor; rats

腦卒中因其有發(fā)病率、死亡率、致殘率、復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)，已成為嚴(yán)重危害人類健康的疾病^[1]。隨著醫(yī)療水平的提高，其病死率明顯下降，但致殘率仍居高不下^[2]。相關(guān)資料顯示，約4/5腦卒中偏癱患者會(huì)出現(xiàn)不同程度肢體痙攣^[3]，嚴(yán)重影響肢體運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。針?biāo)幗Y(jié)合療法是臨床治療腦卒中后肢體痙攣狀態(tài)的有效手段。研究表明，針?biāo)幗Y(jié)合能有效降低肌張力、改善肢體運(yùn)動(dòng)功能、提高日?；顒?dòng)能力^[4-6]。課題組前期臨床研究顯示，經(jīng)筋刺法結(jié)合加味芍藥甘草湯能更好地緩解腦卒中后偏癱患者的肌肢體痙攣^[7]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸（GABA）影響卒中后痙攣的形成和加強(qiáng)，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最重要的抑制性物質(zhì)^[8]，其與γ-氨基丁酸a型受體（GABAa）在突觸后膜相結(jié)合，抑制過度神經(jīng)元放電，從而防止痙攣的發(fā)生^[9]。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）作為神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中的關(guān)鍵信號(hào)分子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)廣泛分布，是在腦內(nèi)合成的一種小分子堿性蛋白，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育非常重要。其參與GABA能神經(jīng)元可塑性的調(diào)節(jié)，對(duì)GABA能神經(jīng)元的可塑性起著關(guān)鍵作用^[10]。因此，本實(shí)驗(yàn)觀察電針結(jié)合加味芍藥湯對(duì)腦卒中后肢體痙攣大鼠海馬區(qū)GABAa和BDNF表達(dá)的影響，探究其緩解肢體痙攣狀態(tài)的可能作用機(jī)制，為臨床治療提供依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 動(dòng)物及分組

SPF級(jí)雄性SD大鼠45只，體質(zhì)量（240±30）g，湖南中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（湘）2016-0002，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)43004700044333。飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室中心清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)房，室溫20～25 ℃，相對(duì)濕度50%～70%，通風(fēng)良好，普通飼料喂養(yǎng)。動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后編號(hào)，將45只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表分為空白組、假手術(shù)組、模型組、西藥組和針?biāo)幗Y(jié)合組，每組9只。

1.2? 藥物

加味芍藥甘草湯（白芍30 g，甘草10 g，炙黃芪 30 g，當(dāng)歸15 g，川芎15 g，地龍10 g，雞血藤15 g，木瓜10 g，桑枝30 g，伸筋草10 g，山萸肉10 g，枸杞子10 g），飲片購(gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院中藥房，按比例配方取藥，蒸餾水浸泡1 h，繼以武火急煎至沸騰，再以文火煎煮2 h，取汁后以紗布過濾，藥渣再加蒸餾水文火煎煮1 h，過濾取汁。合并2次藥汁，濃縮至含原藥材10 g/mL，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。巴氯芬片，福安藥業(yè)集團(tuán)寧波天衡制藥有限公司，批號(hào)180503C01，10 mg/片，研成細(xì)粉末，溶于蒸餾水，配制成0.27 mg/mL溶液備用。

1.3? 主要試劑與儀器

NMDA受體（武漢華聯(lián)科生物技術(shù)有限公司），Rabbit bs-1232R GABA A Receptor alpha 1（Bioss），Rabbit ab108319 BDNF（Abcam）。大鼠腦立體定位儀（日本成茂公司，SN-2），牙科鉆（南京金恒川電子有限公司，MF4G），離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf，Centrifuge5424R），LRH-150 37 ℃恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒），電泳儀（BIO-RAD，miniprotean3cell），酶標(biāo)儀（芬蘭雷勃，MK3），微量移液槍（美國(guó)RaininPiPet-Lite），JY045-3C凝膠成像系統(tǒng)（北京君意），電針儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司，SDZ-V），華佗牌0.3 mm×13 mm一次性針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）。

1.4? 造模

采用改良中動(dòng)脈線栓法結(jié)合內(nèi)囊注射NMDA受體制作腦卒中肢體痙攣大鼠模型^[11]。腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉，備皮、消毒、鋪巾、鈍性分離，結(jié)扎頸外動(dòng)脈（ECA）近心端、頸總動(dòng)脈（CCA）遠(yuǎn)心端，動(dòng)脈夾夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA），插線，完畢后將ICA近心端和栓線一起結(jié)扎，縫合切口。將Zea Longa評(píng)分^[12]1～3分大鼠第2日再行內(nèi)囊注射NMDA受體^[13]。將麻醉成功大鼠固定于腦立體定位儀上，行常規(guī)備皮、消毒、鋪巾，沿顱頂矢狀縫作縱行切口，暴露右側(cè)頂骨和額骨交界骨縫，按《大鼠腦立體定位圖譜》^[14]確定內(nèi)囊位置，用牙科鉆鉆取小孔，緩慢注射5 μL NMDA，持續(xù)5 min，注射完畢拔出微量注射器，壓迫止血并消毒，縫合。術(shù)后均予以青霉素抗感染;腹腔注射速尿，防止腦水腫。大鼠蘇醒后，Zea Longa評(píng)分^[12]1～3分，Ashworth肌張力評(píng)分^[15]≥1分，表明腦卒中后肢體痙攣模型成功。

