不同微生物處理甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊生長性能、養(yǎng)分消化和瘤胃發(fā)酵的影響

王 坤，周 波，穆勝龍，劉 林，蔣小剛，鄒彩霞*，何仁春

（1.廣西大學(xué)動物科技學(xué)院，廣西南寧 530005；2.廣西扶綏廣羊農(nóng)牧有限公司，廣西扶綏 532100；3.廣西畜牧研究所，廣西南寧 530002）

努比亞山羊原產(chǎn)于非洲東北部的埃及、蘇丹等國家。2009 年5 月，廣西從云南省引進努比亞山羊，經(jīng)過10 年的飼養(yǎng)已初具規(guī)模[1-2]。冬季粗飼料資源匱乏是廣西亟需解決的問題，而每年冬季有大量的甘蔗尾葉可供利用[3-4]。Couto 等[5]研究表明，甘蔗尾葉可以替代高精料肉牛日糧中的甘蔗，可作為一種低成本的粗飼料來源。辛明等[6]研究發(fā)現(xiàn)，飼喂甘蔗尾葉可以顯著提高育肥羊的生長性能。可見，甘蔗尾葉可以作為牛羊粗飼料進行飼用，但由于廣西屬于亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)、高溫且潮濕等氣候原因，飼料儲存易變質(zhì)，所以需要采取青貯方式進行儲存。Ando 等[7]研究發(fā)現(xiàn)在青貯中添加乳酸菌可以提高飼草青貯飼料的品質(zhì)，增加動物采食量。Elli 等[8]試驗發(fā)現(xiàn)，在青貯中添加植物乳桿菌、布氏乳桿菌和乳酸乳球菌的混合青貯（三葉草、玉米和黑麥草為青貯原料）會提高青貯飼料中的有機物消化率。周雄等[9]試驗發(fā)現(xiàn)，無添加劑的自然青貯甘蔗尾葉替代一定比例王草可在一定程度上改善黑山羊生長性能，且對其血清生化指標(biāo)無不利影響。雖然有很多學(xué)者使用不同微生物處理的青貯飼料進行飼養(yǎng)試驗，但有關(guān)甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊生長性能、血液生化指標(biāo)和瘤胃發(fā)酵的影響研究尚未見報道。為此，本試驗旨在研究飼喂不同微生物處理甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊生長性能、血液生化指標(biāo)和瘤胃發(fā)酵指標(biāo)的影響，為開發(fā)利用甘蔗尾葉作為努比亞山羊飼料來源提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及試驗設(shè)計 選取72 只初始體重為 24.5 kg的努比亞山羊去勢公羊，根據(jù)山羊初始體重按照隨機區(qū)組試驗設(shè)計分為4 個處理組，每組18 只羊，分組圈養(yǎng)，每個圈欄設(shè)置1 個飼槽，預(yù)試期7 d 和正試期42 d。采用單因素試驗設(shè)計，取4 份切斷至2～3 cm 的甘蔗尾葉，用噴霧器均勻?qū)⒄麴s水或者菌液噴灑在甘蔗尾葉上。對照組使用蒸餾水；T1 組選用實驗室從甘蔗尾葉青貯中分離制得的菌液，其原菌液菌種及活菌數(shù)為植物乳桿菌（7.70×107CFU/mL）、干酪乳桿菌（1.64×108CFU/mL）、發(fā)酵乳桿菌（4.65×108CFU/mL）和鼠李糖乳桿菌（5.25×107CFU/mL）；商業(yè)發(fā)酵劑（T2）組選用市場上購買的菌液，其原菌液菌種及活菌數(shù)為黑曲霉（2.10×107CFU/mL）、枯草芽孢桿菌（1.20×108CFU/mL）、米曲霉（1.15×107CFU/mL）；商業(yè)發(fā)酵劑（T3）組選用市場上購買的另一款菌液，其原菌液菌種及活菌數(shù)為枯草芽孢桿菌（1.35×107CFU/g）、乳酸片球菌（1.16×107CFU/g）。菌液添加量都為1 mL/kg 甘蔗尾葉，均勻噴灑各組菌液后通過壓捆打包機制成袋裝青貯，在室內(nèi)存放，青貯45 d 后開窖進行飼養(yǎng)試驗。

1.2 試驗日糧及管理 試驗所用飼料原料均為廣西扶綏廣羊農(nóng)牧有限公司提供。參考張麗英[10]的方法測定試驗飼料原料及飼糧的營養(yǎng)成分，飼料粗飼料營養(yǎng)成分見表1，試驗飼糧組成及營養(yǎng)成分見表2。

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 生長性能 記錄每天每組圈欄料槽中的飼喂料重以及剩料重，根據(jù)試驗天數(shù)、總耗料量以及各飼料原料的干物質(zhì)計算各組試驗牛平均日采食量（ADFI）、平均干物質(zhì)采食量（ADMI）。

ADFI=（總飼喂量－總剩料量）/試驗總天數(shù)

