免疫組化p16、Ki-67應用 在宮頸上皮內(nèi)瘤變病理診斷中的有效性及價值

劉銀霞

（東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院鎮(zhèn)江醫(yī)療區(qū)，江蘇 鎮(zhèn)江 212000）

宮頸癌發(fā)生發(fā)展經(jīng)歷宮頸單純增生鱗化、CIN及宮頸浸潤癌，而對宮頸癌的預防及盡早治療應盡早發(fā)現(xiàn)及明確發(fā)生發(fā)展程度，尤其準確鑒別CIN與宮頸癌，改善預后[1]。目前CIN病理診斷以宮頸活檢應用普遍，但該種方法可能受到上皮組織不完整、病變累及腺體等因素影響，難以準確檢出，而且與出現(xiàn)CINⅠ，CINⅡ與良性病變誤診問題[2]。如今免疫組化技術(shù)在宮頸病變診斷中受到重視，但是否可作為檢出CIN及宮頸癌的可靠依據(jù)需深入研究。為此，本次研究對免疫組化p16、Ki-67應用在宮頸上皮內(nèi)瘤變病理診斷中的有效性及價值進行了探討，選擇本院于2016年2月至2020年2月期間收治的不同級別的宮頸病變患者205例作為研究資料，詳細報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院于2016年2月至2020年2月期間收治的宮頸單純增生鱗化48例，尖銳濕疣12例，CINⅠ51例，CINⅡ35例，CINⅢ34例，宮頸浸潤性鱗癌25例作為研究資料，均經(jīng)診液基薄層細胞學檢測異常，并經(jīng)陰道鏡及宮頸活檢確診，共205例患者，年齡25歲至64歲，平均年齡（39.85±4.06）歲。

1.2 治療方法

205 例患者均接受陰道鏡下活檢及病理切片檢查，均由兩名資深醫(yī)師和技師完成切片、制片及閱片?；顧z病變采取石蠟包埋切片，厚度為4μm，常規(guī)HE染色、p16及Ki-67免疫組化染色，采取枸櫞酸鹽緩沖液和高壓鍋加熱修復法進行抗原修復，采用二步法檢測，選擇二步法免疫組化試劑盒及DAB顯色劑，均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，嚴格按照規(guī)范標準及說明書進行檢測，包含鼠抗 人p16INK4A蛋白單克隆抗體、鼠抗人Ki-67單克隆抗體，均設立陽性對照和陰性對照，PBS代替一抗為陰性對照。

1.3 觀察指標

陽性判斷標準[3]：p16為細胞核和細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒；Ki-67為細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒。p16表達強度以宮頸鱗狀上皮陽性細胞分布程度判斷：-為無，+為＜1/3， ++為1/3-2/3，+++為＞2/3或全層；Ki-67表達強度以陽性細胞數(shù)占技術(shù)細胞綜述百分率判斷：-為0，+為＜10%， ++為10%-50%，+++為＞50%。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用統(tǒng)計學軟件SPSS17.0進行處理，計數(shù)資料以%表述，采用卡方檢驗，當P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同疾病的p16及Ki-67檢測結(jié)果陽性率比較

分析表1可知，宮頸浸潤性鱗癌及CINⅠ-Ⅲp16及Ki-67檢測結(jié)果陽性率均顯著高于宮頸單純增生鱗化、尖銳濕疣，P＜0.05。

表1 不同疾病的p16及Ki-67檢測結(jié)果陽性率比較（%）

2.2 不同疾病的p16表達強度比較

分析表2可知，p16表達強度中宮頸單純增生鱗化無陽性，尖銳濕疣以陰性91.67%為主，CINⅠ-Ⅲ及宮頸浸潤性鱗癌以陽性為主，且級別越高，表達強度越高，各級別比較差異顯著，P＜0.05。其中p16++++陽性細胞如圖1所示。

2.3 不同疾病的Ki-67表達強度比較

分析表3可知，Ki-67表達強度中宮頸單純增生鱗化及尖銳濕疣以陰性97.83%、83.33%為主，CINⅠ-Ⅲ及宮頸浸潤性鱗癌以陽性為主，且級別越高，表達強度越高，各級別比較差異顯著，P＜0.05。Ki-67+++陽性細胞分布如圖2所示。

表2 不同疾病的p16表達強度比較（%）

表3 不同疾病的Ki-67表達強度比較（%）

3 討論

宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）屬于常見的婦科疾病，是指子宮頸上皮被不同程度異型性的細胞取代，可依據(jù)病變程度分為CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ三個級別[4]。臨床認為人類乳頭狀瘤病毒、性生活紊亂、多產(chǎn)均為CIN的高危發(fā)病因素，發(fā)病后多無典型癥狀，部分患者出現(xiàn)陰道排液增多、性出血等，很容易被忽視，但由于宮頸上皮內(nèi)瘤病變?yōu)閷m頸癌延誤治療時機。為準確鑒別宮頸單純增生鱗化、CIN及宮頸癌，并明確CIN分級，單純采取石蠟切片HE染色尚存在不足，而結(jié)合p16及Ki-67免疫組化染色協(xié)助診斷可提高準確性[8]。p16作為抑癌基因，是抑制腫瘤細胞生長的關(guān)鍵因子，若表現(xiàn)不正常，則提示細胞生長失去控制，向腫瘤細胞轉(zhuǎn)化，具有病理診斷價值。Ki-67作為核抗原，具有半衰期短特征，可體現(xiàn)細胞的增值活性，對判斷HPV感染價值較高，若出現(xiàn)異常，染色強度高，提示病變程度高。本次研究結(jié)果顯示宮頸浸潤性鱗癌及CINⅠ-Ⅲ的p16及Ki-67檢測結(jié)果陽性高，且宮頸浸潤性鱗癌表達強度最高，CINⅢ與其相近，CINⅡ-Ⅰ相對較低，但仍以陽性為主，而宮頸單純增生鱗化、尖銳濕疣以陰性為主，提示免疫組化p16、Ki-67檢測可作為宮頸癌前病變及宮頸癌檢出的可靠依據(jù)，對陽性病例深入分析明確表達強度可實現(xiàn)不同級別病變的鑒別，但宮頸浸潤性鱗癌與CINⅢ相近，應聯(lián)合其他方法進一步鑒別。與[7]結(jié)果“經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，P16INK4A、Ki-67與HPV感染呈正相關(guān)”相近。

綜上所述，CIN及宮頸癌診斷中可結(jié)合免疫組化p16、Ki-67檢測進行病情程度判斷，制定可靠的治療方案，研究價值較高。