1.5? 干預(yù)

模型組大鼠單籠飼養(yǎng)，飼料喂養(yǎng)，投喂葡萄糖水，青霉素肌注，共4 d;假手術(shù)組同模型組，只分離不結(jié)扎也不插線;西藥組將制備好的巴氯芬水溶液按成人量換算成動(dòng)物劑量，給藥體積為1 mL/100 g體質(zhì)量，1次/d，連續(xù)5 d;假手術(shù)組和模型組均灌服等量生理鹽水，1次/d，連續(xù)5 d;針?biāo)幗Y(jié)合組大鼠針刺陽(yáng)陵泉、曲池，并予加味芍藥甘草湯水煎劑灌胃。電針取雙側(cè)曲池、陽(yáng)陵泉，穴位定位參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》^[16]，并結(jié)合解剖學(xué)方法進(jìn)行大鼠穴位定位。陽(yáng)陵泉：距足三里（膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨小頭下約5 mm處）上外側(cè)5 mm，直刺6 mm。曲池：橈骨近端關(guān)節(jié)外側(cè)前方的凹陷中，直刺4 mm。將大鼠固定于鼠板上，消毒，采用華佗牌0.3 mm×13 mm一次性針灸針，捻轉(zhuǎn)角度90～180°，頻率60～90次/min，持續(xù)1 min，針后選用SDZ-V電針治療儀，密波，頻率100 Hz，以大鼠肢體輕微抖動(dòng)為度。將制備好的加味芍藥甘草湯水煎液溫?zé)幔瑒┝堪凑粘扇肆繐Q算成動(dòng)物劑量，灌胃體積為1 mL/100 g體質(zhì)量，先行加味芍藥甘草湯灌服;再行電針治療，每次30 min，均每日1次，連續(xù)5 d。

1.6? 行為學(xué)檢測(cè)

1.6.1? 大鼠神經(jīng)功能評(píng)分

參照Z(yǔ)ea Longa評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)^[12]進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分：0分為無神經(jīng)損傷癥狀;1分為不能完全伸展手術(shù)對(duì)側(cè)前爪或后爪;2分為行走時(shí)向手術(shù)對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈;3分為行走時(shí)向手術(shù)對(duì)側(cè)傾倒;4分為不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失。分別在造模后及治療結(jié)束后各評(píng)分1次。

1.6.2? 大鼠肌張力評(píng)分

根據(jù)改良人類Ashworth肌張力評(píng)分法^[15]，對(duì)大鼠綜合肌張力進(jìn)行評(píng)分。0級(jí)：無肌張力增加，大鼠活動(dòng)自如;1級(jí)：輕微增加，抓握中被動(dòng)屈伸至最后有小的阻力;1⁺級(jí)：輕度增加，抓握至一半關(guān)節(jié)活動(dòng)度（ROM）以上有輕度阻力增加;2級(jí)：肌張力在大部分ROM中均有較大增加，但肢體被動(dòng)運(yùn)動(dòng)容易;3級(jí)：肌張力明顯增加，被動(dòng)活動(dòng)困難;4級(jí)：受累部分肢體強(qiáng)直性屈曲或伸直。將0、1、1⁺、2、3、4級(jí)分別記為0～5分，分?jǐn)?shù)越高說明肌張力越差。分別在造模后及治療結(jié)束各評(píng)分1次。

1.7? 取材

大鼠行為學(xué)檢測(cè)結(jié)束后，采集標(biāo)本。斷頭處死大鼠，冰臺(tái)上快速取大腦海馬組織放入凍存管，放入液氮降溫1 d，置于-80 ℃環(huán)境凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.8? RT-PCR檢測(cè)大鼠腦組織海馬區(qū)γ-氨基丁酸a型受體和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子mRNA表達(dá)