ADMI=ADFI×飼料中的干物質(zhì)含量（%）

分別在試驗第0 天和第42 天早上空腹稱取各組每只羊體重，根據(jù)試驗天數(shù)、總增重和平均日采食量計算平均日增重（ADG）、耗料增重比（F/G）。

1.3.2 血清采集 試驗結(jié)束時，每個組選取6 只羊進行頸靜脈采血，然后靜置離心取血清，并-20℃保存待測。

1.3.3 養(yǎng)分消化率的測定 于試驗結(jié)束前6 d 進行糞樣采集工作（持續(xù)5 d），隨機選取6 只體況接近的羊并做上標(biāo)記，試驗采用直腸取糞，每只羊采集30 g 羊新鮮糞樣，加3 mL 濃度為10%硫酸混合均勻進行固氮后冷藏（-20℃）保存，同時采集各組飼料樣本。利用酸不溶灰分法[11]測定養(yǎng)分消化率。

1.3.4 瘤胃液采集 各組試驗羊于試驗正試期最后1 d 采集瘤胃液，每個組隨機抽取6 只體況接近的山羊，于晨飼前通過羊口腔瘤胃液采集器采集瘤胃液，棄掉前面20 mL 瘤胃液后收集100 mL，取15 mL 置于15 mL 無菌離心管內(nèi)用于瘤胃微生物測定，然后用4 層紗布過濾后立即測定pH（pHs-3C 型），將濾液分裝后-20℃保存，用于測定NH3-N 和揮發(fā)性脂肪酸（VFA）。

1.3.5 血液生化指標(biāo)測定 血液樣品使用KHB-1280 全自動生化儀測定分析，測定總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、尿素氮（UN）、葡萄糖（GLU）、白球比（A/G）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、甘油三酯（TG）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、肌酐和堿性磷酸酶（ALP）。

1.3.6 氨態(tài)氮的測定 參考馮宗慈等[12]的比色法測定瘤胃液的NH3-N。

1.3.7 VFA 的測定 參考曹慶云等[13]的氣相色譜儀測定，并作相應(yīng)的改進。使用氣相色譜（島津GC-2014C）對瘤胃液中乙酸、丙酸和丁酸進行測定。色譜條件如下：色譜柱：WondaCAP WAX；氣化室溫度：200℃；檢測器溫度：220℃；程序升溫：初始溫度110℃保持0 min，以10℃/min 升溫至180℃保持2 min；載氣及流速：高純氮氣為160 kPa，總流量為104 mL/min，柱流量為1.98 mL/min，吹掃流量為3 mL/min，氫氣為40 mL/min，空氣為400 mL/min；分流比為50:1。

1. 4 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)先經(jīng)Excel 2010 初步處理，再用SPSS 19.0 軟件中的單因素方差分析，采用Duncan′s法進行多重比較檢驗，P＜0.05 表示差異顯著。結(jié)果用平均值表示，各處理變異程度用標(biāo)準(zhǔn)誤表示（SEM）。

表1 飼料粗飼料營養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

表2 飼糧組成及其營養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

2 結(jié)果與分析

2.1 甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊生長性能的影響 由表3 可知，各組間努比亞山羊的初重、末重、ADG 及ADMI 差異均不顯著。T1 組的 F/G 小于 T3 組（P＜0.05），低于對照組和T2 組（P＞0.05）。

表3 甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊生長性能的影響

2.2 甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊養(yǎng)分消化率的影響 由表4 可知，與對照組相比，T1、T2、T3 組的CP 表觀消化率分別提高了8.1%、4.31%、3.35%（P＜0.01）；T2 組NDF 的表觀消化率提高了4.34%，T3 組的GE、有機物（OM）、NDF、ADF 的表觀消化率提高了3.93%（P＜0.05）、3.18%（P＜0.05）、6.18%（P＜0.01）、5.94%（P＜0.01）。

2.3 甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊血液生化指標(biāo)的影響 由表5 可知，各組間TP、ALB、GLB、A/G、TC、HDL-C、LDL-C、TG、UN、AST、ALT、GLU、ALP 均差異不顯著。

表4 甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊養(yǎng)分表觀消化率的影響 %

表5 甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊血液生化指標(biāo)的影響

2.4 甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊瘤胃發(fā)酵的影響 由表6可得，各組間山羊瘤胃中乙酸、丙酸、丁酸及乙酸/丙酸沒有顯著變化。相比對照組，T3 組的pH 升高了0.18（P＜0.05）；T2、T3 組的 NH3-N 有所降低（P＜0.05）。T3 組的總揮發(fā)性脂肪酸（TVFA）高于其他組（P＜0.05）。