采用Trizol一步法提取總RNA，獲得RNA溶液，置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。RNA中DNA消除：37 ℃，30 min;Hold，加1 μL EDTA;65 ℃，10 min。總RNA中DNase1消除：將反應(yīng)液加入與其等量的苯酚/氯仿/異戊醇，充分混勻，適量DEPC-H₂O溶解，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。反應(yīng)條件：42 ℃，60 min;70 ℃，15 min;16 ℃，循環(huán);反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物置于-20 ℃保存?zhèn)溆?。將制備好cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)程序：95 ℃、3 min，95 ℃、5 s，56 ℃、10 s，72 ℃、25 s，39個(gè)循環(huán);65 ℃、5 s，95 ℃、50 s。計(jì)算ΔCt值，以2^-ΔΔCt分析各基因相對(duì)表達(dá)量。以β-actin作為內(nèi)參基因，引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成，詳見表1。

1.9? Western blot檢測(cè)大鼠腦組織海馬區(qū)γ-氨基丁酸a型受體和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子蛋白表達(dá)

將組織剪成細(xì)小的碎片，每20 mg組織加150～250 μL裂解液，勻漿直至完全裂解。裂解后4 ℃、12 000×g離心15 min，取上清液，進(jìn)行蛋白質(zhì)定量后貯存于-80 ℃冰箱，根據(jù)目的蛋白的分子量選擇不同的凝膠濃度（6%、12%），再根據(jù)蛋白定量結(jié)果取所需蛋白加入適量上樣緩沖液，沸水浴10 min 使蛋白變性，離心，取上清液上樣。將配制好的PAGE膠放入電泳槽中，加入適量電泳緩沖液，轉(zhuǎn)膜。室溫封閉2 h后加入一抗和膜，室溫孵育1 h，膜用PBST洗滌3次×5 min。隨后根據(jù)用量，按1∶10 000稀釋HRP標(biāo)記二抗，與膜室溫孵育1 h。PBST洗3次×5 min，顯色后通過TANON GIS軟件讀取相關(guān)條帶灰度值。

1.10? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料用樣本含量、±s或n、M（QR）表示，所有數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)。滿足正態(tài)性及方差齊性時(shí)，組內(nèi)治療前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間比較采用方差分析，不滿足正態(tài)性或方差齊性，則采用非參數(shù)檢驗(yàn);多組間比較采用方差分析，方差齊用LSD法，方差不齊用Dunnett'T3法;不滿足正態(tài)性選擇秩和檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果

2.1.1? 大鼠神經(jīng)功能評(píng)分結(jié)果

與空白組比較，假手術(shù)組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分無明顯差異（P>0.05），模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示造模成功;與模型組比較，西藥組和針?biāo)幗Y(jié)合組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)果見表2。

2.1.2? 大鼠Ashworth評(píng)分結(jié)果

與空白組比較，假手術(shù)組大鼠Ashworth評(píng)分無明顯差異（P>0.05），模型組評(píng)分明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示造模成功;與模型組比較，西藥組、針?biāo)幗Y(jié)合組大鼠Ashworth評(píng)分明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)果見表3。

2.2? 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)模型大鼠海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和γ-氨基丁酸a型受體mRNA表達(dá)的影響

與空白組、假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬BDNF、GABAa mRNA表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與模型組比較，西藥組、針?biāo)幗Y(jié)合組大鼠海馬BDNF、GABAa mRNA表達(dá)均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與西藥組比較，針?biāo)幗Y(jié)合組大鼠海馬BDNF、GABAa mRNA表達(dá)變化不明顯（P>0.05）。結(jié)果見表4。

2.3? 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)模型大鼠海馬大鼠海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和γ-氨基丁酸a型受體蛋白表達(dá)的影響

與空白組、假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬BDNF、GABAa蛋白表達(dá)均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與模型組比較，西藥組、針?biāo)幗Y(jié)合組大鼠海馬BDNF、GABAa蛋白表達(dá)均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與西藥組比較，針?biāo)幗Y(jié)合組大鼠海馬BDNF、GABAa蛋白表達(dá)變化不明顯（P>0.05）。見表5、圖1。

3? 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，中風(fēng)后肢體痙攣多由陰虛血少或蹺脈病變所致，如《景岳全書》：“其病在血液，血液枯燥，所以痙攣”“凡屬陰虛血少之輩，不能營(yíng)養(yǎng)筋脈，以致搐攣僵仆者，皆是此證，如中風(fēng)之有此者，總屬陰虛證?！薄峨y經(jīng)·二十九難》“陰蹺為病，陽(yáng)緩而陰急;陽(yáng)蹺為病，陰緩而陽(yáng)急”，其病位在筋;臨床表現(xiàn)筋肉拘急、屈伸不利，應(yīng)歸屬于十二經(jīng)筋的病候，而非十二正經(jīng)的病候;治法為祛邪扶正、舒筋緩急^[17]。陽(yáng)陵泉是足少陽(yáng)膽經(jīng)合穴，為八會(huì)穴之筋會(huì)，《針灸聚英》：“主膝伸不得屈，骸樞膝骨冷痹，腳氣，膝股內(nèi)外廉不仁，偏風(fēng)半身不遂，腳冷無血色，苦嗌中介然，頭面腫，足筋攣。”陽(yáng)陵泉是治手足拘攣、抽搐轉(zhuǎn)筋常用穴位，是治療全身筋病要穴。曲池為多氣多血的手陽(yáng)明經(jīng)合穴，位于肘部，《針灸大成·卷六》言其：“主繞踝風(fēng)，手臂紅腫，肘中痛，偏風(fēng)半身不遂”，故曲池具有通經(jīng)絡(luò)、調(diào)氣血、祛利關(guān)節(jié)、止痹痛之功?！秱摗吩疲骸耙拱腙?yáng)氣還，兩足當(dāng)溫，脛尚微拘急，重與芍藥甘草湯，爾乃脛伸?！鄙炙幐什轀珵橹委煛白惘d急，不得伸”的名方，功專滋陰補(bǔ)肝、養(yǎng)血柔筋、緩急止痙，用于傷寒后誤汗亡陽(yáng)、陽(yáng)復(fù)而筋脈攣急之證。因此，針刺陽(yáng)陵泉、曲池結(jié)合加味芍藥甘草湯能更好緩解腦卒中后肢體痙攣狀態(tài)以促進(jìn)腦卒中患者的康復(fù)，提高患者生存質(zhì)量。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腦卒中后中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA減少或興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸（Glu）增加都會(huì)導(dǎo)致痙攣^[18]。GABA作為抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的代表，由腦組織內(nèi)的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Glu在谷氨酸脫羧酶的作用下脫去羧基形成^[19];Glu和GABA介導(dǎo)的興奮性突觸傳遞和抑制性突觸傳遞是維持神經(jīng)系統(tǒng)興奮/抑制平衡的重要基礎(chǔ)^[20]。其中GABAa受體是主要介導(dǎo)GABA導(dǎo)致的快速抑制性突觸傳遞的受體^[21];GABA與GABAa受體結(jié)合后，可引起突觸后膜GABAa通道開放，Cl^-電導(dǎo)增加，又因?yàn)榇蠖鄶?shù)情況下胞內(nèi)Cl^-低于胞外，所以Cl^-內(nèi)流，導(dǎo)致突觸后膜超極化，產(chǎn)生快速抑制性突觸后電位，抑制神經(jīng)元放電，產(chǎn)生突觸后抑制效應(yīng)^[22]。BDNF作為神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中的關(guān)鍵信號(hào)分子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中對(duì)促進(jìn)神經(jīng)元的存活至關(guān)重要^[23]。它與GABA相互調(diào)節(jié)：GABA可以促進(jìn)BDNF的轉(zhuǎn)運(yùn)和表達(dá)水平^[24]，BDNF也可以促進(jìn)海馬GABA的轉(zhuǎn)錄活性^[25]。研究發(fā)現(xiàn)，BDNF參與GABA能神經(jīng)元可塑性的調(diào)節(jié)，BDNF對(duì)GABA能神經(jīng)元的可塑性起著關(guān)鍵作用^[26];并且BDNF參與調(diào)節(jié)Glu和GABA能突觸的突觸后神經(jīng)遞質(zhì)受體的數(shù)量與分布^[27]。

研究顯示，針刺可通過升高GABA含量或增加GABA受體的表達(dá)，抑制肢體痙攣狀態(tài);也可通過升高卒中后肢體痙攣狀態(tài)大鼠血清BDNF含量，并促進(jìn)受損神經(jīng)的修復(fù)，緩解肢體痙攣狀態(tài)^[17，28-30]。但關(guān)于針?biāo)幗Y(jié)合治療腦卒中后肢體痙攣?zhàn)饔脵C(jī)制研究鮮有報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，針?biāo)幗Y(jié)合不僅可通過升高GABAa mRNA和蛋白的表達(dá)，產(chǎn)生突觸前和突觸后的抑制作用，而且可通過上調(diào)腦組織海馬中BDNF mRNA和蛋白的表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，保護(hù)神經(jīng)損傷，兩者相互調(diào)節(jié)能更好地促進(jìn)神經(jīng)功能發(fā)育和再生，緩解卒中后肢體痙攣。因此，針?biāo)幗Y(jié)合防治腦卒中后肢體痙攣狀態(tài)的機(jī)制可能是通過上調(diào)腦組織海馬BDNF、GABAa mRNA和蛋白表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的，這為臨床上治療腦卒中后肢體痙攣提供了理論依據(jù)。

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（收稿日期：2019-05-03）

（修回日期：2019-06-20;編輯：華強(qiáng)）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81673886）;湖南省自然科學(xué)基金（2018JJ2294）;湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目（201828）;湖南省研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目（CX2018B488）

通訊作者：岳增輝，E-mail：624755064@qq.com