表6 不同微生物青貯甘蔗尾葉對努比亞山羊瘤胃發(fā)酵的影響

3 討 論

3.1 甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊生長性能的影響 青貯飼料添加劑不僅可以提高青貯飼料的保存效率，還可以提高反芻動物的生產(chǎn)性能。目前商業(yè)上大多使用同型發(fā)酵乳酸菌，因為它們可以快速產(chǎn)生大量的乳酸，迅速降低pH。青貯飼料的乳酸菌還可通過抑制青貯飼料和瘤胃中的有害微生物，或產(chǎn)生可增強瘤胃中特定微生物種群功能的有益物質(zhì)來提供益生菌效應(yīng)，從而提高動物的生產(chǎn)性能[14]。T1 組的菌種都屬于乳桿菌屬，包括同型發(fā)酵乳酸菌和兼性異型發(fā)酵乳酸菌；T2 組包括2 種真菌以及枯草芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌是動物飼料中常添加的益生菌種，具有顯著的益生作用[15]；T3 組包括枯草芽孢桿菌以及一種同型乳酸發(fā)酵乳酸菌，乳酸片球菌有一定的抑菌效果。

Rabelo 等[16-17]研究表明，添加植物乳桿菌和布氏乳桿菌或枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌的玉米青貯飼料不會改善育肥肉牛的生長性能；飼喂添加微生物處理的玉米青貯飼料對綿羊ADMI 的增加不顯著。本試驗飼喂不同微生物處理的青貯甘蔗尾葉對努比亞山羊末重、ADG 和ADMI 與自然青貯組差異也不顯著，但T1 組的混合青貯相比其他3 組有更好的飼料效率，原因可能是T1 組的微生物組合是實驗室從甘蔗尾葉本身的微生物篩選所得，相比2 組商業(yè)其更適合甘蔗尾葉，可能產(chǎn)生了增強瘤胃中特定微生物種群功能的有益物質(zhì)。本試驗結(jié)果顯示，T1 組的努比亞山羊試驗期間每增重1 kg，比其他組平均節(jié)省1.12 kg 飼料，且T1 組菌液的制作成本不高，在商業(yè)化后可能得到更大的經(jīng)濟效益，從生長性能及經(jīng)濟效益上說，T1 組的微生物組合更適合用于甘蔗尾葉青貯。

3.2 甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊養(yǎng)分表觀消化率的影響 消化率是反映動物對養(yǎng)分?jǐn)z取的多少，同時也是反映動物生長性能的重要指標(biāo)。程連平等[18]研究表明，相比對照組，湖羊飼喂添加枯草芽孢桿菌的發(fā)酵飼糧后羔羊的CP、ADF 和NDF 表觀消化率顯著提高。本試驗添加枯草芽孢桿菌和乳酸片球菌的商業(yè)菌種組CP、NDF 和ADF 的表觀消化率相比對照組也顯著提高，可能是由于枯草芽孢桿菌與乳酸片球菌的混合加快了酶的反應(yīng)，改變了甘蔗尾葉的纖維素結(jié)構(gòu)，從而提高了飼糧中NDF 和ADF 的利用率。雖然T3 組的GE、OM、NDF、ADF 的表觀消化率都顯著高于其他組，但并未在生長性能上有所體現(xiàn)，可能是因為羔羊的消化主要依靠瘤胃微生物，但消化的產(chǎn)物不能很好地被羔羊吸收利用而造成了營養(yǎng)流失。本試驗中添加植物乳桿菌、干酪乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌和鼠李糖乳桿菌組成的T1 組顯著提高CP 的表觀消化率與Rabelo 等[16]研究結(jié)果不一致，可能是青貯原料不同所造成的青貯效果不同所致，CP消化率顯著提高使T1 組的羔羊獲得了更高的飼料效率。

3.3 不同微生物處理甘蔗尾葉青貯對努比亞山羊瘤胃發(fā)酵指標(biāo)的影響 一般情況下瘤胃pH 變化范圍在5.00～7.50[19]。本試驗中各組瘤胃pH 均在正常范圍。瘤胃液NH3-N 最佳水平一般在5.0～30.0 mg/dL[20]。本試驗中NH3-N 的濃度在 13.24～18.67 mg /dL，且與 Gandra 等[21]研究甘蔗青貯瘤胃液NH3-N 的結(jié)果類似。在奶牛日糧中添加枯草芽孢桿菌會提高乙酸、丙酸和TVFA 濃度[22]；程連平等[18]研究發(fā)現(xiàn)，在羔羊飼糧添加富硒酵母或枯草芽孢桿菌都能夠顯著提高瘤胃液NH3-N、乙酸、丙酸的含量。本試驗添加微生物青貯對乙酸、丙酸、丁酸沒有影響，與上述結(jié)果不一致，可能是發(fā)酵方法不同所導(dǎo)致，日糧中添加菌種發(fā)酵與青貯過程中的發(fā)酵效果不同，青貯發(fā)酵受乳酸菌的影響較大。T3 組的TVFA 顯著高于其他組，可能與其平均干物質(zhì)采食量高于其他組有關(guān)。

4 結(jié) 論

本試驗結(jié)果表明，飼喂努比亞山羊的甘蔗尾葉青貯飼料中，添加植物乳桿菌、干酪乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌和鼠李糖乳桿菌混合青貯能提高飼料效率；4 種處理組對血液生化指標(biāo)無顯著影響；添加枯草芽孢桿菌和乳酸片球菌的混合青貯各養(yǎng)分的表觀消化率更高，并且增加瘤胃內(nèi)TVFA 含量。